铁皮石斛的组织培养(简报)

以铁皮石斛当年生茎段为材料,在MS＋6-BA 0.1 mg/L＋NAA 0.02 mg/L培养基上进行不定芽诱导培养;在MS＋6-BA 2.5 mg/L＋NAA 0.05 mg/L＋AC（活性炭）1g/L培养基上进行丛生芽诱导与增殖培养,50 d为一个继代周期,繁殖系数为5～8;在1/2 MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.05 mg/L＋椰子100 g/L＋AC 1g/L培养基上进行壮苗培养;在1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L＋AC 1g/L培养基上进行生根培养;最后移栽到小颗粒化树皮中,成活率可达95%。     

ACC合成酶基因及其反义基因对西瓜的遗传转化

以2日龄西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld)无菌苗子叶为外植体,通过与根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行叶盘共培养建立了西瓜的遗传转化系统。所用根癌农杆菌中含有改建后分别携带嵌合NPTⅡ基因和番茄的ACC合成酶基因及其反义基因的质粒。外植体在MSA培养基(MS盐类、B_5维生素、1.0mg/L BA、0.2mg/L IAA)上预培养3～4d后,与根癌农杆菌共培养4d,随后转移外植体至附加100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的MSA培养基上筛选转化芽。将带芽外植体移入含有100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的伸长培养基(MS 0.2mg/L KT)上进行芽伸长,切取2～3cm高的伸长芽移入生根培养基(1/2MS 0.1mg/L NAA)生根。Southern blot结果证明获得转基因植株,乙烯释放指标表明转入的正义和反义ACC合成酶基因得到不同程度的表达。     

番茄ACC合酶反义基因对河套蜜瓜的转化

河套蜜瓜（CucumismeloLcvHetau）的子叶经预培养。芽诱导和生根培养,获得再生小植株,诱导率达58％。取带有番茄ACC合酶反义基因的双元载体pMQ6／JM109与农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）LBA4404经三亲融合后,与在MS0上萌发5d、并在MS＋1mg／LNAA培养基上预培养3d的子叶共培养48h,然后转入含50mg／L卡那霉素的MS＋6mg／LZT的芽诱导培养基中,1l个月后诱导生芽,待芽长1．5－2cm时转入生根培养基中,1－2周后可诱导产生大量的根,形成完整的转基因小植株。经PCR和分子杂交检测证明,目的基因已整合入河套蜜瓜的基因组中。     

根癌农杆菌对健康和患丛枝病泡桐的遗传转化

选取健康及患丛枝病泡桐（Paulownia spp.)为材料,建立组织培养和植株再生系统,以茎段作为转化受体,诱导分化和生根的最佳激素组合分别是MS＋BA4mg/L NAA0.2mg/L和1／2MS＋KT0.5mg/L IBA0.25mg/L。芽分化频率可达22．8％。健康和患病泡桐的茎段经农杆菌共培养3d后,在附加50mg/Lm的选择分化培养基上培养20d左右再生出抗性芽,经培养、诱导生根,获得了转基因再生植株,建立了泡桐的遗传转化体系。PCR和Southern杂交检测证明外源基因已整合到泡桐的基因组,标记基因ITPⅡ在再生植株中也得到表达,同时对影响转化的一因素进行了探讨。     

苦马豆的组织培养(简报)

以苦马豆种子在MS无植物生长调节剂的培养基上培养出无菌苗,以子叶和胚轴为外植体,在MS＋6．BA2．0mg／L＋2,4-D0．Smg／L上诱导产生愈伤组织,在MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．Smg／L培养基上继代培养,继代三次后在MS＋6-BA2．0mg/L培养基上诱导产生丛芽,在MS＋6-BA0．5mg／L培养基上进行幼苗培养,在幼苗长到3～4cm时移至1／2MS＋IBA2．0mg／L培养基上生根。     

香石竹毛状根诱导、离体培养及其植株再生

为了探讨利用发根农杆菌遗传转化所产生的毛状根来创新香石竹种质的可能性,本文采用叶盘法,建立了发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes对香石竹Dianthus caryophyllus L.叶片外植体的遗传转化及其植株再生体系。结果表明,发根农杆菌ATCC15834感染香石竹幼嫩叶片外植体12 d后,从叶片外植体切口中脉处产生白色毛状根,21 d后约90%的叶片外植体产生毛状根。所获得的无菌毛状根能在无外源激素的MS固体和液体培养基中快速自主生长。PCR扩增和硅胶薄层层析结果显示发根农杆菌Ri质粒的rol B和rol C基因以及冠瘿碱合成酶基因已在香石竹毛状根基因组中整合并得到表达。将毛状根置于MS+6-BA 1.0-3.0 mg/L+NAA 0.1-0.2 mg/L中培养15 d后产生淡黄绿色的疏松愈伤组织。愈伤组织不定芽分化的最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L,培养6周后不定芽分化率为100%;平均每个愈伤组织产生30-40个不定芽;将不定芽转至1/2 MS或1/2 MS+0.5 mg/L NAA的培养基中10 d后产生不定根,发育成再生植株。再生植株移植于栽培基质中20 d后,成活率达95%以上。     

