XBP-1能提高雌激素受体ERα的转录活性

雌激素受体 (ERα)是一种核受体 ,调节与雌激素有关的基因转录 ,在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用。在乳腺癌中 ,人X盒结合蛋白 1(XBP 1)与ERα共表达 ,并在一些乳腺肿瘤中过表达。最近发现XBP 1有两种剪切形式 ,即XBP 1S和XBP 1U ,但它们在ERα信号途径中的作用还不清楚。分别将XBP 1S和XBP 1U编码序列克隆至带有FLAG标签的pcDNA3载体中 ,构建成pcDNA3 FLAG XBP 1S和pcDNA3 FLAG XBP 1U重组质粒。Western印迹分析表明 ,该两种XBP 1形式在哺乳动物细胞中都得到了表达。XBP 1的两种剪切形式的重组质粒分别和ERα表达载体共转染乳腺癌细胞MDA MB 2 31,检测该两种剪切形式对ERα转录活性的影响。结果表明 ,XBP 1S和XBP 1U以激素不依赖的形式提高ERα的转录活性。GST沉淀实验表明 ,XBP 1S和XBP 1U均能与ERα结合。这些结果提示 ,XBP 1S和XBP 1U可能通过影响ERα信号途径在乳腺癌的发生发展中起重要作用。     

XBP-1和Erα存在相互作用

雌激素受体α(Erα)是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标。在乳腺癌中,人X盒结合蛋白1(XBP-1)与Erα共表达,并在一些乳腺肿瘤中过表达。这些结果提示,XBP-1与Erα可能存在相互作用。XBP-1由于剪切方式不同,产生两种形式的XBP-1,即XBP-1S和XBP-1U。体外GST沉淀实验表明,XBP-1S和XBP-1U均能结合Erα,XBP-1S的结合能力大于XBP-1U。体内免疫共沉淀实验也表明,XBP-1S和XBP-1U以激素不依赖的方式与Erα结合。Erα通过其DNA结合结构域与XBP-1S和XBP-1U结合,而XBP-1S和XBP-1U通过其N末端的亮氨酸拉链结构域和C末端的转录激活结构域与Erα相互作用。这些结果提示,XBP-1S和XBP-1U可能通过与Erα的相互作用参与雌激素受体信号途径。     

XBP-1转录激活系统的构建

人X盒结合蛋白1(XBP-1)是CREB／ATF(cAMP应答元件结合蛋白／激活转录因子)转录因子家族中的一员,在很多癌细胞中高水平表达。将XBP-1两种剪切形式的编码序列分别克隆在pRC-lac真核载体上,构建成pRC-lac-XBP-1S和pRC-lac-XBP-1U重组质粒。Westem印迹分析表明,这两种XBP-1形式在哺乳动物细胞中都得到了表达。瞬时转染人胚胎肾细胞293T,用荧光素酶报告基因检测这两种剪切形式的转录活性。结果显示,pRC-lac-XBP-1S和pRC-lac-XBP-1U在293T细胞中均有活性,pRC-lac-XBP-1U的活性约是空载体的65倍,pRC-lac-XBP-IS的活性约是空载体的3倍。成功构建了xBP-1的转录激活系统,为进一步了解XBp-1在各种疾病中的作用奠定了基础。     

新的ER下游靶基因BAP18的鉴定及其在ER阳性乳腺癌中的作用

雌激素受体(ER)/雌二醇(E2)调控其下游靶基因的转录及蛋白表达,在乳腺癌的发生发展过程中发挥至关重要的作用,寻找新的ER下游靶基因可以为乳腺癌的临床治疗提供新的治疗靶点.该研究通过Western blot和qPCR方法确定了一个新的ER下游靶基因BAP18,其表达量可以被E2和ER上调,同时使用拮抗E2和ER的药物...     

