用RFLP和PCR—RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ,用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化,结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段,其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中,用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ）,用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。     

内毒素诱导兔肺动脉平滑肌iNOS生成中NF—κB作用的探讨

目的和方法：实验采用内毒素的主要成分脂多糖（ＬＰＳ）离体孵育去内皮兔肺动脉环方法,观察血管收缩性的改变,并加入诱生型ＮＯ生成抑制剂氨基胍（ＡＧ）以及核转录因子（ＮＦκＢ）的拮抗剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（ＰＤＴＣ）后观察了血管收缩性的变化。结果：ＬＰＳ孵育１６ｈ后血管环对新福林（ＰＥ）的反应性明显减低（Ｐ＜０．０１）,与ＬＰＳ孵育组比较,ＬＰＳ与ＡＧ共同孵育后血管环反应性增加,ＰＤＴＣ预孵育血管环后再用ＬＰＳ孵育,血管环反应性也较ＬＰＳ孵育的血管环反应明显增加。经ＬＰＳ孵育的血管环用ＮＯ生成抑制剂Ｌ硝基精氨酸（ＬＮＮＡ）处理后,对血管收缩剂ＰＥ的反应性有明显增加,而ＰＤＴＣ预孵育组的血管环用ＬＮＮＡ处理后收缩反应性无明显增加。结论：ＬＰＳ离体孵育去内皮肺动脉后,血管平滑肌ｉＮＯＳ诱生,致使血管反应性降低,而ＮＦκＢ在肺动脉平滑肌ｉＮＯＳ诱生中起信息传递作用。     

扩增片段长度多态性(AFLP)——一种新的分子标记技术

ＡＦＬＰ（扩增性片段长度多态性）是一种新的ＤＮＡ分子标记。与ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ相比,ＡＦＬＰ具有在一次试验中可同时观察到大量的限制性片段的优点。本文阐述了ＡＦＬＰ的原理和方法,综述了ＡＦＬＰ目前在植物遗传育种研究中的应用进展,并对ＡＦＬＰ技术在植物遗传育种中的应用前景提出了初步设想。     

水稻的AFLP研究初报——反应条件的优化及对温敏核不育等位突变系的分析

通过对５４６０Ｓ和５４６０Ｆ这一对水稻等位突变系的ＡＦＬＰ分析,比较了ＡＦＬＰ与ＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ检测ＤＮＡ多态性的相对效率。结果表明,这３种分子标记的ＤＮＡ多态性检出效率依次为ＡＦＬＰ＞ＲＡＰＤ＞ＲＦＬＰ;找出了水稻ＡＦＬＰ分析的最适反应条件;在这对等位突变系之间找到了一些多态性ＡＦＬＰ产物,已完成了对４个多态性ＡＦＬＰ产物的克隆,其中３个为单拷贝顺序;用这３个单拷贝克隆的混合物为探针,对作者自己构建的５４６０Ｓ水稻的ＢＡＣ库进行了筛选,获得了１２个阳性克隆,为今后ＢＡＣ库的筛选打下了基础。此外,对上述３种分子标记各自的优缺点及它们在ＤＮＡ多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。     

PDGF-BB多肽刺激肺动脉平滑肌细胞PDGFmRNA表达

应用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记的血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）Ａ和ＰＤＧＦＢ链ｃＤＮＡ探针,原位检测了ＰＤＧＦＢＢ多肽对单层培养的肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ基因表达的影响。结果表明,无血清培养的肺动脉平滑肌细胞内ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ阳性表达颗粒稀少,ＰＤＧＦＢＢ多肽培养的肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ阳性表达颗粒增多,较密集的分布于整个细胞内。全自动图像分析结果显示,ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达,ＰＤＧＦＢＢ培养组分别为无血清培养组的１７４倍和１７倍,差异显著（Ｐ＜００１）。本研究结果提示,ＰＤＧＦＢＢ多肽能刺激肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦｍＲＮＡ表达,促进其分泌,在慢性低氧性肺动脉高压血管平滑肌细胞增殖中具有重要作用     

