大黄素对肾小球系膜细胞PCNA的影响

本文应用体外肾小球系膜细胞培养和免疫组化染色技术,以增殖细胞核抗原(PCNA)为标志抗原,观察了大黄素对肾小球系膜细胞周期调控的影响。发现大黄素能明显抑制系膜细胞从G_1期进入S期,同时对已进入S期细胞的进一步过渡也有影响。     

人肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白的研究

本文采用了RT-PCR,细胞免疫荧光染色及流式细胞仪分析技术证实人肾小球系膜细胞有GLUT1(glucose transportorl)mRNA和蛋白质的表达。用2-Deoxy[~3H]-D-Glucose摄入法与根皮素抑制实验肯定了系膜细胞上GLUT1的功能及其在系膜细胞葡萄糖摄入中的作用。本项研究为进一步研究系膜细胞GLUT1在糖尿病肾病发病机理中的作用奠定了基础。     

肾康灵调控系膜细胞炎性反应因子的机制研究

目的：观察氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low-Density Lipoprotein,ox-LDL）对系膜细胞（Mesangial Cells,MCs）分泌炎性反应递质功能的影响,并从细胞分子生物学水平阐明肾康灵的作用机制。方法：采用肾康灵干预增殖的系膜细胞,并利用分子生物学技术检测CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α含量或基因水平。结果：利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的含量或基因水平显著升高,肾康灵呈浓度依赖性降低其表达水平。结论：ox-LDL诱导系膜细胞增殖时通过CXCR6介导,可促进CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α等炎性反应递质的释放,中药肾康灵可通过抑制炎性反应递质的释放,保护系膜细胞的功能。     

肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能及其影响因素

本文利用激光扫描共聚焦显微镜及荧光漂白后荧光回复技术对人肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能及其影响因素进行了观察。结果发现,体外培养的肾小球系膜细胞在融合生长状况下,相邻两细胞有间隙连接结构形成。不同浓度的血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能具有促进作用,而甲基强的松龙则具有抑制作用。     

U46619双向调节系膜细胞DNA合成的研究

Mene用血清或佛波醇肉豆寇乙酸(PMA)预失活化系膜细胞的PKC,可抑制U46619所致的IP合成及细胞内Ca~(2 )的升高,提示PKC预先活化后,可对再次活化PLC-PKC的物质起负反馈抑制作用。血清中含有血液凝固时血小板释放的血小板源性生长因子(PDGF),可活化PLC及PKC,可能对U46619的作用起负反馈抑制,使U46619促增殖作用丧失。第三,TXA_2可能直接或间接刺激前列腺素(PG)E_2或PGI_2的合成,而后两者有抑制细胞增殖的作用。不论何种机制参与,U46619这种抑制作用在病理上可能有积极意义:在正常状态下,体内肾小球系膜细胞为静息状态,肾小球合成的PG及TX极少,当肾小球产生炎症时,肾小球白细胞及血小板浸润增多,合成的PG、TX及PDGF增多,这时TX的升高可能有抑制PDGF所致细胞增殖的作用。 摘要 本实验用[~3H]TdR掺入法测定TXA_2类似物U46619对大鼠系膜细胞DNA合成的调节作用,测定系膜细胞合成的DAG及1,4,5-IP_3量,用PKC抑制剂Calphostin C预处理系膜细胞,观察其对U46619促增殖作用的影响。结果表明,U46619促进生长停滞的系膜细胞的DNA合成及IP_3的生成。本文首次证实U46619也促进DAG的生成并发现PKC抑制剂可抑制U46619的促增殖作用,提示U46619使生长停滞的系膜细胞的PLC活化,促进IP及DAG生成,进而激活PKC,促进系膜细胞DNA合成     

蛋白激酶C 在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞收缩中的作用

目的:研究蛋白激酶C(pkc)在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞(GMC)收缩中的作用。方法:人肾小球系膜细胞系用于全部实验。应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激蛋白激酶C抑制剂白屈菜红碱(CHE)处理或未处理的系膜细胞。利用激光扫描共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度。结果:①膜细胞经AngⅡ诱导后,细胞出现明显的大幅度起始钙离子浓度升高(vs.control,p<0.05,n=16)②膜细胞经CHE预处理后减少AngⅡ诱导的GMC钙离子浓度(vs AngⅡ,p<0.05,n=16)。结论:①血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞收缩。②蛋白激酶C参与血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞的收缩过程。     

蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞收缩中的作用

目的：研究蛋白激酶C（pkc）在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞（GMC）收缩中的作用。方法：人肾小球系膜细胞系用于全部实验。应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激蛋白激酶C抑制剂白屈菜红碱（CHE）处理或来处理的系膜细胞。利用激光扫描共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度。结果：①膜细胞经AngⅡ诱导后,细胞出现明显的大幅度起始钙离子浓度升高（vs．control,p〈0．05,n=16）⑦膜细胞经CHE预处理后减少AngⅡ诱导的GMC钙离子浓度（vsAngⅡ,p〈O．05,n=16）。结论：①血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞收缩。②蛋白激酶C参与血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞的收缩过程。     

前列腺素F2α对大鼠肾小球系膜细胞DNA合成的影响

本实验应用（＾３Ｈ）胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定前列腺素Ｆ２α（ＰＧＦ２α）对大鼠肾小球系膜细胞ＤＮＡ合成的作用,测定系膜细胞合成的二脂酰甘油（ＤＡＧ）及磷酸肌醇（ＩＰ）。结果表明,ＰＧＦ２α促进系膜细胞的ＤＮＡ合成、ＤＡＧ及ＩＰ的生成。提示ＰＧＦ２α使系膜细胞的磷脂酶Ｃ活化,产生ＩＰ及ＤＡＧ,激活蛋白激酶Ｃ,从而促进ＤＮＡ合成及细胞增殖。     

Tolrestat对高糖所致肾小球系膜细胞肌动蛋白去组装的影响

研究了醛糖还原酶抑制剂Tolrestat对高浓度葡萄糖(HG)所致肾小球系膜细胞(MC)肌动蛋白(actin)组装的影响。结果证明,与正常浓度葡萄糖(NG)相比,在HG培养的MC,F-actin失去束状外观呈不规则网状,显示F-actin部分去组装;F-actin荧光强度降低,G-actin荧光强度升高和F-/G-actin荧光强度比值下降。Tolrestat加入培养后,明显防止HG引起的F-actin去组装及F-和G-actin荧光强度的变化。提示多元醇通路激活在HG引起的MCactin去组装改变中起一定作用。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ＰＡ对人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２细胞的生长调控、诱导调亡作用。结果表明：４－ＰＡ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖抑制的ＩＣ５０为４－９ｍｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０增加。作用效果迅速,在０．５小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ＰＡ浓度的增加和作用时间的处长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞调亡的分析发现：４     

Ⅰ型胶原,内皮素对肾小球内皮细胞及系膜细胞产生细胞外基…

本文观察了Ⅰ型胶原，内波素对肾小球内皮细胞、系膜细胞增殖的影响，同时探讨了Ⅰ型胶原和内皮素对培养的内皮细胞及系膜细胞产生层粘连蛋白、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响。结果提示：Ⅰ型胶原可以明显促进内皮细胞的增殖，内皮素对系膜细胞的增殖有一定作用；Ⅰ型胶原可以促进内皮细胞产生层粘连蛋白和纤连蛋白，并可以促进系膜细胞产生Ⅳ型胶原；内皮素可以促进系膜细胞产生ＦＮ增多。     

全反式维甲酸对SD大鼠系膜细胞株增殖和Ⅳ型胶原的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响.方法:以高糖(葡萄糖浓度为25mmol.1-1)刺激体外培养的大鼠MCs增殖,然后根据实验分组加入不同浓度的ATRA:对照组:5.6mmol.1-1葡萄糖+2%FBS DMEM培养基;实验组:25 mmol.1-1葡萄糖+2%FBS DMEM培养基+不同浓度的ATRA(分别为0 mol.1-1、10-8 mol.1-1、10-7mol.1-1、10-6mol.1-1,采用MTT比色法观察12、24、48h系膜细胞的增殖情况;Elisa法测定12、24、48h细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量.结果:ATRA有抑制高糖所致的MCs增殖、减少细胞外基质(ECM)的作用,并呈剂量时间依赖性.结论:ATRA对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性.     

