50 Hz弱磁场诱导离体表皮生长因子受体聚集

利用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)观测到浓度为5滋g/mL离体表皮因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白在50Hz磁场作用下发生聚集,其颗粒呈现倍数变大和变高趋势;利用透射电镜(transmission electronic microscope,TEM)也得到类似的蛋白变大趋势。结果表明,在AFM和TEM下观察到,磁场作用后蛋白聚集颗粒的平均半高宽(平均直径)由(21.7±2.2)nm(12.5nm)增大到(33.0±4.0)nm(23nm),最可几高度由(1.42±0.18)nm增加到(3.08±0.17)nm。这种由磁场引起的聚集效应呈时间依赖性。利用Alexa-488-EGF标记EGFR观察了磁场暴露对细胞上EGF受体表达的影响,提示EGF受体的表达可能稍有上调。上述结果提示50Hz磁场信号可能通过影响EGFR的膜上聚集状态来影响下游信号通路。这种对信号通路的影响可能是电磁场生物性效应的一种机制。     

羧甲司坦通过巯基上调HDAC2 抑制气道炎症

目的:探究羧甲司坦(carbocysteine,S-CMC)在气道炎症中对组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase2,HDAC2)表达的调控作用和机制。方法:建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)炎症模型、短期烟熏Sprague Dawely(SD)大鼠气道炎症模型,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的水平,蛋白免疫印迹(Western blotting)及免疫组化染色检测HDAC2的表达。结果:与对照组相比,模型组NR8383细胞中HDAC2的表达明显降低至对照组的0.47±0.11倍,细胞上清IL-6、IL-8水平明显升高,分别为157.6±15.0 pg/m L、378.0±17.9 pg/m L;模型组SD大鼠肺组织中HDAC2的表达明显降低到对照组的0.42±0.12倍,气道灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-6、IL-8分别为162.2±51.4 pg/m L、331.4±62.7 pg/m L,炎症因子水平明显升高。而与模型组比较,经S-CMC处理后细胞中HDAC2表达明显上调至对照组的1.23±0.05倍,细胞上清中IL-6为92.3±4.3 pg/m L,IL-8为300.7±17.7 pg/m L,炎症因子水平降低;肺组织中HDAC2为对照组的0.78±0.10倍,表达水平明显升高,BALF中IL-6、IL-8水平分别为100.6±32.7 pg/m L,185.0±50.4 pg/m L(P0.05)炎症因子明显降低。组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑霉素A(trichostatin,TSA)能够抑制NR8383细胞中HDAC2的表达至对照组的0.19±0.06倍,增加IL-6(197.0±42.6 pg/m L)、IL-8(567.0±97.4 pg/m L)水平,该作用可以被S-CMC所逆转(P0.05)。另外,加入巯基供体二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)可增强S-CMC上调HDAC2表达,降低IL-6、IL-8的作用,而巯基耗竭剂丁硫氨酸亚砜亚胺(buthionine-sulfoximine,BSO)可减弱S-CMC的作用(P0.05)。进一步表明S-CMC调控HDAC2的过程与巯基相关。结论:S-CMC可通过巯基上调HDAC2的表达抑制气道炎症。     

氧化应激对腺病毒E1A蛋白活化NF-κB转录活性的影响及其机制研究

目的:探讨腺病毒E1A蛋白对细胞内抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)水平的影响及氧化应激对腺病毒E1A蛋白介导的核因子-κB(NF-κB)转录活化的影响。方法:构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×105个细胞,试验重复3次。采用H2O2刺激细胞,检测细胞内GSH水平。脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,丁胱亚磺酰亚胺(BSO)进行干预,Western blot法检测NF-κB和AP-1蛋白的表达。结果:E1A+细胞内GSH基础水平与E1A-比较无显著差异,但在H2O2作用后没有诱导出GSH含量的上升,表现为下降而低平的趋势,去除氧化剂后,仍低于正常水平。E1A-细胞在氧化剂的作用后呈明显的上升趋势,去除氧化剂后仍高于基础水平。细胞内NF-κB蛋白表达(积分吸光度值):刺激前E1A+细胞分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在LPS和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9～89.9±1.6和94.1±1.9～99.8±1.6,均明显高于对照组(刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8～80.8±3.6和73.4±4.9～83.2±6.7)。给予BSO预处理后再用LPS和TNF-α刺激,E1A-细胞NF-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.22±0.16和1.75±0.13)与LPS或TNF-α单独作用组(1.25±0.18和1.69±0.19)无明显差别;E1A+细胞NF-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.75±0.10和2.26±0.21)明显高于LPS或TNF-α单独作用组(1.35±0.12和1.80±0.14)。结论:腺病毒潜伏感染持续表达E1A蛋白可以影响细胞GSH,降低细胞对氧化应激的耐受性,并可能通过此机制造成NF-κB异常转录活化,而GSH的降低又进一步放大了E1A介导的NF-κB转录活化作用。     