AFLP标记在果树遗传育种研究中的应用

1993年 ,Ｚａｂｅａｕ等发明了一项专利技术 ,扩增片段长度多态性 (ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＡＦＬＰ) ,该技术结合了ＲＦＬＰ技术和ＰＣＲ技术的优点 ,以其高效性和高重复性等特点 ,被广泛应用于多种植物的遗传育种研究。1 .ＡＦＬＰ技术的原理和特点ＡＦＬＰ技术是基于对限制性片段的选择性扩增 ,基因组ＤＮＡ被限制性内切酶切割后 ,将限制性片段末端连上双链接头 ,根据接头序列和相邻的限制性位点序列设计引物对限制性片段进行扩增。扩增产物经电泳检测后再比较其谱带的差异。ＡＦＬＰ…     

地塞米松、噻庚啶和山莨菪碱对LPS诱导大鼠肝脏TNFα表达的影响

地塞米松（Ｄｅｘ）、噻庚啶（Ｃｙｐ） 和山莨菪碱（Ａｎｉ） 对脂多糖（ＬＰＳ） 诱导的大鼠肝脏ＴＮＦα表达的影响。Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０ 只, 静脉注射ＬＰＳ（ＥｃｏｌｉＯ１１１Ｂ４ ５ｍ ｇ／ｋｇ） 后, 立即静脉给予Ｄｅｘ ５ｍ ｇ／ｋｇ、Ｃｙｐ５ｍ ｇ／ｋｇ 或Ａｍ ｉ１０ｍ ｇ／ｋｇ,于ＬＰＳ攻击后２ｈ 取动物的肝脏,ＡＰＡＡＰ法进行ＴＮＦα免疫组织化学研究,Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ 杂交分析ＴＮＦαｍ ＲＮＡ 表达水平。结果发现ＬＰＳ攻击后２ｈ, 肝脏ＴＮＦαｍ ＲＮＡ 表达水平显著增高, 肝脏枯否氏细胞胞浆内有大量的ＴＮＦα红染颗粒。Ｄｅｘ、Ｃｙｐ 或Ａｎｉ均能显著降低大鼠肝脏ＴＮＦαｍ ＲＮＡ 水平和ＴＮＦα含量。结果表明Ｄｅｘ、Ｃｙｐ 和Ａｎｉ均显著抑制ＬＰＳ诱导的ＴＮＦα基因表达, 可能有抗感染性休克作用。     

利用RFLP、SSR、AFLP和RAPD标记分析玉米自交系遗传多样性的比较研究

利用 ＲＦＬＰ、ＳＳＲ．ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ ４种分子标记方法研究了 １５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性信息量（ＰＩＣ）最大（０．５４）,ＡＦＬＰ标记位点最小（０．３６）,但ＡＦＬＰ标记具有最高的多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似系数相关性显著,比较相关系数表明 ＲＡＰＤ可靠性较低。依据 ４种分子标记结果将 １５个供试自交系划分为塘四平头、旅大红骨、兰卡斯特、瑞德和ＰＮ共５个类群,与系谱分析基本一致。认为ＳＳＲ和ＲＦＬＰ两种分子标记方法适合进行玉米种质遗传多样性的研究。     

AFLP分子标记及其在植物育种上的应用

扩增酶切片段多态性（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＲｓｔｒｉｃｉｔｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,简称ＡＦＬＰ）是由Ｚａｂｅａｕ等１９９２年发明的一项新的ＤＮＡ指纹技术,它结合了ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术的特点,具有ＲＦＬＰ技术的可靠性和ＰＣＲ技术高效性,其基本原理是对基因组ＤＮＡ酶切片段的选择性扩增,ＡＦＬＰ扩增片段的谱带数取决于采用的内切酶及引物３′端选择碱基的种类数目和所研究基因组的复杂性,实验     

