J亚群禽白血病病毒蛋鸡分离株SD07LK1全基因组核苷酸序列的比较

[目的]分析我国ALV-J蛋鸡分离株的来源和进一步演变趋势.[方法]以J亚群禽白血病病毒(ALV-J)蛋鸡分离株SD07LK1感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组:DNA作为其前病毒基因组模板,根据已发表序列设计合成9对引物,经PCR扩增出9段连续的、相互部分重叠的DNA片段和闭合环形前病毒两末端LTR的连接区段,并分别连入T载体进行克隆、测序.[结果]用:DNAstar软件对测序结果进行剪辑和拼接,首次完成了ALV-J蛋鸡分离株SD07LK1的前病毒全基因组核苷酸序列.[结论]将该序列与另外已完成的全基因组序列的比较表明,ALV-J的整个基因组gag和pol基因相对保守,各毒株间对应基因的同源性分别在95.O%以上,env基因的同源性仅为88.6%～94.0%.     

致蛋鸡血管瘤J亚群禽白血病病毒cDNA全序列分析

【目的】了解近年来我国商品蛋鸡群中以血管瘤为主要表型的J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup J,ALV-J)的分子生物学特性,为控制ALV-J在鸡群中流行提供基础资料。【方法】采用PCR扩增和序列分析技术,对分离自血管瘤或者血管瘤与髓样细胞瘤(Myeloid Leukosis,ML)并存的3株蛋鸡ALV-J毒株前病毒DNA的全序列及3株商品蛋鸡血管瘤型分离毒和1株商品蛋鸡ML型分离毒的致瘤关键性序列进行研究。【结果】来自血管瘤或者血管瘤与ML并存的商品蛋鸡分离毒株与来自肉鸡分离毒株的全序列差异明显,在遗传进化树上分属两个大的分支;研究发现商品蛋鸡血管瘤及ML混合病例分离毒JS09GY3与JS09GY6株的引物结合位点(Primer Binding Site,PBS)-Leader中出现极为罕见的连续19bp的插入突变,其与劳斯相关病毒1(Rous Associated Virustype1,RAV-1)、劳斯相关病毒2(Rous Associated Virustype2,RAV-2)及劳斯肉瘤病毒施密特-鲁宾二氏[Rous sarcoma virus(strain Schmidt-RuppinB),RSV-SRB]毒株序列相同;通过对U3区调控元件的分析,发现血管瘤商品蛋鸡病例分离毒NHH与JS09GY5的U3区各发生1处连续序列缺失,出现了极为独特的c-Est-1、TCF11及C/EBP结合位点,这些调控元件可能与病毒的致肿瘤特性相关;所测的5株血管瘤商品蛋鸡分离毒均保留完整E元件,而所有肉鸡分离毒的E元件均发生了几乎相同的大部分序列缺失;首次发现血管瘤商品蛋鸡分离毒JS09GY3的E元件中有11bp的连续插入序列。【结论】商品蛋鸡血管瘤型ALV-J与肉鸡分离毒在全序列上差异明显,U3、DR1和E元件等区域有一部分特殊的突变与毒株的宿主类型和肿瘤表型有一定关系,其功能尚需进一步研究。而血管瘤型、髓细胞瘤型ALV-J可能是ALV-J与其它反转录病毒的重组毒。     

J亚群禽白血病病毒研究进展

禽白血病病毒(Avian leukosis viruses,ALVs)是以主要引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反录病毒群。由于其中一些毒株最先分离于所谓的Rous肉瘤病毒(Rous sarcoma viruses,RAVs),因此又称为Rous相关病毒(Rous associated viruses,RAVs)。从其所引起的肿瘤性疾病的病理学出发,此群病毒又称为禽白血病肉瘤病毒群(Avian leukosissarcoma groups of retroviruses,ALSVs)。九十年代以     