抑制乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱受体也有影响

通常认为,乙酰胆碱酯酶(AChE)通过水解乙酰胆碱(ACh)影响突触传递。抑制AChE.ACh水解减少,其突触后效应增强。然而,Fossier等最近在加利福尼亚海螺(aplysia Californica)的离休口腔神经节(buccal、ganglion)制备发现,抑制AChE对乙酰胆碱受体(AChR)也有影响。Fossier等在生理营养液连续灌流下,固定该制备突触前、后神经元的膜电位,并维持突触后神经元的Cl~-翻转电位不变,观察灌流液中添加各种AChE抑制剂后该神经节中的胆碱能中间神经元对胆碱类激动剂的突触后电流(PSC)反应的变化。发现:经有机磷类AChE抑制剂处理后,该制备不仅对ACh的PSC反应增强为静息电流的269±32%,而且对不被AChE水解的卡巴可(carbachol)的反应也增强为176±7%。经氨基甲酸酯类AChE抑制剂普鲁斯的明(prostigmine)和肟类化合物contrathion(AChE有机磷中毒的复活剂,也是一种迅速可逆的AChE强抑制剂)处理后,其PSC反应类似。     

用终止剂改进超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法

以二硫苏糖醇(DTT)或L-抗坏血酸(Vit C)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)或Vit C(5%),约50μl,终止自氧化反应.终止后,反应体系的420nm光吸收在lh内保持恒定.终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近,一个酶活单位相当于纯SOD 100μg/L.     

细胞膜的形貌结构及其功能信息

利用原子力显微镜（atomic force microscopy,AFM）比较观察了从冬小麦（Triticum aestivum）叶肉细胞中分离的生活原生质体和失水死亡的原生质体质膜的表面特性．其结果表明,生活原生质体质膜显示极性化状态,不同的细胞及区域质膜脂质分子层的活性状态不同,质膜表面凸凹不平,具有明显的区域化结构．有的细胞质膜表面呈现规则的网格状结构,似脂质与蛋白质结合的复合体,经测定这种结构的直径为（15．8±0．09）nm,高度为（1．9±0．3）nm．通过二维和三维角度观察,在分离的生活原生质体质膜表面上分布着许多颗粒状物．经蛋白酶的处理和作用后,这种质膜表面的颗粒状物普遍发生了构象变化,大的颗粒状物变得松散,宽度增加,高度明显降低．显示这些颗粒状物可能为膜表面的嵌镶蛋白．这些质膜蛋白块大小不等,分布不规则,大的蛋白块直径约在200～440nm之间,高度为28～50nm;中等大小的蛋白块直径在40～60nm之间,高度在1．8～5nm;而小蛋白质颗粒直径为12～40nm,高度在0．7～2．2nm．大的蛋白质块上有微孔．此外,分离的生活原生质体质膜表面存在着许多由内吞作用形成的“内陷穴”,一般在15gm。的质膜上有16个大小不等的穴．较大的穴口平均直径为139nm,深度为7．2nm,较小的穴口直径平均是96nm,深度为2．3nm．原生质体失水死亡后,质膜表面极性化状态降低,质膜出现皱褶,脂质分子层结构信息显示扁平状态,嵌镶的蛋白质颗粒少．在这种脱水死亡的原生质体质膜表面上仍能观察到内吞作用形成的内陷穴,但由于原生质体脱水形成皱褶,穴的口径缩小,深度增加．一般大的穴口平均直径为47．4nm,深度为31．9nm;小口径直径为26．5nm,深度为43nm．经测量冬小麦细胞质膜厚度为6．6～9．8nm,有蛋白质的区域较厚．     

