绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗对反复发作性尿路感染的治疗及其机制研究

采用绿脓杆菌ＭＳＨＡ菌毛株菌苗（ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗）治疗了４０例使用抗生素无效的ＲＵＴＩ,取得了满意的疗效,有效率９５％（３８／４０）,治愈率９２．５％（３７／４０）。对其中１８例进行了治疗前后血清抗ＭＳＨＡ菌毛株抗体效价和外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定。疗后患者血清中抗ＭＳＨＡ菌毛株抗体效价较疗前增高８～６４倍;同时外周血Ｔ淋巴细胞亚群的比例得到了改善,ＣＤ３＾＋和ＣＤ４＾＋Ｔ细胞的百分率显著提高（Ｐ〈０．０１）,而ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的百分率则显著下降（Ｐ〈０．００１）。治疗过程未见明显的副作用。研究表明：ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗对反复发作性尿路感染治愈率高,安全可靠,患者的免疫低下状态得到改善,且对多种病原菌（包括革兰阴性杆菌及其Ｌ型、金黄色葡萄球菌及其Ｌ型）所致的ＲＵＴＩ效果都很好。     

"绿脓杆菌-MSHA菌毛株菌苗"对医院感染及肿瘤的治疗研究

目的：报导使用牟希亚,郭雁群发明的“绿脓杆菌-MSHA菌毛株菌苗”,全面调查与激活人体的免疫保护状态,从而消除了癌症患者的免疫低下状态,不仅对防治严重致死性条件病原体医院感染有良好作用。同时对增加癌症患者的CR率和降低其PD率也发生着重要影响。如经“菌苗”参与治疗后,肺癌的条件病原体感染率由单纯化疗的40.89%降至15.91%,恶性淋巴瘤的感染率由37.21%下降至17.78%;临床CR（完全缓解率）分别从6.67%升至25.00和从44.19%升至66.87%;临床PD（疾病恶化）率则从15.56%降至4.55%和自11.63%降至0。急性白血病的感染率从94.12%降至58.82%。免疫状态也明显向健康状态转变。     

温度敏感突变株在病毒学研究中的应用

本文根据病毒温度敏感突变（ｔｓ）株的特征,介绍了该突变株在病毒学研究中的应用情况;并简要介绍应用于预防病毒性疾病中的状况。     

PA-MSHA引起注射局部急性炎症及白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和Toll样受体4的表达改变

为研究皮下注射铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(Pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)注射液后局部组织的病理学改变及白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达情况,将30只小鼠随机分为两组,分别皮下注射PA-MSHA和生理盐水,在注射后6、12、24、48及72h取注射局部组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后观察病理形态改变,并用免疫组化染色和图像分析检测IL-17、TNF-α和TLR4表达水平。结果显示,小鼠皮下注射PA-MSHA后,在给药部位引起以中性粒细胞浸润为主的急性炎症;局部炎症灶中IL-17、TNF-α和TLR4表达在注射后6h升高,24h达到高峰,然后逐渐减低,至72h实验组与对照组无差异;3种炎症因子的表达与炎症反应程度相平行。结果表明,皮下注射PA-MSHA能引起局部组织急性炎症反应,且能改变局部免疫状态。     

甲型流感病毒自然温度敏感株的宿主依赖性

用鸡胚细胞(CEC)和Madin-Darby Canine Kidney(MDCK)两个宿主细胞系统,检查甲型流感病毒各亚型不同时期流行株的温度敏感性状(ts),发现自然界存在许多宿主依赖的温度敏感性突变株(hd-ts)。它们在CEC上是ts,在MDCK上却是ts~ 。检出的hd-ts株中有些曾经过人体接种观察证明为减毒株。这表明在CEC中鉴定的ts表型与对人减毒性状密切相关。     

