单抗LC—1与针对的人肺腺癌SPC—A—1细胞肿瘤相关抗原复合物的内…

我们运用抗人肺癌单抗ＬＣ－１结合胶体金免疫电镜技术研究了人肺腺癌ＳＰＣ－Ａ－１细胞表面抗原抗复合物复合物被内吞的全过程,发现该细胞表面抗原抗仨复合物是通过受体介导内吞途径被内化,经多泡体富集后至溶酶体消化降解。此外我们还用流式细胞仪分析了内吞前后该细胞表面抗原量的变化和短期内的恢复情况。ＬＣ－１在诱发该细胞表面抗原内化的同时还诱发了它对该核糖体的自噬。     

^125I标记单抗LC—I与肺腺癌细胞体内外结合特性的研究

McAb LC-1 was derived from fusion of myeloma cells and murine spleen cells immunized with human lung adenocarcinoma SPC-A-1 cells. The immunoglobulin isotype of LC-1 belonged to IgM. LC-1 was direct against the common epitope of lung cancer. It not only reacted with small cell lung cancer but also with non small cell lung cancer. LC-1 was purified from ascitic fluid by euglobulin precipitation and Sephadex G-200 filtration chromatography, and was iodinated with Iodogen, the specific reactivity of 125I-labeled LC-1 was determined by comparing standard curve with self-displacement curve. The immunoreactive fraction of 125I-LC-1 was determined by its binding to excess of antigen. The RIA data were plotted in Scatchard-form as binding of SPC-A-1 cells to LC-1. The binding constant of LC-1 binding to SPC-A-1 was 4.8 x 10(8) M-1. The LC-1 binding sites on SPC-A-1 were 7.2 x 10(4) per cell. The RIA inhibition test showed that LC-1 and LAC-122 (another IgM isotype McAb reacted only with non small cell lung cancer) had no cross-reactivity. The treatment of SPC-A-1 cells by proteinase and sodium periodate inhibited LC-1 binding to these treated target cells by 39% and 66% respectively. These results suggested that the biochemical nature of antigen recognized by LC-1 was glycoprotein.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

转基因人肺腺癌细胞株的建立

以逆转录病毒ｐＬＸＳＬ为载体与人细胞介素２基因（ＩＬ－２）重组,用电穿孔技术将其重组子ｐＬＩＬ—２ＳＮ导入ＰＡ３１７细胞中,建立了逆转染病毒包装体系细胞ＰＡ３１７／ｐＬＩＬ—２ＳＮ。应用逆转录病毒包装体系细胞上清液去转染入肺腺癌细胞ＳＰＣ—Ａ１,经过２０天含Ｇ４１８培液的筛选式培养,历经了５０代的传代培养,获得了转白细胞介素２基因的人肺腺癌细胞株ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２。该细胞（ＳＰＣ－Ａ１／ＩＬ－２）经ＰＣＲ技术验证外源性目的基因（ＩＬ－２ｇｅｎｅ）导入细胞内,且证明该细胞能表达ＩＬ—２基因（有ＩＬ－２的分泌）。我们研究的目的是对肿瘤细胞的特异性抗原修饰、对肿瘤细胞进行处理。试图建立肿瘤疫苗。     

脂肪酸对人肺腺癌细胞膜流动性的影响

脂肪酸是细胞膜正常流动性的主要调节因素之一。本文报导了二种不同转移表型人肺腺细胞与九种不同脂肪酸共孵育后,对其细胞膜流动性的影响。结果表明,不同转移一夫肺腺癌细胞对各种脂肪酸有不同的敏感性,高转移癌细胞Ａｎｉｐ对棕榈酸和花生酸较敏感,而低转移癌细胞ＡＧＺＹ对棕榈烯酸和亚油酸较敏感。     

抗人肺癌细胞单克隆抗体的制备及其特性的研究

用人肺鳞癌细胞LTEP-78细胞系免疫Blab/c小鼠获得3株抗人肺癌细胞的单克隆抗体杂交瘤系。其中BLTI-01株经六次克隆化培养,体外传代8个月以上。BLTI-01与白细胞抗原及血型抗原基本上无交叉反应;与骨髓细胞无交叉反应;与癌胚抗原和胎甲球蛋白不相关;与肺鳞癌、肺腺癌细胞系及部分其它肿瘤细胞呈阳性反应。     