二硫苏糖醇处理导致大豆叶片两光系统间激发能分配失衡

通过叶绿素荧光技术研究了二硫苏糖醇(1,4-dithiothreitol, DTT)对大豆叶片光系统I(PSI)和光系统Ⅱ(PSⅡ)间激发能分配的影响.结果显示:DTT处理没有影响叶片最大光化学效率(Fv/Fm),但光下叶绿素荧光降低比率(Rfd)下降;强光下,DTT处理叶片PSⅡ开放反应中心激发能捕获效率(Fv′/Fm′)比对照高30%～40%;分配给PSⅠ的激发能比对照叶片低约30%,分配给PSⅡ的激发能比对照叶片高20%左右,激发能分配严重偏离平衡状态;DTT处理叶片PSⅡ的激发能压力(1-qP)较对照高,但非光化学猝灭(qN)明显比对照低;进一步的实验揭示DTT的引入抑制了玉米黄质(Z)的生成和状态转换(qT).据此,推测DTT可能通过抑制天线色素的调节能力导致两光系统间激发能分配失衡.     

胎盘膜胰岛素受体结合活性与巯基和二硫键的关系

部分纯化的人胎盘膜经DTT还原,NEM,DTNB修饰蛋白巯基后,改变了胰岛素受体的结合活性。Scatchard分析表明,当DTT浓度较低时,亲和常数基本不变;高亲和位点数略微升高,较高浓度的DTT处理时,结合位点数和亲和常数均有所下降。DTT还原膜蛋白二硫键后再用NEM,DTNB修饰巯基,胰岛素结合活性进一步下降。NEM或DTNB单独处理结合活性下降较少。胰岛素与受体结合后,用DTT洗后剩余的结合胰岛素比缓冲液洗低,表明有一部分胰岛素以二硫键与受体共价结合。在0—5mmol/L浓度范围内,随着DTT处理浓度的升高,这种以二硫键共价结合胰岛素增加。     

硒与巯基作用稳定红细胞膜骨架

Na_2SeO_3可以减少人红细胞膜血影收缩蛋白(Spectrin)从膜骨架上解离下来.当含有巯基的二硫苏糖醇(DTT)存在下或红细胞膜用碘代乙酰胺(IAA)封闭巯基后.Na_2SeO_3的效应就不再呈现.用与巯基结合的荧光探针:N-[3-芘]-马来酰胺(N-[3-P]-M)来测试不同浓度Na_2SeO_3存在下红细胞膜的荧光强度.结果表明,随着Na_2SeO_3浓度增加,荧光强度就相应降低,这都说明硒是通过与红细胞膜巯基相作用来发挥效应的.~(31)P-NMR测试表明,人红细胞膜在加硒条件下透析,化学位移各向异性(Δσ)值低于不加硒的样品,这提示硒与红细胞膜蛋白巯基作用后红细胞膜脂-蛋白质的相互作用发生了变化.根据实验结果对硒作用后可能引起膜蛋白构象的变化也进行了讨论.     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶动力学及抑制剂的研究

研究了人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的动力学。底物GSH和1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)的km分别为0.109和0.870mmol/L。苯唑青霉素和先锋霉素Ⅰ能抑制GST—π,以先锋霉素较明显,属非竞争性抑制。溴磺酜对CDNB也是非竞争作用,但胆红素则对CDNB竞争而对GSH非竞争地抑制酶活力。S-正辛烷和S-正已烷谷胱甘肽与GSH竞争而与CDNB非竞争地抑制GST-π。已充分证明GST-π所催化的双底物反应属随机顺序机制。化学修饰实验发现:巯基、胍基、氨基、羧基和吲哚基可能参与酶活性中心的组成。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

医疗机构合理用药评价模型的构建研究

目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。     

棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。     

Photoregulation of seed germination of wild-type and of an aurea-mutant of tomato

Seed germination of an aurea mutant of tomato ( Lycopersicon esculentum Mill.) is promoted by continuous irradiation with red, far-red or long-wavelength far-red (758 nm) light as well as by cyclic irradiations (5 min red or 5 min far-red/25 min darkness). Far-red light applied immediately after each red does not change the germination behaviour. Seed germination of the isogenic wild-type, cv. UC-105, is promoted by continuous and cyclic red light while it is inhibited by continuous and cyclic far-red light and by continious 758 nm irradiation. Far-red irradiation reverses almost completely the promoting effect of red light. The promoting effect (in the aurea mutant) and the inhibitory effect (in the wild-type) of continuous far-red light do not show photon fluence rate dependency above 20 nmol m⁻² s⁻¹. It is concluded that phytochrome controls tomato seed germination throgh low energy responses in both the wild type and the au mutant. The promoting effect of continuous and cyclic far-red light in the au mutant can be attributed to a greater sensitivity to P_fr.     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。