TBK1通过增强雌激素受体α的转录活性参与乳腺癌发生的分子机制

目的:研究乳腺癌细胞中TANK结合激酶1(TBK1)的功能及分子机制。方法:利用含有雌激素应答元件(ERE)的萤光素酶报告基因检测TBK1对雌激素受体α(ERα)转录活性的影响;将TBK1参与激活先天免疫途径的关键位点突变,使其丧失激活先天免疫的功能,再用同样方法检测TBK1突变体对ERα转录活性的影响;采用RT-PCR检测TBK1通过磷酸化修饰对ERα下游基因表达水平的影响。结果:TBK1增强ERα的转录活性,从而增强其下游基因的表达。结论:TBK1能以不依赖于其激活先天免疫途径功能的方式增强ERα的转录活性。     

ERα与Sp1相互作用激活LRP16启动子转录活性

根据已报道的LRP1 6启动子序列 (2 6kb) ,采用PCR反应获得 6个启动子 5′删除突变体 ,分别插入pGL3 Basic载体 ,构建 6种 5′缺失报告基因表达载体 (pS1 ～pS6) .分别与ERα真核表达载体共转染MCF 7细胞 .用双荧光素酶报告系统测定荧光素酶活性 ,以明确LRP1 6基因上游启动子区域中的雌激素反应序列 .结果显示 ,pS1 ～pS6均有雌二醇反应性 .进而对pS5的 3′端缺失分析发现LRP1 6基因翻译起始位点上游 - 2 1 4至 - 2 5 1位置的序列具有雌激素应答 ,序列分析发现该片段序列中包含了一个供转录因子Sp1结合的GC富含位点和一个ERα反应元件的半位点 (1 2ERE Sp1 ) ,进一步突变分析显示这两个元件均为雌激素反应性所必需 .以含这两个顺式元件的序列 (- 2 5 3bp至 - 2 2 4bp)作为探针 ,超级迁移凝胶电泳试验结果表明了ERα和Sp1蛋白均可以和探针结合 .研究发现了雌激素上调LRP1 6基因表达的一个增强子元件— 1 2ERE Sp1 ,ERα和Sp1蛋白需要与DNA结合形成复合体 ,通过其相互作用激活转录     

雌激素受体α真核表达载体的构建及其转录活性

目的：构建雌激素受体α（ERα）高效真核表达载体,并检测其转录活性。方法：用常规PCR方法特异扩增带有Flag标签的人ERα全长编码序列,经双酶切后将其克隆到真核表达载体pIRESpuro2中,构建重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERα;用Westernblot鉴定该重组质粒介导的Flag-ERα在人胚肾细胞株293T中的表达情况;用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERα的转录活性。结果：构建了pIRESpuro2-Flag-ERα重组质粒,该质粒介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含雌激素应答元件的报告基因的活性。结论：ERα高效真核表达载体的构建为进一步研究ERα在乳腺癌中的作用奠定了基础。     

乳腺癌雌激素受体β不同亚型表达载体的构建及其转录活性分析

目的：构建人乳腺癌中雌激素受体B（ERβ）3种亚型ERβ1、ERβ2和ERβ5的真核表达载体,测定不同亚型ERβ的转录活性。方法：以乳腺癌细胞MCF7的cDNA为模板,PCR扩增ERβ1、ERβ2和ERβ5万基因,分别克隆到pXJ40-Mye载体,Western印迹检测克隆载体在293T细胞内的表达;将上述载体与含雌激素应答元件（ERE）的萤光素酶（Luc）报告基因载体（ERE—luc）共转293T细胞,测定各亚型ER／3的转录活性。结果：构建了Myc—ERβ1、Myc—ERβ2和Mye—ERβ5表达载体,转录活性结果显示上述表达载体均具有活性,雌激素可升高ERβ5的转录活性,不能升高Eβ2和ER5的转录活性。结论：该研究为进-步探讨不同亚型ERβ在乳腺癌中的功能奠定了基础。     

CHAF1A和ERα在宫颈鳞状细胞癌中的表达和临床意义

该研究探讨染色质组装因子1亚基(CHAF1A)和雌激素受体1(ERα)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织中的表达,探究CHAF1A和ERα的关系及其对CSCC潜在的临床意义,采用了免疫组织化学染色法检测CHAF1A和ERα在CSCC组织及对应的癌旁组织中的表达情况;从CSCC组织及对应癌旁组织中提取总RNA,RT-PCR...     