六出花切花的瓶插花期延长

六出花切花的瓶插花期延长李宪章（中国科学院植物研究所,北京１０００９３）ＬＩＦＥＥＸＴＥＮＳＩＯＮＯＦＴＨＥＣＵＴＦＬＯＷＥＲＯＦＡＬＳＴＲＯＭＥＲＩＡＡＵＲＡＮＴＩＡＣＡＷＩＴＨＦＬＯＲＡＬＰＲＥＳＥＲＶＡＴＩＶＥＳＬｉＸｉａｎｚｈａｎｇ（Ｉ...     

用PCR—RFLP方法研究藏族HLA0—DQA1和—DQB1基因多态性

应用目前ＨＬＡ研究领域中成熟的、有效的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术,从ＤＮＡ水平对藏族健康群体进行了ＨＬＡ－ＤＱＡ１（４９人）和－ＤＱＢ１（４９人）基因分型,这在国内外属首次。所采用的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术是在ＨＬＡ－ＤＱＡ１和－ＤＱＢ１各等位基因全部序列已知的情况下,对其第２个外显子碱基序列扩增进而进行ＲＦＬＰ分析的方法。这种方法得到的ＲＦＬＰ的所有片段都是已知序列,因而精确度很高,同时为     

利用RFLP,SSR,AFLP和RAPD标记分析玉米自效系遗传多样性的比较研究

利用ＲＦＬＰ、ＳＳＲ、ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ４种分子标记方法研究了１５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６７６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似自交系划分     

社鼠核型的研究

社鼠核型的研究ＫＡＲＹＯＴＹＰＥＳＯＦＮＩＶＩＶＥＮＴＥＲＣＯＮＦＵＣＩＡＮＵＳ（ＲＯＤＥＮＴＩＡ：ＭＵＲＩＤＡＥ）关键词核型Ｃ带Ｇ带ＡｇＮＯＲｓ社鼠ＫｅｙｗｏｒｄｓＫａｒｙｏｔｙｐｅ,Ｃｂａｎｄｉｎｇ,Ｇｂａｎｄｉｎｇ,ＡｇＮＯＲＳ,Ｎ...     

AFLP标记及在植物中的应用

ＡＦＬＰ是 1 992年由荷兰Ｋｅｙｇｅｎｅ公司Ｚａｂｅａｕ、Ｖｏｓ在ＰＣＲ和ＲＦＬＰ的基础上发展起来的一种检测ＤＮＡ多态性的新方法[1] ,并于1 993年获得欧洲专利局专利。与ＲＦＬＰ类似 ,ＡＦＬＰ也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测ＤＮＡ多态性的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＦＬＰ是以传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交为基础的 ,操作繁琐 ,对ＤＮＡ多态性的检出的灵敏度不高 ,在连锁图上有很多大的空间区。随着ＰＣＲ技术广泛应用 ,对分子标记技术的发展产生了巨大的推动作用。除了ＲＦＬＰ(限制性内切酶酶切片段长度多态性标记 …     

大鼠酰胺化酶的信号肽引导的昆虫细胞表达外泌系统

将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建ＰＡＢＣｈＧＲＦ（Ｇｌｙ）、ＰＡＢＣＩＧＦＩ融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒ｐＢａｃＰＡＧ２、ｐＢａｃＰＡＩ,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒ＢａｃＰＡＫ６线性化ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ２１,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒ＢａｃＰＡＧ、ＢａｃＰＡＩ。将重组病毒感染Ｓｆ２１细胞,ＰＡＢＣｈＧＲＦ（Ｇｌｙ）和ＰＡＢＣＩＧＦＩ均得到有效外泌表达,表达产物通过ＩｇＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ柱可获得快速纯化。     

