红花不定芽的诱导研究

目的:对新疆主栽红花品种新红花4号进行组织培养,研究了外植体、植物激素、光照强度及苗龄等因素对红花不定芽诱导的影响。结果:不同的外植体分化能力及对激素要求差异较大。胚根不定芽诱导率高于子叶,胚轴未见不定芽分化,胚根在MS 6-BA 2.0mg·L-1的培养基中不定芽诱导率最高,子叶在MS 6-BA 1.5mg·L-1 NAA 0.5mg·L-1激素组合中不定芽诱导率较好。7日龄胚根诱导不定芽优于3日龄和10日龄不定芽诱导效果,弱光条件对不定芽的诱导略优于强光。结论:优化了新红花4号不定芽培养条件,为其良种快速繁殖、遗传转化等奠定了基础。     

银杏愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

采用正交试验设计法,研究了NAA、KT、2,4-D、蔗糖浓度和不同外植体类型等因素对银杏愈伤组织诱导的影响。结果表明:不同外植体类型对银杏愈伤组织诱导率影响最大,KT和NAA其次,2,4-D和蔗糖浓度最小。银杏愈伤组织诱导最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1,最佳外植体为茎段,其愈伤组织诱导率可达100%。     

菜薹花药培养诱导胚状体的研究

分别以特早50、青梗菜心、9872和四九菜心(19)为供试材料,进行了基因型、温度、碳源等因素对菜心花药培养诱导胚状体影响的研究.结果 表明:不同基因型菜薹花药诱导率的差异显著,在改良B5固体培养基上特早50、9872、四九菜心(19)的诱导率依次降低,而青梗菜心诱导不出胚状体;不同温度的前处理对9872花药的诱导率也存在影响,其中以4℃低温1预处理幼花序1～2d和33℃(2温预培养24～48h的处理效果最佳;碳源对胚状体的诱导也有较大影响,其中蔗糖效果好于麦芽糖,且质量浓度为13%的蔗糖对特早50诱导率最高,而13%的麦芽糖诱导不出胚状体.     

聚乙二醇诱导鸡红细胞融合条件的优化

目的:探讨聚乙二醇诱导鸡红细胞融合最适条件.方法:以鸡红细胞为材料,聚乙二醇为诱导剂,从细胞密度、融合温度、聚乙二醇浓度及反应时间进行单因素实验,并设计3因素3水平的正交实验计算细胞融合率.结果:鸡红细胞融合的最佳条件是:细胞密度为2×106个/ml,聚乙二醇浓度为35%,反应温度为35℃,反应时间40min.结论:在该条件下,细胞融合率最高达33.06%.     

多年生黑麦草再生体系的建立

以多年生黑麦草‘高帽2号’(Lolium perenne‘Top Hat 2’)颖果为外植体,分别研究了胚端半粒颖果、纵切的胚端半粒颖果、胚端颖果小块、颖果小块这四种外植体处理方式与氯化汞、次氯酸钠两种表面灭菌方法对其愈伤组诱导的影响;利用两因素(2,4-D和6-BA)随机区组试验设计研究了不同植物生长调节物质及其浓度配比对外植体愈伤组织诱导的影响;利用三因素(NAA,6-BA和ZT)四水平正交试验设计研究了不同植物生长调节物质及其浓度配比对不定芽诱导的影响;研究了0.10 mg·L-1的NAA和IBA分别对不定根诱导的影响。结果表明:相同条件下,以饱满胚端半粒颖果为外植体,75%酒精表面灭菌1 min后,再用含1 m L·L-1Tween 20的次氯酸钠溶液(有效氯含量10%)处理30 min,愈伤组织诱导率最高;适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+5 mg·L-12,4-D+0.03 mg·L-16-BA(p H=5.8),诱导率达68.7%,获得的高质量愈伤组织;不定芽诱导培养基为MS+0.5 mg·L-1NAA、0.5 mg·L-16-BA+0.9 mg·L-1ZT,不定芽诱导率最高,为56%;不定根诱导培养基为1/2MS+IBA培养基时,根系粗壮,诱导生根率为90%。该研究建立了多年生黑麦草高效组培再生体系,为高效基因工程育种的开展奠定了良好基础。     