雌激素受体β表达载体的构建及其转录活性测定

为探索雌激素受体B(ERβ)在乳腺癌形成过程中的分子机制,构建出带HA标签的ERl3真核表达载体。首先将PCR扩增出的带HA标签的DNA片段连接到pcDNA3载体中,得到重组质粒pcDNA3-HA。再将ERβ完整编码区序列克隆到pcDNA3-HA中,得到重组质粒pcDNA3-HA—ERβ。Western印迹结果表明,转染pcDNA3-HA-ERβ重组质粒的293T细胞表达了与预期大小一致的HA—ERβ。用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ的转录活性表明。HA—ERβ在293T细胞中的表达激活了报告基因的表达。ERβ表达载体的成功构建为深入研究其生物学功能打下了坚实的基础。     

乳腺癌乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)与雌激素受体表达的关系

目的探讨乳腺癌乏氧诱导因子-1α(hypoxia induci blefactor-1α,HIF-1α)与雌激素受体(ER)表达的关系。方法利用免疫组织化学方法在42例乳腺癌组织中进行HIF-1α染色,并与ER表达情况及其他临床病理资料进行相关性分析。结果乳腺癌组织中HIF-1α阳性表达率为54.76%,ER表达阳性率为66.67%(28/42)。ER表达率在HIF-1α阳性者中为56.52%,HIF-1α阴性者中为78.95%,P=0.125。而在细胞水平上,ER在HIF-1α阳性者和阴性者中的表达量积分,分别为2.96±1.97、5.11±2.58,t=3.06(P=0.004),Spearman等级分析,r=-0.49(P=0.003)。另外,HIF-1α表达除常见于绝经后患者外,与肿瘤大小、病理类型、孕激素受体、腋窝淋巴结转移、Ki67、C-erbB-2表达均无显著相关。结论乳腺癌组织中HIF-1α表达可能参与了ER表达下调的机制。     

ER、EGFR在分化型甲状腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨雌激素受体(ER)和表皮生长因子受体(EGFR)在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达及其意义.方法:用免疫组化SP法检测45例(DTC)组织中ER和EGFR的表达.结果:ER在DTC组中的阳性率为37.3％,明显高于良性腺瘤和正常组(P＜0.05);EGFR在DTC组中的阳性率为57.7％,明显高于两对照组(P＜0.05).ER在DTC中的表达与性别和年龄有关;EGFR的表达与DTC中的淋巴结转移有关.结论:ER和EGFR的表达可以作为鉴别甲状腺肿瘤良恶性的指标EGFR可作为甲状腺癌患者预后的指标.     

雌激素受体β真核表达载体的构建及其转录活性

目的：构建雌激素受体（ER）β的哺乳动物细胞表达载体,并检测其转录活性。方法：利用PCR扩增带有Flag标签的人类ERβ全长编码序列,将扩增片段克隆到哺乳动物细胞表达载体pIRESpuro2中,得到重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERβ;用Western blot鉴定Flag-ERβ重组蛋白在人胚肾293T细胞中的表达;用含雌激素应答元件（ERE）的报告基因系统检测Flag-ERβ的转录活性。结果：构建了pIRESpuro2-Flag-ERβ重组质粒,其介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含ERE的报告基因的表达。结论：ERβ高效真核表达载体的构建,为进一步研究ERβ在乳腺癌等疾病中的功能奠定了基础。     

ERα辅调节因子在乳腺癌中的双重调控作用

在发达国家,乳腺癌一直是威胁女性健康的恶性肿瘤之一。雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)是一种配体依赖性的转录因子,其介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭和转移等过程中发挥重要作用。ERα主要依赖于辅调节因子共同调控下游靶基因的表达。近年来,有研究证实,一些关键转录辅调节因子在调节ER转录活性的同时,也可以作为泛素E3连接酶,促进ERα的降解。该文详细介绍几种辅调节因子对ERα的双重调节作用,有助于从分子水平阐明不同类型乳腺癌中造成ERα表达量差异的机制,为乳腺癌的靶向治疗和预防提供理论依据。     