甲型流行性感冒病毒自然温度敏感株基因损害定位

采用重组试验和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,把晚期甲3型流感病毒自然ts突变株齐防79-39的ts损害定位在膜蛋白(M)基因上。但互补试验表明,齐防79-39与M基因损害的WSN标准株ts51可以发生互补,这是基因内互补的一个证据。PAGE技术证实,新甲1型流感病毒自然ts株津防77-78的M基因上确有损害。互补试验证明齐防79-39属于一个互补组,而津防77-78与ts51同属于另一个互补组。 本文结果还表明,晚期甲3型齐防79-39的ts损害基因可能是由甲3型野毒株自发突变所产生,而并非通过在自然界与新甲1型重组而获得。     

多价免疫原用绿脓杆菌CMCC(B)-10117株替换株的初选

从临床分离绿脓杆菌菌株中,筛选与CMCC(B)-10117株抗原高度相关的菌株PA02010,PA02015,PA02033,PA02037和PA02048进行抗原成分分析。在此基础上,选择了PA02048进行家兔抗原性试验和小鼠保护性试验。家兔抗原性试验证明,肌肉注射的效价为1：320～1：640;静脉注射产生抗体能力强于肌肉注射,效价为1：2560～1：5120。从动物保护性试验看,免疫动物均能很好耐受5个LD50的本菌攻击,在10个LD50的本菌攻击时,免疫动物的存活率能达到90％;而对照组动物没有一个存活。所有试验表明。PA02048菌株是替代CMCC(B)-10117菌株的较为理想的菌株。     

L-谷氨酸温度敏感突变株的选育

采用黄色短杆菌TJ1为出发菌株,根据代谢控制发酵原理,利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TMGO106。然后,以温度敏感突变株TMGO106和产酸率高（10.5%以上）的天津短杆菌TG961为新株,通过原生质体融合技术,成功地选育出了产酸率高的融合子CN1021（13．6g/dl,糖酸转化率达60％）,在6m^3发酵罐上中试其L－谷氨酸产量达14．6％,糖酸转化率达62．8％,并且该菌株系温度敏感型菌株,可用于谷氨酸强度发酵。     

预防幼畜腹泻双价工程菌苗株的构建及表达

Bam HI部分酶切表达K99抗原的重组质粒pMGK99,将其与相同酶切的含有F41菌毛基因的片段相连接,构建了载有两种抗原基因的质粒pMG611。通过转化大肠杆菌K12HB101、RRI和c600,得到HBlOl(pMG611)、RRl(pMG611)和C600(pMG611)菌株。经甘露糖抗性血凝试验、玻片凝集试验和western blot分析证明K99和F4l两种菌毛抗原在每株菌中均获表达。sDs—PAGE结果表明所表达K99和F4l菌毛亚单位的分子量与其各自野生株所产生的相同,分别是17200和29800Da,ELIsA测定HB101(pMG611)菌株表达K99和K41菌毛抗原的水平与相应出发菌株相同,而高于其野生株。本实验对质粒pMG611表达K99和F41菌毛抗原的影响因素也进行了研究。     

甘蔗转基因甘露糖筛选系统的建立

以甘露糖作为筛选底物,对甘蔗品种新台糖22号进行临界筛选浓度测定,获得愈伤组织的继代、分化、生根的临界筛选浓度。而后应用含有甘露糖筛选标记基因pmi及绿色荧光蛋白报告基因GFP的植物表达载体,通过农杆菌介导法对新台糖22号的愈伤组织进行遗传转化。用所测定的临界筛选浓度先后进行继代、分化、生根筛选培养,获得抗性植株。对获得的抗性植株分别进行pmi基因和GFP基因的PCR检测,以及GFP显微镜荧光检测,结果证实已成功建立了高效的甘蔗转基因甘露糖筛选系统。     

哈尔滨市112株绿脓杆菌的血清学分型和耐药性测定

对从临床分离的112株绿脓杆菌进行系统鉴定后,血清学分型表明:6、2和3型分别占32.14％、15.18％、15.18％,为主要流行型,共占总分离株的62.50％。耐药性测定结果为:对10种抗生素5耐以上者占69.6％。其中对多粘菌素、妥布霉素、丁胺卡那霉素三种抗生素最为敏感,敏感率分别为100％、70.6％、86.5％。     