两个根瘤菌新群的系统发育学分析

在数值分类、ＳＤＳＰＡＧＥ 全细胞蛋白分析、ＤＮＡＤＮＡ 杂交、１６ＳｒＤＮＡＰＣＲＲＦＬＰ 的基础上,测定了两个分离自干旱地区苜蓿、草木樨根瘤菌新群１ 、２ 的中心株ＸＪ９６０６０ 、ＸＪ９６４０８ 的１６ＳｒＤＮＡ 全序列,并进一步将中心株和３１ 株已知菌、３ 株分自黄土高原的根瘤菌进行了系统发育学分析。结果表明,供试菌株在系统发育树中基本分成Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ 、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ 、ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍＲｈｉｚｏｂｉｕｍ 、Ｒｈｉｚｏｂｉｕ ｍ 、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ 、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ 六个分枝。群１ ,２ 落入Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕ ｍ 分枝。     

白浆土-植物系统营养物质转化机制及其有效性研究Ⅱ.白浆土无机磷形态变化

采用室内培养和微区试验研究表明,施入白浆土中无机磷在短时间内（２４ｈ、８ｄ）主要向ＦｅＰ和ＡｌＰ转变,较长时间后（８０ｄ）,ＡｌＰ向ＦｅＰ转化,ＣａＰ变化较弱,土壤中无机磷形态转化与白浆土本身的土壤属性具有密切关系．施用有机肥改变了土壤中无机磷形态的转化过程,其与土壤中的铁、铝氧化物反应形成的“Ａｌ有机质Ｐ”和“Ｆｅ有机质Ｐ”是作物较易利用的有效Ｐ源     

内皮细胞E选择蛋白的表达及p53基因的影响

为探讨血管内皮细胞Ｅ选择蛋白的表达及野生型ｐ５３ 基因对其表达的影响, 采用流式细胞术及ＲＴＰＣＲ法分别测定其Ｅ选择蛋白及其ｍ ＲＮＡ水平。结果表明： 静息状态的内皮细胞表面检测不到Ｅ选择蛋白的表达, 尽管此时细胞内存在Ｅ选择蛋白的ｍＲＮＡ。肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα） 可浓度依赖性地诱导内皮细胞表达Ｅ选择蛋白, 内皮细胞表面Ｅ选择蛋白表达的增加伴随着细胞内Ｅ选择蛋白ｍＲＮＡ 水平的升高。ＴＮＦα刺激内皮细胞后４ ～６ ｈ ,Ｅ选择蛋白的表达达高峰。将ｐ５３ 基因导入内皮细胞后, 经ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面Ｅ选择蛋白的表达显著下降, 同时细胞内的Ｅ选择蛋白ｍＲＮＡ 的水平也明显降低。导入ｐ５３ 基因不影响静息状态内皮细胞Ｅ选择蛋白的表达及其ｍ ＲＮＡ 的水平。提示： ｐ５３ 基因至少部分通过降低Ｅ选择蛋白的ｍＲＮＡ 水平而抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面Ｅ选择蛋白的表达。     

RFLP,RAPD,AFLP分子标记及其在植物生物技术中的应用

分子标记的创新、发展与应用对植物分子生物学和植物生长技术起了积极的推动作用。本文就ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ分子标记及其在植物生物技术中应用作一介绍。     

IUBMB Symposia in 2000(英文)

ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎＭａｒｃｈ２６３１,２０００ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ,Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ,ＵＳＡＤｒ．ＲｏｂｅｒｔＧｅｎｎｉｓＤｅｐｔ．ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ,ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＩｌｌｉｎｏｉｓ６００ＳｏｕｔｈＭａｔｈｅｗｓＡｖｅｎｕｅ,Ｕｒｂａｎａ,ＩＬ６１８０１３３６４,ＵＳＡＴｅｌ：＋１２１７３３３９０７５;Ｆａｘ：＋１２１７２４４３１８６;Ｅｍａｉｌ：ｒｇｅｎｎｉｓ＠ｕｉｕｃ．ｅｄｕ１３ｔｈＩｎｔｅｒｎａ…