农杆菌介导LJAMP2基因导入‘红阳’猕猴桃及分子鉴定

为了获得抗溃疡病的‘红阳’猕猴桃转基因植株,以红阳猕猴桃试管苗叶盘为转基因受体材料,通过根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的LJAMP2基因导入红阳猕猴桃。450个叶盘与携带表达载体质粒pBI121的根癌农杆菌菌珠LBA4404共培养2 d后,转入含25 mg/L Kan的筛选培养基培养40 d,15 d转接1次,之后30 d继代1次。结果表明,在MS+3.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA筛选培养基中,Kanr芽率达85%以上,在1/2 MS+0.8 mg/L IBA培养基中,Kanr芽生根率达100%。共获得Kanr再生植株40株,经GUS组织染色和PCR分析证明,其中23株为转基因植株。阳性率为57.50%,转化率达5.11%。抗溃疡病基因LJAMP2已成功导入红阳猕猴桃,为红阳猕猴桃的抗病基因工程育种奠定了基础。     

秦美猕猴桃叶片最佳再生系统的建立

利用正交等试验,系统开展了秦美猕猴桃叶片再生系统建立研究,确定了秦美猕猴桃叶片不定芽诱导最佳培养基及激素配比为MS＋6－BA 5mg/L NAA 0.1mg/L,不定芽诱导生根最佳培养基及激素配比为1／2MS＋NAA 0．01mg/L IBA0.5mg/L GA 1mg/L,该实验结果为通过叶盘法开展农杆菌介导的猕猴桃遗传转化奠定了良好基础。     

柱花草nptⅡ、hpt和bar基因优化转化体系的建立

以热研5号柱花草（Stylosanthes guianensis cv.Ryan No.5）为材料,系统地研究了不同选择标记基因NptⅡ、hpt和bar的柱花草转化体系.研究发现柱花草最适合基因转化的外植体是幼苗下胚轴.最佳愈伤组织形成和愈伤组织分化培养基为MS＋NAA 1.0 mg/L＋6-BA 4.0 mg/L＋3%蔗糖,pH6.最适宜外植体生根培养基是MS＋NAA 0 mg/L＋3%蔗糖（pH6）.Glufosinate选择压力为0.15 mg/L,Kanamycin选择压力为20 mg/L,Hygromycin选择压力为15 mg/L.在以上的优化转化系统中,柱花草幼苗下胚轴分别侵染带NptⅡ,hpt和bar基因的农杆菌（GV3101）后,可获得30%愈伤组织具有kanamycin抗性,5%愈伤组织具有Hygromycin抗性,50%的愈伤组织具有Glufosinate抗性.     

南欧丹参的组织培养与快速繁殖(简报)

以南欧丹参种子萌发的无菌苗茎段为材料,在MS＋6IBA1．5mg／L＋NAA0．5mg／L＋GA30．05mg/L培养基上进行不定芽诱导与增殖培养,30d继代一次,繁殖系数为4～6;壮苗与生根培养基为1／2MS＋NAA1．0mg/L＋1BA0．2mg／L。本试验建立了南欧丹参的种苗快速繁殖技术规程。     

青菜的高效再生和农杆菌介导B.t.及CpTI基因的转化

分别对培养基中适宜的激素组成和AgNO3 添加浓度进行研究 ,建立了青菜下胚轴和子叶外植体的高效再生系统 ,青菜品种“矮抗青”的最高芽分化频率下胚轴可达 6 5 % ,子叶为 5 2 %左右。在此基础上 ,对影响转化频率的不同因素进行了探讨 ,共获 94株卡那霉素抗性植株。对转基因植株总DNA的Southernblot ting分析证明 ,B .t .基因和CpTI基因已整合到青菜植株的细胞核基因组中。经过抗虫性筛选试验 ,从转基因植株的T3 代筛选到 7个转B .t.基因的抗虫纯合株系和 5个转CpTI基因的抗虫纯合株系 ,并进入田间小区青菜抗虫新品种试验     

发根农杆菌对骆驼刺的转化及转化组织的形态发生

将骆驼刺离体再生苗的茎切段经发根农杆菌A4菌株感染后,在含500mg/L头孢霉素的MS无激素培养基上培养,产生了转化的发根和愈伤组织.转化根在附加2mg/L2,4-D和0.5-1mg/L6BA的MS培养基上培养后,亦可诱导出愈伤组织.在含3mg/L6BA和0.5mg/LNAA的培养基上诱导出了苗的分化.冠瘿碱分析表明,在95%以上的发根和75%的转化愈伤组织及再生植株中都显示了T-DNA的整合和表达.染色体检查发现,约81%的发根细胞具有正常染色体数(2n=18),其余则存在染色体数目的变化,在继代培养一年之后,转化体仍维持旺盛的再生能力.     