抗人IgM单克隆抗体的研究—脾内免疫建立抗人IgM单克隆抗体杂交瘤细胞株

用多发性骨髓瘤病人血清中提纯的ＩｇＭ抗原,用脾内免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后与Ｓｐ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合,获得了７株分泌人ＩｇＭ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为２５Ｇ１、２５Ｇ３、２５Ｇ４、２５Ｇ５、２５Ｄ２、２５Ｄ３和２５Ｄ５。注射同系小鼠后可诱生含较高效价抗人ＩｇＭ腹水（ＰＨＡ＝１２１２）。该杂交瘤细胞经组织培养传代半年,冻存１４个月后复苏,其分泌ＩｇＭ性能稳定。用ＰＨＡ、ＥＬＩＳＡ做人ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ阻断试验,仅ＩｇＭ可阻断。用琼脂糖双扩散证明其与羊抗人ＩｇＭ有共同沉淀线     

与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅱ单克隆抗体对精子功能的影响以及抗原定位与免疫印迹

精子只有经过获能和顶体反应,才能与卵融合。本文对以体外诱导的顶体反应人精子作为免疫原制备的23个单克隆抗体进行了一系列鉴定,结果表明:所得单克隆抗体的间接免疫荧光染色,主要定位在人精子的赤道板和中段,没有发现定位于顶体及顶体后的单克隆抗体。某些单克隆抗体的间接免疫荧光染色部位在顶体反应后发生了改变。有18个单克隆抗体显示程度不同的精子凝集作用,未发现有精子制动作用的单克隆抗体。免疫印迹证实,有9个单克隆抗体的靶抗原是蛋白质类物质。     

人肺腺癌细胞系cDNA文库的建立

本文以Uni-ZAP XR为载体,成功地建立了人肺腺癌高、低转移细胞系的cDNA文库。文中同时也探讨了总RNA的提取和mRNA的分离,cDNA的第一条链及第二条链的合成及克隆到载体等在建立cDNA文库过程中,几个关键性的问题。该项工作的完成,为下一步在这两株细胞系cDNA之间进行消减式杂交,筛选转移相关基因奠定了坚实基础。     

抗人肺腺癌细胞株SPC-A-1的单克隆抗体的制备和鉴定

人肺腺癌细胞株SPC-A-1,经抗人正常肺抗血清复被后免疫小鼠,脾细胞和同系NS-1或SP 2/0融合,获得17株单克隆抗体。本文报道其建株过程及其中7株单克隆抗体的一些特征。LAC-122、LAC-163与LAC-210对人体肺腺癌和肺鳞癌的阳性反应率分别为75%、78.3%和75%,除LAC-122对一例胃癌细胞株有微弱交叉反应外,三株单抗对肺小细胞癌, 其它肿瘤组织及正常、胚胎组织均呈阴性。对利用抗体复被瘤细胞及肺癌相关抗原问题作了较详细的讨论.     

抗人肺腺癌单克隆抗体重,轻链可变区基因的分离克隆和序列测定

根据鼠免疫球蛋白重。轻链可变区基因ＦＲ１和ＦＲ４的序列保守性,化学合成了适于体外扩增Ｉｇ重、轻链可变区基因（Ｖ_Ｈ和Ｖ_Ｌ）的数对引物。以分泌抗人肺腺癌单抗的杂交瘤细胞株ＷＬＡ－２Ｃ４的基因组ＤＮＡ为模板,ＰＣＲ扩增Ｖ_Ｈ和Ｖ_Ｌ基因,分别克隆人ｐＵＣ１９载体。转化子经蓝、白斑筛选,酶切鉴定,双脱氧测序证实确为鼠单抗可变区基因,其中Ｖ_Ｈ基因全长为３４８ｂｐ,编码１１６ａａ,属重链ⅡＢ亚类;Ｖ_Ｌ基因全长３１８ｂｐ,编码１０６ａａ,属Ｋ轻链Ⅵ亚类。     

抗人铁蛋白单克隆抗体的制备及其在肝癌病人血清铁蛋…

铁蛋白是一种肿瘤相关蛋白质,我们从人肝癌组织中分离纯化了铁蛋白,并筛选到一株抗该铁蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株（６Ｄ６）,它针对铁蛋白上的构象决定簇,并对人源铁蛋白高度专一。然后我们用此单抗建立了测定铁蛋白浓度的夹心ＥＬＩＳＡ法,并对方法的灵敏度,精确度及特异性作了研究。本法用于测定不同血清标本的结果表明：肝癌病人血清中的铁蛋白浓度明显高于正常人,这可能对临床诊断会有使用价值。     