肺炎克雷伯菌菌毛的研究进展

肺炎克雷伯菌为条件致病菌,可引起肺炎、败血症等多种化脓性炎症,近年来肺炎克雷伯菌也成为医院内感染的主要致病菌之一。研究表明,菌毛作为细菌重要的毒力因子之一,在细菌黏附过程中起重要作用,细菌可借助于菌毛尖端黏附素黏附到宿主的组织器官,这是引起机体致病的首要条件。肺炎克雷伯菌菌毛包括Ⅰ型菌毛和Ⅲ型菌毛,绝大多数的肺炎克雷伯菌均可表达Ⅲ型菌毛,在医院感染的致病过程中起到关键作用。     

真核生物蛋白质O-甘露糖基化的研究进展

蛋白质O-甘露糖基化是真核生物中广泛存在的蛋白质翻译后修饰过程,即在甘露糖转移酶(PMT)作用下将长萜酰甘露糖上活化的甘露糖连接到肽链上Ser或者Thr羟基的过程。本文着重介绍在真核生物里真菌和哺乳动物中O-甘露糖基化蛋白的O-甘露聚糖结构、合成过程和生物学意义。     

链霉菌来源D-甘露糖异构酶的性质及其在制备D-甘露糖中的应用

[背景]D-甘露糖具有多种功能活性,在食品、医药、饲料等行业应用广泛.D-甘露糖异构酶可以催化D-果糖与D-甘露糖之间的相互转化,在D-甘露糖的酶法制备中具有应用潜力.[目的]克隆一个链霉菌(Streptomyces sp.)来源的D-甘露糖异构酶基因(sssMIaseA)并在大肠杆菌中表达,研究其酶学性质,并用于制备...     

北京地区实验动物绿脓杆菌分离株MLVA分型

目的通过多位点可变数目串联重复序列分析（multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA）分型方法,研究北京地区实验动物绿脓杆菌分离株基因型和分布情况。方法选择13个可变数目重复序列（variable-number tandem-repeat,VNTR）位点,对实验动物及设施中检测出的141株绿脓杆菌的基因组DNA进行重复序列扩增,所得指纹图谱使用BioNumerics软件进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树（minimum spanning tree,MST）。结果所采用的13个VNTR位点能够对全部分离株进行有效分型。141株绿脓杆菌主要被分为了3个基因群,56个基因型。各群所占比例分别为A群82.3%,B群占12.8%,C群占5.0%,辛普森多样性指数为0.763。同一区域内相邻实验动物单位的绿脓杆菌分离株同源关系较远。结论 MLVA方法对绿脓杆菌具有很好的分型能力,能够有效的追踪绿脓杆菌的来源。北京地区实验动物中绿脓杆菌分离株基因型多态性丰富,但无地域性同源关系。     

绿脓杆菌的快速鉴定方法

比较了绿脓杆菌、埃希氏大肠杆菌、摩尔根变形杆菌和几株不发酵葡萄糖的革兰氏阴性杆菌的乙酰胺酶产生情况,证明只有绿脓杆菌产生乙酰胺酶。对临床采集的１０８份标本应用乙酰胺酶法进行了检测,表明６～８小时即得出结果。根据乙酰胺酶检测绿脓杆菌,能够达到快速准确的目的。为临床治疗提供了有利条件。     

啤酒酵母DNA修复基因RAD24温度敏感突变株的分离及其特性的初步研究

以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒,用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现,ｒａｄ２４－ｔｓ３对紫外线敏感;同位素（３Ｈ－ＴｄＲ,３Ｈ－ＵＲ,３Ｈ－Ｌｅｕ）参入试验表明,该突变株ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成均较野生型明显降低．