缬沙坦对人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的影响

目的：本实验探讨缬沙坦对糖基化终产物诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激水平及糖基化终产物受体（RAGE）表达的影响。方法：体外常规培养人肾小球系膜细胞,运用糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）和缬沙坦进行干预,流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）,RT-PCR法检测NADPH氧化酶的亚基p47^phox的mRNA表达,RT-PCR和细胞免疫化学法检测RAGE的表达量。结果：缬沙坦干预组人肾小球系膜细胞的ROS产生量、NADPH氧化酶的亚基p47^phox mRNA表达量、RAGE表达量均低于AGE-BSA组（P〈0．05）,且缬沙坦的抑制作用呈浓度和时间依赖性。结论：缬沙坦可能通过降低氧化应激水平来抑制RAGE的表达。     

Ⅰ型胶原、内皮素对肾小球内皮细胞及系膜细胞产生细胞外基质的影响

本文观察了Ⅰ型胶原、内皮素对肾小球内皮细胞、系膜细胞增殖的影响,同时探讨了Ⅰ型胶原和内皮素对培养的内皮细胞及系膜细胞产生层粘连蛋白、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响。结果提示:Ⅰ型胶原可以明显促进内皮细胞的增殖(P<0.01),内皮素对系膜细胞的增殖有一定作用:Ⅰ型胶原可以促进内皮细胞产生层粘连蛋白和纤连蛋白,并可以促进系膜细胞产生Ⅳ型胶原;内皮素可以促进系膜细胞产生FN增多(P<0.05)。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c—fos和c—…

在建立大鼠肾小球系膜细胞体外培养方法的基础上,通过＾３Ｈ－ＴｄＲ参入实验,ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣ ＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。     

黄芪对白介素1β诱导的大鼠系膜细胞增殖和细胞外基质产生的影响

目的:观察黄芪(Astragalus Membranaceus,AM)注射剂对5/6肾切除大鼠模型的疗效,及体外对系膜细胞(Mesangial cells,MCs)增殖和细胞外基质(Intracellular Matrix,ECM)产生的影响。方法:建立5/6肾切除大鼠模型后,将大鼠分为四组:对照组、未治疗组、低剂量/高剂量AM治疗组。观察比较16周后各组大鼠肾功能和尿蛋白排泄量情况。体外以白介素1β(IL-1β)作为刺激物,诱导MCs增殖,给予不同剂量AM干预。二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测MCs增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中纤连蛋白(fibronectin)含量,RT-PCR检测细胞p38 mRNA表达,Western免疫印迹法检测胶原Ⅳ、总p38MAPK、磷酸化p38MAPK、磷酸化MKK3/MKK6、磷酸化MKK4等蛋白水平。结果:在体外AM可显著抑制IL-1β诱导的MCs增殖和阻止细胞进入合成周期,显著降低fibronectin、胶原Ⅳ产生,磷酸化p38蛋白和磷酸化MKK3/MKK6的表达显著受抑;在体内AM治疗能显著改善5/6肾切除大鼠的肾功能情况,降低蛋白尿排泄量,延缓肾功能恶化。结论:AM治疗可通过抑制磷酸化MKK3/6和磷酸化p38 MAPK蛋白的表达,发挥抑制IL-1β诱导的MCs增殖作用,能抑制MCs的ECM积聚,有效的治疗进展性肾脏病,为慢性肾纤维化提供了有前景的治疗策略。     

微机化动态光度法细胞力学分析仪研究药物对红细胞膜的作用

介绍了一种新型的微机化动态流光度法细胞力学参数分析仪,它能自动测量静态红细胞参数(RF)、膜硬度、(S)半松弛时间、(t50%)和细胞粘度(VP)等微力学参数,来描述细胞力学特性.对仪器的灵敏度、精确度和重复性,对Triton、水杨酸钠.ROK、TRE、DUS、EGb761等药物对于红细胞力学性质的作用分别进行了研究,证明了本仪器对药理作用研究具有重要价值,并认为该仪器在今后临床检验中有广泛的应用价值.     

高氨基酸血症对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响及与氧化应激的关系

目的研究高氨基酸血症对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）表达的影响,探讨氧化应激在其中的作用。方法大鼠肾小球系膜细胞分为不同培养环境下的对照组（C组）、高氨基酸组（HA组）、维生素E组（HA。组）。培养24h后用荧光染料2’,7’-Dichloroluorescin diacetate（20μmoL／L）测定各组细胞内活性氧产物（reactive oxygen specie,ROS）的生成情况从而反应细胞内氧化应激水平,培养24h后采用RT-PCR检测各组CTGFmRNA表达,培养48h后采用Western印迹检测各组CTGF蛋白的表达。结果HA组氧化应激水平、CTGFmRNA及蛋白的表达均明显高于C组（P〈0.05）;HA。组其氧化应激水平、CTGFmRNA及蛋白表达较HA组明显降低（P〈0．05）,且与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高氨基酸血症可使肾小球系膜细胞氧化应激水平升高并产生过多的CTGF,抗氧化剂维生素E可减轻系膜细胞氧化应激及CTGF的表达,提示高氨基酸诱导的CTGF表达增多可能与氧化应激有关。