亚麻遗传转化体系的建立及几丁质酶基因导入的研究

报道了亚麻遗传转化体系的建立和几丁质酶基因对亚麻遗传转化的研究。亚麻下胚轴切段培养在不同激素浓度的ＭＳ培养基上,诱导分化出不定芽。最佳的激素组合是ＭＳ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ,分化频率可达９７％。亚麻的下胚轴经带有几丁质 根癌农杆菌感染后,在含有１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的选择分化培养基上,１４￣２１ｄ就能产生抗生小芽,小芽进一步伸长后可在１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的ＭＳ选择生根培养基（ＭＳ     

Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation and the regeneration of transformants in Alhagi pseudalhagi]

The regenerated shoot segments of Alhagi pseudalhagi were sliced and infected with Agrobacterium rhizogenes strain A4. The hairy roots and transformed calli were obtained through selection on hormone free MS medium. The transformants were cultured on MS medium with 2 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) and 0.5-1 mg/L 6-benzylaminopurine (6-BA) to induce calli. 3 mg/L 6-BA and 0.5 mg/L naphthalene acetic acid (NAA) were applied for shoot differentiation. Shoots were planted on MS medium with 2 mg/L indole-3-butyric acid (IBA) and produced roots. Opine analysis proved the integration and expression of T-DNA in over 95% hairy roots, 75% transformed calli and transformed plantlets respectively. The 81% hairy root cells had normal chromosome numbers (2n = 18). The alterations of chromosome number were observed. After one year of subculturing, the regeneration ability of transformants was maintained.     

采用玉米Ubi-1启动子获得低拷贝转基因玉米植株

通过基因枪粒子轰击和草丁膦（PPT）选择获得可育的玉米转基因植株,并分析了外源基因在转化体中的拷贝数与启动子之间的关系。用玉米Ubi-1启动子驱动外源基因,玉米转化体中外源基因的拷贝数较低;可能的原因为Ubi-1启动子通过与其内部同源序列发生重组而被定点整合进玉米基因组,共转化的两种质粒DNA在整合至玉米染色体DNA之前已重构成为一个整体。结果显示使用某一植物自身基因的启动子可以降低外源基因在该物种转基因个体中的拷贝数,进而避免基因沉默现象的发生。目前已得到第二代转基因玉米种子。     

海甘蓝愈伤组织再生植株的研究

海甘蓝种子在附加有２～５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０１ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上,幼苗生长健壮。幼苗的下胚轴和子叶柄在ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的培养基上可以获得较好的愈伤组织。将来源于下胚轴的愈伤组织培养于含有０５ｍｇ／ＬＮＡＡ,２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的ＭＳ培养基上分化出的丛生芽状态最好。最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋０５ｍｇ／ＬＢＡ。     

中国野生葡萄组织培养研究

对中国野生山葡萄左山—1、左山—2、燕山葡萄燕山—1和秋葡萄平利—7的叶片、叶柄、茎段及单芽茎段进行了离体培养研究。诱导左山—1叶片分化出不定芽的培养基为MS BA 5．0mg／L NAA0．1mg／L,诱导率2．5％;诱导平利—7叶柄分化出不定芽的培养基为MS BA7．0mg／L NAA0．1mg／L,诱导率1．95％;诱导左山—1、燕山—1和平利—7茎段分化出不定芽的培养基与叶柄相同,但诱导率相对较高,分别为8．25％、4．88％和6．49％;应用这一培养基对平利—7、左山—2的单芽茎段进行培养,丛状不定芽的诱导率均为100％。不定芽继代培养基为MS BA0．5mg／L IBA0．2mg／L;生根培养基为1／2MS IBA0．1—0.2mg／L。     

白菜高效再生系统的建立及其不定芽发生的组织学观察（简报）

白菜(Brassica campestris Lssp．chinensis Makino)起源于欧洲的野生芸薹,有许多变种和类型,是我国尤其是长江流域及南方各省普遍栽培的重要蔬菜种类之一,在农业生产中占有重要的地位。由于白菜的植株再生频率同其他芸薹属作物相比较低,因此,影响了基因工程技术在白菜品种改良上的应用。虽     

抗根肿病大白菜的花药培养

大白菜是中国北方的重要蔬菜之一,根肿病是危害大白菜生产世界性病害,利用花药培养可以大大加速抗根肿病大白菜杂交育种工作的进程。对33份抗根肿病大白菜品种(品系)进行花药培养,有24个品种诱导出胚,品种诱导率为72.7%,以东方皇冠×C11的诱导率最高,为1.86胚/蕾。对大部分基因型来说,在培养基中添加0.4 g/L谷氨酰胺的诱导效果最好。研究还发现生长在温室中的供体植株更容易诱导出胚状体。变绿的子叶型胚转到B5+0.2 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+0.1%活性炭的胚分化培养基上可诱导生芽。     

珍稀濒危植物蒙古扁桃的组织培养及植株再生

对珍稀濒危植物蒙古扁桃进行组织培养获得再生植株。实验结果表明,在MS培养基上蒙古扁桃幼苗茎尖,茎切段和叶片等外植体均可以脱分化形成愈伤组织,并进一步分化形成再生植株。器官的脱分化与再分化决定于培养基中的激素种类及其浓度。诱导愈伤组织形成的最适培养基为MS＋6－BA0.8mg/L NAA0.1mg/L,芽分化诱导最适培养基为MS＋6－BA0.8mg/L,诱导生根的最适培养基是MS＋IBA0.5mg/L。