蛋鸡J亚群白血病病毒的分离鉴定及序列分析

通过接种鸡胚成纤维细胞((CEF)及特异性单抗的间接荧光抗体反应(IFA),从中国商品代蛋鸡群中首次分离到J亚群白血病病毒(ALV-J).对其env基因编码的氨基酸序列及3'-末端(3'-Ter)序列与国内外来源于白羽肉鸡的毒株作了比较分析.结果显示,这两株病毒的gp85基因编码的氨基酸序列与国外5个毒株同源性仅为83.4%～87.3%,与国内来源于白羽肉鸡的8株病毒同源性也仅为86.4%～89.6%.gp37基因编码的氨基酸序列与5个国外毒株同源性为91.8%～97.0%,与8个国内毒株同源性为93.9%～95.9%.另外,国内来源于白羽肉鸡的各毒株的3'-Ter序列在"E"区均有明显缺失,但本次分离的来源于蛋鸡群的毒株在"E"区没有缺失突变.与所列出的13株国内外毒株相比,这两个毒株在3'-Ter的缺失最少,较接近于原型株HPRS-103.显然这两株病毒的来源不同于国内白羽肉鸡.     

J亚群禽白血病病毒研究进展

禽白血病病毒(Avian leukosis viruses,ALVs)是以主要引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反录病毒群.     

禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定

本研究从曾见典型禽骨髓性白血病(Myeloid Leukosis,ML)病例的内蒙古某肉种鸡场随机选取的淘汰肉种鸡中,分离出一株J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus Subgroup J.ALV-J)。利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,J亚群禽白血病病毒内蒙株可以被两对ALV—J特异性引物扩增(特异条带约2．2kb和545bp);且在特异性单抗的间接免疫荧光检测中呈现强阳性荧光反应。此外,对山东一例肉种鸡骨髓性白血病病例亦进行了J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定。2．2kb PCR扩增物的测序结果表明,两株分离病毒的同源性为96．9％,与已分离的SD9901和YZ9901株ALV-J同源性达94．2％～95.4％。     

蛋鸡J亚群禽白血病的分子生物学诊断

根据J亚群白血病病毒(ALV-J)原型株HPRS-103的序列设计了一对针对外源性ALV-J引物H5和H7,从发生ML病死鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏和输卵管组织中提取DNA作为模板,经PCR扩增得到长度为545bp的片段,对其序列进行测定后,与ALV-J原型株HPRS-103的序列进行了比较,发现其核苷酸同源性为97．4％,所编码氨基酸的同源性为96．1％。该片段含有ALV-J gp85编码基因的部分序列和ALV-J pol基因的部分序列,从分子水平上证实了蛋鸡发生J亚群禽白血病,进一步证明了此前根据病理学观察、免疫组化及免疫荧光诊断的结果。这是首次从分子水平上证明蛋用型鸡发生J亚群禽白血病。     

禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定

本研究从曾见典型禽骨髓性白血病(Myeloid Leukosis, ML)病例的内蒙古某肉种鸡场随机选取的淘汰肉种鸡中,分离出一株J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus Subgroup J, ALV-J).利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,J亚群禽白血病病毒内蒙株可以被两对ALV-J特异性引物扩增(特异条带约2.2kb和545bp);且在特异性单抗的间接免疫荧光检测中呈现强阳性荧光反应.此外,对山东一例肉种鸡骨髓性白血病病例亦进行了J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定.2.2kb PCR扩增物的测序结果表明,两株分离病毒的同源性为96.9%,与已分离的SD9901和YZ9901株ALV-J同源性达94.2%～95.4%.     