当归挥发油的提取与β-环糊精包合工艺研究

以当归挥发油的包合率和包合物收率为指标,比较了饱和溶液法、研磨法、超声法包合当归挥发油技术的优劣,并采用四因素三水平正交设计法分别对挥发油的水蒸气蒸馏提取工艺和超声包合工艺条件进行优选,得到了较理想的工艺条件.最佳提取工艺条件为:当归粉碎为10目,加12倍量水,不浸泡的情况下提取10 h.最佳包合工艺条件为:超声时间为60min,挥发油/mL:β-CD/g的比例为:1∶6,水/mL:β-CD/g的比例为8∶1.超声包合法操作简便,对当归挥发油的包合率高,包合效果好.     

无患子愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

目的:探寻无患子愈伤组织诱导的最佳外植体、培养基和培养条件。方法:采用5因素混合水平正交设计,用DPS2000统计软件对其结果进行方差分析和多重比较(SSR)。结果:诱导愈伤组织的最佳外植体为当年生枝条水培芽的嫩茎段,用0.2%HgCl2消毒2min,其无菌存活率为98.33%,培养条件为光照或黑暗,最佳培养基配方为:MS(B5) 6-BA 1.5mg.l-1 NAA0.2mg.l-1,其愈伤组织的诱导率为97.78%。结论:激素配比是影响愈伤组织诱导的主要因素。较高的6-BA浓度(1.5~2.5mg.l-1)与较低的NAA浓度(0.2mg.l-1)配比,有利于无患子愈伤组织的诱导。     

不同因子对山药愈伤组织诱导的影响

研究了基因型、外植体、植物激素和光暗等因子对山药愈伤组织诱导的影响。结果表明 :(1)不同基因型山药均能诱导形成愈伤组织 ,但出愈率不同 ,其排列顺序是 :“4 7号”山药 >铁棍山药 >太谷山药。 (2 )不同外植体在同一种培养基上的诱导率存在差异。同一外植体在不同植物激素浓度配比中 ,诱导率也不同。叶片、茎段、零余子的最佳激素配比均为 6 - BA2 (mg/ L,以下单位同 ) +NAA2 ,诱导率分别为 53.3%、 6 5.6 %、 10 0 % ,茎尖的最佳激素配比为 6 - BA2 +NAA0 .2 ,诱导率为 93.3%。 (3)植物激素在愈伤组织诱导过程中起关键的作用。细胞分裂素与生长素组合使用优于单一激素。二者的浓度配比不同 ,出愈率也不同。 (4 )光暗条件对不同外植体愈伤组织诱导的影响不同。暗培养有利于零余子的诱导 ,而光培养则有利于叶片的诱导。     

膜分离法纯化大蒜超氧化物歧化酶的条件研究

本文探讨了膜分离技术分离纯化大蒜超氧化物歧化酶(SOD )的工艺条件,研究了中空纤维超滤膜分离提纯大蒜SOD的工艺参数.通过单因素实验,分析了温度、压力、透过率对SOD活力回收率的影响;并通过正交实验确定出超滤膜分离法的最佳条件:温度32 ℃,压力0.15 MPa,透过率90%.在此基础上研究了纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化的工艺条件,适宜的纳滤条件为:温度32 ℃,压力1.4 MPa.     

商陆离体再生体系的构建

目的:建立商陆离体再生体系。方法:选取商陆的幼茎、茎节、叶片、叶柄和顶芽为外植体,以MS作为基本培养基,通过添加不同浓度配比的植物生长调节剂分别进行愈伤组织、丛生芽和生根诱导,筛选商陆离体再生体系方案。结果:顶芽和幼茎为外植体诱导的愈伤组织出愈时间早,愈伤组织质量高,以培养基MS+6-BA0.5 mg/L+2.4-D 0.5 mg/L的诱导率最高,达到100%;其中,只有以顶芽产生的愈伤组织才能分化出丛生芽,芽分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L,诱导率为98%;诱导生根的适宜培养基为1/2 MS+NAA 0.3 mg/L,诱导率达100%。结论:建立和完善了商陆离体再生体系方案,为商陆遗传转化体系的构建奠定了基础。     

