其它药剂

<正>本文描述了在探求疟疾疫苗中的一种使用多特异性人血清筛选表达恶性疟原虫。D-NA序列的大肠杆菌集落的方法。使用不A-mp3作为表达恶性疟原虫cDNA的克隆化工具。Lambda一Amp3。DNA重组物     

虹鳟鱼bFGF克隆和大量表达获得成功

日本水产研究所成功地克隆了作为鱼伤治疗药而开发的虹鳟鱼嗜碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的cDNA。另外,可用大肠杆菌生产克隆化的bFGF,用小鼠以及鱼类的培养细胞进行实验确认bFGF有细胞增殖活性。于4月1～5日在东京召开的日本水产学会上发表了该项成果。 在运输中鱼与鱼之间相互摩擦有时会受伤。一旦负伤,鱼就有可能因感染而死亡。严重时热带鱼损失50%。日本水产研究所在运输用的水槽中混入bFGF,用作伤口的治疗药。最初只考虑作为不进入人口     

乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达

本文报道用酵母磷酸甘油酸激酶相似文献   

用基因工程方法制成人生长激素

去年七月,J A Martial等人和美国基因技术公司研究小组分别实验成功用遗传工程方法制造人生长激素。但他们所用的方法却不同。Martial等人先分离生长激素mRNA,经反转录法合成cDNA,cDNA经分子扩增后,插入表达性载体。这样大肠杆菌生产的是生长激素前体。这种前体需切掉多余的肽腱,才能     

应用聚合酶链反应改造蛙鱼生长激素cDNA

为了在大肠杆菌中表达天然序列的娃鱼生长激素基因,本研究应用聚合酶链反应扩增方法改造娃 鱼生长激素cDNA,成功地扩增出编码蛙鱼生长激素成熟肤的序列,并在该序列的5端和3端分别引 人EcoRI和BamHI的识别序列,使之便于进入载体,获得亚克隆。结果表明：应用聚合酶链反应扩 增及分子克隆方法改造蛙鱼生长激素cDNA较传统的DNA重组方法简便,效率高。文中对聚合酶链 反应扩增中非预期突变进行了讨论。     

克隆化烟草花叶病毒感染特异蛋白的cDNA

日本农林水产省农业生物资源研究所细胞育种部细胞生理学研究室大桥佑子、分子育种部生育基因研究室松冈信等,对烟草感染烟草花叶病毒(TMV)而诱导产生的感染特异蛋白(PR)的cDNA克隆化成功,还查明了它的碱基序列。抗TMV的品种,PR的产量有较多的趋势。他们一方面加速对生理活性进行分析,现在还正在克隆化染色体组DNA。如能查明     

虹鳟生长激素cDNA在酵母中的表达*

采用聚合酶链式反应(PCR)技术对虹鳟生长激素cDNA进行改造。将改造后的基因克隆到含酵母PGK启动子的大肠杆菌酵母穿梭质粒pMA91,转化酿酒酵母Y33,构建表达鱼生长激素的酵母工程菌Y33(pMArGH16),并在酵母中获得表达,表达量约占细胞可溶性蛋白总量的3%。表达产物作为饲料添加剂投喂罗非鱼,具有明显的促进生长作用。     

促使细胞自杀的“Fas”的cDNA克隆化成功

大阪生物研究所第一研究部长长田重一与东京都临床医学综合研究所细胞生物研究部门的米原伸等研究组成功地实现了蛋白“Fas”的cDNA的克隆化并发表在Cell杂志91年7月26号(P233—243)。 抗Fas抗体具有类似于TNF的作用,但TNF不与Fas抗原结合,最早米原提出了这样     

大豆根瘤菌固氮酶的铁蛋白基因

大豆根瘤菌(Rhizobivmjaponicum)的固氮酶具有与肺炎克氏杆菌(Klebsiella Pneumoniae)和苜蓿根瘤菌(R.meliloti)二者固氮酶相同的铁蛋白基因(nif H)。铁蛋白基因的大小为12.1Kb,部分基因片段已经克隆化。将nifH的一部分克隆化,并使之在大肠杆菌(E.Coli)     

鲤鱼生长激素基因的PCR扩增、克隆及其序列比较

从鲤鱼(Cyprinus carpio)脑垂体中分离其总RNA,经反转录成为第一条链cDNA。以第一条链cDNA为模板,以合成的两段29个寡聚核苷酸为引物,再经过PCR扩增,合成了鲤鱼的生长激素基因,并把其克隆到大肠杆菌表达载体(P^{blue-ocripx Ks+/-})上。序列分析和限制酶切图谱表明所克隆的鲤鱼生长激素基因的开放读框含有630bp,编码210个氨基酸,其中含有22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟GH序列。我们所克隆的鲤鱼GH基因与Koren发表的鲤鱼GHcDNA的序列在编码区完全一致,但是与chao发表的鲤鱼GHcDNA比较,在编码区核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为95．6％和96．7％。     

协和发酵公司经口投予鲑生长激素成功

日本协和发酵公司水产研究所研究员安部敏男等经口投予用大肠杆菌制造的重组鲑生长激素,促进了鳗鲡、香鱼、真鲷、比目鱼等鱼苗的生长成功。因此,不用注射和浸渍法等费事的方法,而把生长激素混合在饵食中达到让养殖鱼摄入的目标。现在的成果冲破了鱼类生长激素开发的巨大障碍,使生长激素进一步接近实用化。4月2～5日在东京召开的水产学会上发表了这项研究的详细情况。实验中,把用大肠杆菌制造的鲑生长激素,均匀地和配合饲料混合,冷冻真空干燥成     