抗人PAI—1单克隆抗体制备,鉴定和应用

以重组PAI-(rPAI-1)为抗原,通过杂交瘤技术获得6株阳性杂交瘤细胞(AP1、AP2、AP3、AP4、AP5和AP6),并用SPA亲和层析纯化了抗PAI-1单克隆抗体(McAb)。所有McAb均能识别rPAI和天然PAI-1,腹水滴度均为10~6以上。6种McAb对PAI-1亲和常数在3.45×10~7—1.05×10~9mol/L之间。AP2、AP3 McAb能完全抑制PAI-1活性,AP4、AP和AP6只能部分抑制PAI-1活性,AP1则不抑制PAI-1活性。6种McAb中只有AP1、AP4和AP5能识别PAI-1/t-PA复合物。利用AP1、AP3、和AP4 McAb制备免疫亲和柱一步纯化HepG_2细胞分泌的PAI-1,纯度大于98％,回收率92％,纯化倍数51倍。利用抗PAI-1 McAb建立了夹心法ELISA,测定了人血浆PAI-1水平,正常人血浆PAI-1平均含量(±D)为24.7±7.75ng/ml。     

抗人重组肿瘤坏死因子(rHTNFα)单克隆抗体的研制

肿瘤坏死因子(TNF)对许多肿瘤细胞具有细胞毒和抑制生长的作用。为进一步研究TNFα的结构和功能,并为临床研究提供rHTNFα纯品。本实验应用杂交瘤技术制备了一组抗rHTNFct单克隆抗体3、H₂、B₃,B₅、E₆、Zl₂、Z₈和Z₂₀)。ELISA结果证实它们鼻rlL－1、rlL-2、rlFNγ、rlFNα₁及E．Coli菌裂解液(MM₂₉₄)无均交叉反应,仅与rHTNFα有反应。Western blot结果进一步证实这组抗体对rHTNFα的特异性。这组抗体具有不同程度中和rHTNFα细胞毒能力。用抗rHTNFα抗体制备的亲和层析柱纯化rHTNFα,可以得到在SDS-PEAG上分子量为17000道尔顿的rHTNFα纯品。     

用于人乳腺癌病理检测的抗人ARD1单克隆抗体的制备

hARD1蛋白是一个乙酰基转移酶,催化蛋白质N末端的乙酰化。前期的研究发现hARD1的高表达可能作为乳腺癌的一个指标。为了制备在乳腺肿瘤组织中特异识别的抗hARD1的单克隆抗体,将纯化的全长hARD1/Histag融合蛋白(1~235aa)免疫Balb/c小鼠,获得了8个稳定的阳性单克隆细胞株,酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明,所得抗体的轻链均为κ型,重链为3种亚型:IgG1、IgG2a和IgG2b。在不同肿瘤组织样本中进行抗体特异性筛选,获得一个在乳腺肿瘤组织中具有相对特异性的抗hARD1单克隆抗体,为进一步将抗hARD1的单克隆抗体应用于乳腺癌的病理诊断奠定基础,同时也为进一步研究hARD1在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。     

抗重组人肿瘤坏死因子单克隆抗体对内毒素血症家兔氧提取功能的影响

本工作采用渐进性低氧法降低总氧运输量,从而观察抗重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）单克隆抗体对内毒素血症家兔氧提取功能的影响。结果表明,在DO2－VO2的关系中,抗体保护组类同于对照组,可清楚地分为"非依赖"与"依赖"两部分;无关抗体组类同于内毒素组,从呼吸空气开始从未出现坪区。抗体保护组的临界氧运输量（DO2c）和合并氧提取率分别为10．80±3．21ml／（min·kg）和0．690,与对照组（分别为10．18±1．69和0．730）无显著差异（P＞0．05）;无关抗体组合并氧提取率为0．408,显著低于抗体保护组（P＜0.05）。在血浆中TNFα浓度,无关抗体组在各时间点上均显著高于抗体保护组（P＜0.01）。实验结果表明,精确特异性的重组人TNFα单抗具有阻断或逆转内毒素血症氧提取障碍的病理过程。     

一株人抗人A—血型物质单克隆抗体特异性的研究

本文对一株人抗人A-血型物质单克隆抗体,用定量免疫沉淀法以及ELISA研究其与多种单糖、双糖及寡糖的反应性,从而确定了其结合部位的结构特异性。实验发现其结合部位互补于含有双分子岩藻糖残基的A-t糖:这一研究进一步强调了含有双分子岩藻糖残基的A血型抗原决定簇的重要性。