不同生长调节剂对狗肝菜愈伤组织诱导和离体快繁的影响

目的 :研究不同生长调节剂对狗肝菜愈伤组织诱导和离体快繁的影响。方法 :狗肝菜不同外植体在附加不同生长调节剂的培养基上诱导愈伤组织 ,比较愈伤组织的诱导率 ;用 3因子 5水平的正交实验 ,比较不同生长调节剂对丛生芽诱导的影响 ;在附加不同生长调节剂的培养基上比较芽增殖倍数 ;附加不同浓度NAA的培养基上比较生根效果。结果 :愈伤组织诱导率相对以叶片最高 ,茎段次之 ,最后为叶柄 ;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 6-BA0 .5 NAA1 .5 ;不同激素对茎段芽诱导的影响次序为 6-BA>KT >NAA ,芽诱导的最佳培养基为MS 6-BA2mg/L KT1mg/L NAA0 .5mg/L ;芽继代增殖的最佳激素组合是MS 6-BA2mg/L NAA2mg/L ,增殖倍数达 3.0 0 ,影响芽继代增殖的因素次序为 6-BA >NAANAA0 .5mg/L的生根效果较好。结论 :附加一定的生长调节剂能提高狗肝菜愈伤组织的诱导率和离体快繁的效率。     

银杏叶多酚的机械力辅助提取及其体外抗氧化活性研究

为优化银杏叶多酚提取工艺,通过单因素试验考察填充率、球磨转速、球磨时间、乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间七个因素对机械力辅助提取银杏叶多酚得率的影响,以银杏叶多酚得率为响应值,采用Box-Benhnken三因素三水平响应面设计优化工艺,同时比较了4种提取方法对银杏叶多酚提取得率和抗氧化活性的差异。结果表明,机械力辅助提取银杏叶多酚的最佳工艺条件为:填充率26%、球磨转速为400rpm、球磨时间为15min。在此条件下,银杏叶多酚的得率为7.33%。机械力辅助乙醇提取银杏叶多酚得率低于碱水提取法,但是抗氧化活性高于碱水法提取的银杏叶多酚;抗氧化活性与乙醇回流法提取的银杏叶多酚相当,但是提取得率高于乙醇回流法。此提取工艺高效可行,具有一定的参考价值。     

鲜罗汉果果汁脱色方法研究

采用3因素3水平正交设计法,以脱色率、总甙收得率为指标,筛选影响罗汉果果汁颜色和总甙收得率的因素,建立了罗汉果果汁脱色的最佳工艺。结果表明实验设计的A因素对罗汉果果汁脱色率具有显著影响,C因素对总甙收得率有显著影响。最终优选鲜罗汉果果汁的脱色条件是A2BC3(鲜罗汉果∶D900树脂重量比为3∶1;固形物含量为工艺流程可变含量,洗水量为树脂重量的4倍),工艺中试验证时脱色率为96.5%、总甙收得率高达97.7%,该工艺技术操作简单,脱色效果好,回收率高,适合于工业化大生产。     

Box-Behnken响应面法优化金线莲颗粒成型工艺

以填充剂种类、辅料配比、原料用量、干燥温度和黏合剂用量为考察因素,以颗粒合格率、溶化性、吸湿性和感官评价的总评归一值(OD)作为评价指标,采用单因素实验并结合响应面优化设计优选金线莲颗粒剂最佳成型工艺。结果表明,最佳成型工艺为辅料乳糖:糊精=3:1,原料药比例7.01%、干燥温度50 ℃,按此方案进行试验,预测颗粒成型率87.18%,吸湿率8.22%,溶化时间34.95 s,感官评价81分。采用响应面法优化金线莲颗粒的成型工艺结果可靠,可为金线莲颗粒剂的工业化生产提供依据。     

高压脉冲电场法快速提取北五味子中五味子醇甲的工艺研究

本文采用正交实验优化提取方法,HPLC法测定五味子醇甲含量,对五味子的快速提取工艺方法进行了研究。结果表明:以80%乙醇作为提取液,电场强度10 kv/cm,脉冲数为10,料液比1∶10为最佳提取工艺;影响因素的大小依次为:电场强度、料液比、脉冲数。此法提取五味子中的五味子醇甲,提取率可达0.76%,得膏率达27.886%。本提取工艺可行,经济、省时、回收率高。     