二株B亚群禽白血病病毒全基因组序列及其在细胞上的复制性比较

本研究比较了从山东地方品系鸡群分离到的二株B亚型禽白血病病毒(ALV)SDAU09E3和SDAU09C2的全基因组序列及它们在细胞培养上的复制动态。这二株ALV-B的同源性为95.4%,与GenBank中3株B亚群参考株之间的同源性也均在91.0%～94.9%间,而与其它亚群参考株的同源性均低于87.9%。与亚群无关的gag、pol基因和LTR的核苷酸序列比较表明,这二株ALV-Bgp85基因的gag和pol基因与所有比较的参考株的同源性均在93%以上。LTR与其他外源性ALV参考株的LTR间的同源性在72.6%～88.3%范围内,但与E亚群内源性ALV的LTR的同源性只有51.5%。然而,这二个ALV-B的LTR的同源性也只有74.8%,远低于其他基因组部分的同源性,特别是它们的LTR的U3区同源性只有68.8%,二者在二个CAAT分布上也显著不同。对这二株ALV-B在DF-1细胞上的复制动态比较表明,它们在细胞培养上清液中的TCID50值非常类似,但SDAU09E3株核衣壳蛋白p27抗原的含量显著高于SDAU09C2株。这表明,同一亚群的不同毒株在复制过程中,所表达的p27抗原量与所形成的具有传染性的病毒量间没有平行关系。这一差异与LTR-U3区的相关性则有待应用感染性克隆技术来做进一步深入研究。     

Complete Genome Sequence of a J Subgroup Avian Leukosis Virus Isolated from Local Commercial Broilers

Subgroup J avian leukosis virus (ALV-J) isolate GDKP1202 was isolated from a 50-day-old local yellow commercial broiler in the Guangdong province of China in 2012. Here we report the complete genomic sequence of the GDKP1202 isolate, which caused high mortality, serious growth suppression, thymic atrophy, and liver enlargement in commercial broilers. A novel potential binding site (5′-GGCACCTCC-3′) for c-myb was identified in the GDKP1202 genome. These findings will provide additional insights into the molecular characteristics in the genomes and pathogenicity of ALV-J.     

Sequence analysis for the complete proviral genome of reticuloendotheliosis virus Chinese strain HA9901

Reticuloendotheliosis virus (REV), a member of avian retrovirus, can cause tumor, immune suppression and a runting disease syndrome[1,2]. With several clas-sical reference strains, such as strain SNV from ducks, a replication defective oncogenic strain T …     

鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较

通过接种鸡胚成纤维细胞、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术及特异性单抗的间接荧光抗体反应（ＩＦＡ）,从某大型肉用型种鸡场的疑似Ｊ亚群白血病的病鸡中,以及２５个临床健康的商品代肉鸡群的２群中,分离鉴定出Ｊ亚群禽白血病病毒（ＡＬＶ－Ｊ）。在用抗ＡＬＶ－Ｊ ｇｐ８５单克隆抗体ＪＥ９的ＩＦＡ中,来自病鸡群的两株病毒ＳＤ９９０１和ＳＤ９９０２呈强阳性反应,来自临床健康肉鸡群的ＹＺ９９０１和ＹＺ９９０２株呈弱阳性反     

Sequence analysis for the complete proviral genome of reticuloendotheliosis virus Chinese strain HA9901

The genomic DNA extracted from chicken embryo fibroblast (CEF) infected with a Chinese field isolate HA9901 of reticuloendotheliosis virus (REV) was used as the template to amplify the REV proviral genomic cDNA by PCR with 6 pairs of primers according to published sequences. Six overlapping fragments were amplified, cloned into the TA vector and sequenced, including a fragment which was amplified from the circular proviral cDNA and covering both 5′-and 3′-ends. The complete sequence of the whole genome was established and analyzed with a DNAstar software. Comparisons of the sequence with two other strains demonstrated that the genomes of REV were relatively conservative, the homogenecity for all genes or LTR fragments of the 3 strains was over 92%, no matter whether they were isolated from different species and regions in different years. But, the homology of Chinese strain HA9901 to a fowl pox virus-associated strain from Chickens was higher than that to strain SNV isolated from ducks.     

禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析

应用多聚酶链反应（PCR）的方法扩增出ADOL-4817毒株的囊膜蛋白env基因,并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明,env基因的大小为1746 bp,其中gp85和gp37由1554 bp组成,可翻译成517个氨基酸,分子量为57.7 D。根据糖基化位点N-X-S/T的特点,发现ADOL-4817的env蛋白有15个潜在的糖基化位点。同源性分析证明,ADOL-4817的env基因与其它ALV-J的env基因序列同源性为88.8%～92.4%,而与外源性ALVs的相应序列的同源性仅为40.5%～51.4%,然而,与内源性的EAV-HP毒株的类env基因的同源性高达91.2%;另外,ADOL-4817毒株的gp37在C末端多了13个氨基酸。这些结果提示,ALV-J的env基因存在广泛的变异性,env基因可能来源于内源性和外源性ALVs的重组。     

Independent Isolates of the Emerging Subgroup J Avian Leukosis Virus Derive from a Common Ancestor

A new subgroup of avian leukosis virus (ALV) that includes a unique env gene, designated J, was identified recently in England. Sequence analysis of prototype English isolate HPRS-103 revealed several other unique genetic characteristics of this strain and provided information that it arose by recombination between exogenous and endogenous virus sequences. In the past several years, ALV J type viruses (ALV-J) have been isolated from broiler breeder flocks in the United States. We were interested in determining the relationship between the U.S. and English isolates of ALV-J. Based on sequence data from two independently derived U.S. field isolates, we conclude that the U.S. and English isolates of ALV-J derive from a common ancestor and are not the result of independent recombination events.     

禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白env基因的克隆和表达

禽白血病病毒J亚群（ALV－J）是90年代鉴定出的ALV的新亚群,其囊膜蛋白env基因序列别与ALV A－E亚群的有相当大的差别。为ALV－J env基因及春表达产物的特点,用PCR方法扩增出ADOL－4817毒株的env基因,并克隆进TA载体,经电泳鉴定大小为1.7kb。将克隆出的env基因与杆状病毒pBlue-Bac4表达质粒DNA连接,构建成转移性载体pBac4817env,通过与Bac-N-Blue杆状病毒DNA共转染,区得了重组病毒rBac4817env-2。该重组杆状病毒感染Sf9细胞,能高效表达env基因产物,免疫荧光分析结果证明,单克隆抗体G2或多价兔抗env gp37血清能识别Sf9细胞,能高效表达env基因表达的特异性抗原;Western blotting分析结果表明,表达的重组基因产物的分子量大小约为90kD-94kD。用这些重组基因产物免疫鸡可以诱导鸡导鸡产生出高滴度的抗ALV－J特异性抗体。这一结果提示,这种杆状病毒表达的重组基因产物有助于ALV－J env基因生物学特性的深入研究。     

黄羽肉鸡J亚群白血病病毒的分子生物学特性和致病性

通过接种鸡胚成纤维细胞(CEF)、聚合酶链式反应(PCR)技术及特异性单抗的间接荧光抗体反应(IFA),首次从中国地方品系-黄羽肉鸡中分离到J亚群白血病病毒(ALV-J),并对其gp85基因和3′Ter序列及其致病性作了比较分析。结果显示,GD0510A、GD0510B和GD0512的gp85基因编码的氨基酸序列与国内毒株HN0001同源性最高,分别为94.1%、92.5%和95.8%,GD0510A和GD0512的3′Ter核酸序列与国内毒株同源性比较高。分离到的两株ALV-J(GD0510A和GD0512)感染1日龄肉鸡后出现明显生长抑制(P<0.05),并诱发中枢免疫器官法氏囊和胸腺萎缩。两株病毒单独感染均能降低鸡体对新城疫病毒和禽流感病毒(AIV-H5)疫苗的抗体滴度,GD0512感染鸡后能明显抑制感染鸡对新城疫病毒疫苗的免疫反应(P<0.05),而GD0510A感染鸡后在4w时也能明显抑制感染鸡对禽流感病毒(AIV-H5)疫苗的免疫反应(P<0.05)。研究证实在我国地方品系黄羽肉鸡存在ALV-J的感染,分子生物学特性研究表明该毒株可能是来自白羽肉鸡且能造成感染鸡的免疫抑制。