雌激素受体信号通路在乳腺癌发生和治疗中的作用

雌激素受体信号通路在调控乳腺细胞增殖和凋亡等生理机能中发挥重要功能,该通路出现调控异常时可导致乳腺癌发生。雌激素受体在乳腺癌发生中的作用机制包括核受体介导的基因组信号通路和膜受体介导的非基因组信号通路以及二者的相互作用。基于雌激素受体信号通路及其关键信号分子的靶向治疗是开展乳腺癌治疗的重要策略与有效途径。对雌激素受体结构以及雌激素受体信号通路在乳腺癌发生和治疗中的作用作一综述。     

KLF4在来曲唑耐药性乳腺癌病理组织中的表达与作用

目的:探讨转录因子KLF4在来曲唑(Letrozole)耐药性乳腺癌(breast cancer, BCa)病理组织和细胞中的表达特点及其在来曲唑耐药性病理发生过程中的作用特点及机制。方法:采用实时定量PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测KLF4在来曲唑耐药性BCa病理组织和细胞中的表达特点;MTT和细胞凋亡ELISA法检测过表达外源性KLF4对BCa细胞来曲唑药物的影响;荧光素酶报告基因活性检测分析KLF4对编码雌激素受体α(ER-α)的ESR1的转录激活作用。结果:KLF4在来曲唑耐药性乳腺癌病理组织及细胞中呈异常高表达(P0.05);采用10-5 M的来曲唑处理MCF7细胞可显著抑制细胞活力,并促进细胞发生凋亡,而在细胞中过表达外源性KLF4后,这一来曲唑毒性作用可被有效逆转(P0.05),细胞活力甚至恢复到来曲唑未处理前状态;荧光素酶报告基因活性检测显示在外源性雌激素E2刺激下,GLucONTM-ESR1报告载体的荧光素酶活性显著升高,这一升高趋势可被10-5 M的来曲唑处理有效抑制;当转染外源性KLF4后,来曲唑对GLucONTM-ESR1报告载体的荧光素酶活性的抑制效应被进一步加强(P0.01)。结论:KLF4可能通过转录调控作用直接抑制ER-α表达及活性,进而参与对来曲唑耐药性病理发生过程的关键调节作用。     

雌激素受体α在小鼠海马中的表达研究

雌激素在生殖系统、认知记忆系统、骨骼和神经的发育及其功能维持等多种生理功能中扮演了重要的作用。雌激素可以通过结合到核雌激素受体Erα、Erβ来完成其生理功能。最近通过ER敲除鼠和选择性的抑制剂研究表明Erα在海马中具有重要作用。Erα在海马中的表达是否具有年龄和性别差异的研究较少,该文研究了Erα在不同年龄、不同性别的小鼠海马中的表达,并进一步比较了Erα在卵巢去除小鼠和对照小鼠中的表达差异。研究结果揭示了Erα在海马中的表达具有年龄和性别差异,暗示了Erα的表达受到外周雌激素水平的调控。这些结果为进一步研究雌激素和Erα在海马组织中基因表达的调控过程以及相关疾病的临床治疗提供参考。     

235例浸润性乳腺癌中P53、ER的表达及其相关性探讨

目的:分析浸润性乳腺癌中P53和雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达及其与患者临床病理特征的关系和二者之间的相关性,探讨其在浸润性乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集我院2008年至2013年6月收治的原发浸润性乳腺癌手术病例235例,采用免疫组化SP法检测乳腺癌组织标本中P53与ER的表达,分析其与患者临床病理特征的关系及二者之间的相关性。结果:本组乳腺癌组织中P53与ER的阳性表达率分别为31.9%及56.6%,均显著高于癌旁正常组织(P0.05)。乳腺癌组织中ER的表达仅与患者的年龄有关,与TNM分期无关;而P53的表达与患者的年龄和TNM分期均无关,但P53与ER的表达呈显著负相关(P0.05,r=-0.174)。结论:P53与ER在浸润性乳腺癌中均呈高表达,且二者呈显著负相关。