细胞松弛素B对日本沼虾四倍体的适宜诱导条件的研究

本文研究了用细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导日本沼虾(Macrobrachium nipponense)多倍体的处理条件和方法。试验水温分别为18—19℃、22—23℃,CB浓度为1.0—2.0mg/L,处理的起始时间在受精后5—9h,处理的持续时间为10—20min。结果表明,在水温为18—19℃时,四倍体卵子的最适诱导条件为:受精后7—8h,CB溶液的浓度1.5mg/L,处理20min,四倍体诱导率最高可达56.1%;在水温为22—23℃时,最适诱导条件为:在受精后6 h左右,CB溶液浓度为1.5mg/L,处理15—20min,四倍体诱导率最高可达54.3%。处理的起始时间和CB溶液的浓度对胚胎的四倍体率有显著影响(P<0.05);胚胎的成活率随CB浓度的提高与处理的持续时间的延长而下降。考虑到胚胎成活率因素,建议选择CB浓度为1.5mg/L,处理持续时间15—20min。     

硫酸长春碱聚乳酸缓释纳米粒的制剂学研究和体外释放度考察

目的:制备硫酸长春碱聚乳酸纳米粒(VLB-PLA-NPs)并考察其体外释放度.方法:采用复乳挥发法制备VLB-PLA-NPs,以包封率为主要指标评价指标,选择聚乳酸用量、超声时间、外水相浓度为考察因素,优化制备工艺,考察体外释放度.结果:优化工艺制备得VLB-PLA-NPs平均粒径为65±3.03nm,包封率为(99.68±0.30)%,载药量为3.323±0.01μg/mg,体外释放可持续20天.结论:该制备工艺操作简便,结果稳定,缓释特征明显,应用前景良好.     

生长调节剂和渗透调节物质对水曲柳体胚发生的影响

以水曲柳成熟合子胚子叶为材料诱导体胚发生,通过改变诱导培养基中植物生长调节剂和渗透调节物质的种类及浓度,分析二者对水曲柳体胚发生的影响。研究结果表明：诱导培养基中的生长调节剂在水曲柳体胚发生过程中是必不可少的因素;高渗透压有利于体胚诱导：在添加生长调节剂的条件下,添加75 g·L^-1的蔗糖可提高体胚诱导率;通过在诱导培养基中添加100 g·L^-1蔗糖产生的体胚在含有BA的分化培养基上分化率更高。研究结果为提高水曲柳体胚诱导率、改善体胚发生状况和优化体胚发生体系奠定了基础。     

普通荞麦植株茎段快速繁殖技术的研究

以普通养麦（Fagopyrum esculentum Moench）植株带节茎段为外植体,用正交设计法研究不同激素处理对荞麦腋芽、丛生芽和根的诱导及分化过程的影响,建立了荞麦离体培养快速繁殖技术。极差分析表明,6-BA是诱导荞麦茎段腋芽和根发育的主要因素,TDZ是诱导丛生芽的关键因素。诱导荞麦茎段腋芽发育的最佳培养基为：MS0＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L,腋芽诱导率为67．9％。其中,以第二、三节位的腋芽诱导率较高,达80％以上。诱导荞麦茎段丛生芽发育的最佳培养基为：MS0＋6-BA4．0mg／L＋TDZ0．06mg／L,丛芽分化率为166．7％。诱导生根的最佳培养基为：1／2MS0＋6-BA1．0mg／L＋NAA1．0mg／L,生根率为82．8％。该组织培养技术的建立为养麦快速繁殖提供了新途径。     

重组毕赤酵母产植酸酶发酵条件的优化

为研究优化毕赤酵母工程菌H311产植酸酶的发酵条件,采用单因素试验和L18(37)正交试验考察不同工艺条件对产酶活性的影响。结果表明:影响重组毕赤酵母产植酸酶的因素重要性从大到小依次为诱导时间、甲醇添加量、装液量、初始诱导p H、生长时间、接种量和初始生长p H,产酶最佳条件为接种量3%(体积分数)、装液量20 m L(250 m L摇瓶)、生长时间20 h,诱导时间120 h、甲醇添加量1.5%(体积分数)、生长p H 6.0、诱导p H 5.0,在此条件下进行诱导表达,植酸酶的比酶活可达334 U/m L。