用大肠杆菌同源重组获得克隆化重组腺病毒基因组

利用大肠杆菌细胞内质粒间同源重组获得克隆化重组腺病毒基因组 DNA,高效构建携带有外源基因的均一重组腺病毒 .将带有狂犬病毒糖蛋白 (GP)基因和加强型 GFP(enhanced GFP,EGFP)表达盒的重组穿梭质粒 p Ad- Track- CMV/ GP与腺病毒骨架载体质粒 p Ad Easy- 1一起同时电击共转化大肠杆菌 BJ51 83.在 BJ51 83细胞内 ,带有同源序列的重组穿梭质粒与骨架载体可进行同源重组 ,得到以质粒形式存在的克隆化重组腺病毒基因组 p Ad- GP’.以 p Ad- GP’为模板 ,经DNA测序确认 GP基因成功整合入此质粒中的腺病毒基因组 E1区外源基因表达盒中 .线形化的p Ad- GP’转染 2 93细胞后可得到基因组结构均一、在 E1区插入有 GP和 EGFP表达盒的重组腺病毒 ,病毒滴度可达 1× 1 0 8pfu/ ml.电镜下此重组病毒颗粒直径约为 70 nm,略呈球形 ,用荧光显微镜观察感染细胞有很强的 EGFP表达 .实验表明 :利用大肠杆菌同源重组获得克隆化的重组腺病毒基因组 DNA,可高效制备高滴度的均一重组腺病毒     

家蚕天蚕素cDNA原核表达及抗菌活性检测

采用RT-PCR方法从家蚕Bombyx mori新疆品种新蚕三号组织中扩增天蚕素cDNA片段,回收并克隆至Pmd18-T载体,进行序列分析。基因序列分析结果与已发表的天蚕素B的序列同源性为98%,表明所克隆的新疆家蚕天蚕素cDNA为独特的cDNA片段。将天蚕素基因与Pgex-4T-1融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶基因融合,在大肠杆菌中表达, 结果表明经IPTG 诱导30 min后,pGEX-4T-1/天蚕素转化后的大肠杆菌生长明显受到抑制;当诱导210 min 后,大肠杆菌数量又开始增加,逐渐恢复至正常水平。说明天蚕素与谷胱甘肽转移酶基因融合表达后,在IPTG存在的短时间内仍然对原核细胞有较强的抗菌抑杀作用。     

猪生长激素cDNA在芽孢杆菌中的表达

利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质粒pSGH 1864,将此质粒转化蛋白酶双缺陷的枯草杆菌DB104及短小茅孢杆菌289。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检出在发酵上清液中多出一条22kD的蛋白带,抗猪生长激素血清免疫印迹法证明这一蛋白带具有免疫活性,表明猪生长激素cDNA已在枯草杆菌及短小茅抱杆菌中表达。     

人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达

经密码子优化的人工合成草鱼生长激素cDNA与表达载体pET-28a( )重组,构建重组表达质粒PET－GH。转化在肠杆菌BL21（DE3）,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,12．5％的SDS－PAGE分析显示,大肠杆菌表达产物中含有与草鱼生长激素分子量一致的新增蛋白带,激光密度扫描,其产量约占菌体总蛋白的40％,金属离子螯合层析柱亲和纯化,获得电泳纯的重组蛋白。Western-blotting和酶联免疫吸附受体法检测证实,重组蛋白与抗草鱼生长激素的多克隆抗体发生特异性结合;复性合的重组蛋白有与天然草鱼生长激素一致的生物学活性。     

草鱼生长激素在毕赤酵母中的高效分泌表达

为大量获得具有生物学活性的草鱼生长激素,对草鱼生长激素cDNA在毕赤酵母中的表达进行了研究。将草鱼生长激素cDNA克隆入毕赤酵母表达载体pGAPZ-α-B,构建表达载体pGAPZ-α-B-GH。在三磷酸甘油醛脱氢酶（GAP）启动子的调控作用下,一个类似于天然生长激素大小、分子量约22kD的蛋白获得表达,其表达量约50mg/L。Western杂交表明：表达的蛋白与兔抗草鱼生长激素的多克隆抗体特异结合,证实该表达蛋白为草鱼生长激素;受体夹心式ELISA检测表明：表达的草鱼生长激素具生物学活性,能与不同种鱼来源的肝膜受体特异结合。     

革胡子鲶GH成熟肽在大肠杆菌中表达条件的优化

将携带革胡子鲶(Clarias lazera)生长激素(GH)成熟肽cDNA序列的重组表达载体pRSET-mGH转化入大肠杆菌Escherichia.coliBL21(DE3)pLysS中进行融合蛋白的表达。表达条件优化试验表明,表达菌株接种SOB培养基,培养2-3h后可用IPTG进行融合蛋白诱导表达;IPTG最佳诱导浓度为1.5 mmol/L,最佳诱导时间为4 h。本试验构建的原核表达体系为下一步革胡子鲶生长激素促生长制剂的研制奠定了基础。     

鲤鱼生长激素基因的改造及其在大肠杆菌中的表达

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）改造了锂鱼生长激素基因,扩增出编码锂鱼生长激素成熟肽的序列,并将此序列克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＫＳ质粒中,序列分析后,亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描,结果表明锂鱼生长激素基因已大肠杆菌中获得表达。锂鱼生长激素成熟肽的分子量为２２０００道尔顿,表达率占细胞总蛋白的１８％以上％。