生长激素受体基因敲除小鼠模型

由脑垂体合成并分泌的生长激素(GH)不仅控制机体生长发育,还在许多代谢疾病中起关键调控作用。GH的生物学功能通过与其表面受体(GHR)结合而启动,基于分子生物学技术构建各种GHR敲除小鼠模型成为揭示GH调控机制的基础。利用Cre-LoxP重组酶系统,迄今已在小鼠全身或组织特异性(如肝,骨骼肌,脂肪,巨噬细胞和胰岛β细胞等)敲除ghr基因,并从中探索GH/GHR信号转导及其与其他信号通路的相互作用。本文综述并讨论了这些ghr基因敲除小鼠模型的表型特征和应用,从不同方面介绍了GH/GHR相关信号通路研究现状。     

基因敲除小鼠技术的研究进展

基因敲除小鼠技术的建立和发展使得人们为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的靶点提供了强有力的支持。基因打靶和基因捕获是两种通过胚胎干细胞(Embryonicstemcell,ESC)构建基因敲除小鼠的技术。基因打靶通过同源重组替换内源基因从而敲除目的基因,而基因捕获则有启动子捕获和polyA捕获两种方法对目的基因进行敲除。近年来,有许多新的基因敲除技术不断被开发出来,包括Cre/loxP系统、CRISP/Cas9系统以及最新的ZFN技术和TAILEN技术,都有望取代传统基因敲除手段。文中简要阐述了如今新出现的几种基因敲除小鼠技术。     

雄激素对雄激素受体调节作用的研究进展

雄激素受体广泛存在于机体各种组织中,通过与雄激素相结合而发挥生物学效应.雄激素受体的表达受诸多因素的作用,其中雄激素对其表达及功能方面的影响发挥重要作用.如雄激素可以调节受体的mRNA表达、代谢和构相等,就这方面的进展情况作一综述.     

运动对大鼠骨骼肌雄激素分布水平及雄激素受体结合容量的影响

本文测定了不同运动条件下的大鼠骨骼肌中的雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＡＲ）结合容量及雄激素的水平。一次力竭运动可使大鼠股四头肌组织的雄激素结合容量水平上升,但降低了其组织中的雄激素水平。在长期力竭性运动后,股四头肌组织雄激素受体结合容量及雄激素水平均没有变化,而长期的适宜运动则可提高股四头肌的雄激素结合容量的水平,但对其雄激素的水平仍无影响。通过机体注射ＨＣＧ（人促绒毛膜性腺激素）,可提高骨骼肌组织的雄激素水平,但骨骼肌雄激素受体结合容量水平没有变化。连续注射ＨＣＧ４天,其骨骼肌组织雄激素水平显著高于连续注射ＨＣＧ８天的水平。根据上述结果,我们认为,在考虑骨骼肌同化过程时,不但要注意其雄激素的水平,还应注意其雄激素受体的水平。运动对骨骼肌组织的雄激素受体结合容量及骨骼肌雄激素分布的影响是双向的     

雄激素受体的研究进展

雄激素受体是一种配体依赖性的反式转录调节蛋白,广泛分布于机体各组织,参与雄激素的各种生理调节功能,其与疾病的关系已越来越成为人们研究的热点。本文就雄激素受体的结构、功能、组织分布、转录调控及其与疾病的关系等研究的最新进展作简要综述。     

运动对大鼠骨骼肌雄激素分布水平及雄激素受体结合容量…

本文测定了不同运动条件下的大鼠骨骼肌中的雄激素受体结合容量及雄激素的水平。一次力竭运动可使大鼠股四头肌组织的雄激素结合容量水平上升,但降低了其组织中的雄激素水平。在长期力竭性运动后,股四头肌组织雄激素受体结合容量及雄激素水平的均没有变化,而长期的适宜运动则可提高股四头肌的雄激素结合容量的水平,但对其雄激素的水平仍无影响。     

转基因小鼠和基因敲除小鼠

能够把基因功能作为生物体表现来观察的改变了基因的小鼠。即使在基因组信息泛滥的今天,这也是最重要的工具之一,基本原理的研究虽然很早,但目前仍在进行改良法的开发工作。本文由基因控制株式会社的三谷匡董事予以阐述。[编者按]     

硬骨鱼类雄激素受体研究进展

在脊椎动物中,雄激素的生理作用主要是通过核雄激素受体(nuclear androgen receptor,nAR)介导的,这种转录因子属于核受体超家族成员.从哺乳动物到硬骨鱼类,均存在nAR.与高等脊椎动物不同的是,由于基因倍增等原因,部分硬骨鱼类nAR存在2种亚型.它们在鱼类胚胎发育和性腺发育过程中表现为不同的组织分...     

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。     

Synaptotagmin 1基因敲除对小鼠行为的影响*

目的: 研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^+/-)对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法: 选取8周龄雄性Syt1^+/-小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区等6个脑区中Syt1的表达;选用8周龄雄性Syt1^+/-小鼠9只,以及WT小鼠10只为对照,通过旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测比较成年Syt1^+/-小鼠和WT小鼠的焦虑样行为;另选用8周龄雄性Syt1^+/-小鼠及WT小鼠各5只,检测小鼠前额叶皮层、海马和杏仁核的谷氨酸含量。结果: 与WT小鼠相比,Syt1^+/-小鼠在前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区Syt1阳性细胞数目显著减少(P＜0.01);Syt1^+/-小鼠在旷场中总移动距离显著减少(P＜0.01),并更偏爱在外周区域活动(P＜0.01),对中心区域的探索欲望显著下降(P＜0.01);Syt1^+/-小鼠更偏好待在封闭安全环境中(P＜0.01),开臂探索次数(P＜0.05)和在其中运动的时间显著减少(P＜0.01);Syt1^+/-小鼠在强迫游泳实验中不动时间明显增加(P＜0.01);同时,Syt1^+/-小鼠杏仁核中谷氨酸的含量显著增加(P＜0.01)。结论: Syt1基因敲除可以引起小鼠显著的焦虑样行为,推测与杏仁核中谷氨酸含量增加有关。     

大蒜素对小鼠脾细胞雌激素和雄激素受体影响的实验研究

本研究旨在探讨大蒜素对小鼠脾细胞雌激素和雄激素受体的影响。将健康ICR清洁小鼠,按性别随机分成三组实验组和三组对照组。实验组分别连续灌服大蒜素14、21和28 d,对照组同期分别灌服等量生理盐水。采用RT-PCR法检测雌性各组小鼠脾细胞雌激素受体(ERα和ERβ)的mRNA表达水平和雄性各组小鼠脾细胞雄激素受体(AR)的mRNA水平。实验结果显示,雌性小鼠连续灌服大蒜素第14和21 d时实验组ERαmRNA表达水平明显高于对照组(P0.05),第14 d时ERβmRNA表达水平明显高于对照组(P0.05)。雄性小鼠连续灌服大蒜素第14、21和28 d时实验组AR mRNA表达水平均明显高于对照组(P0.05)。综上提示大蒜素可增强小鼠脾细胞雌激素受体(ERα和ERβ)和雄激素受体(AR)mRNA的表达水平。     

大鼠骨骼肌组织雄激素受体结合容量测定方法

目的 :以3H testosterone(T)为配基 ,测定大鼠骨骼肌胞浆中的雄激素受体结合容量。方法 :测定温度为 4℃ ,同位素配基的饱和浓度为 5 0 pmol/ml;肌组织以 4倍 (重量 /体积 )缓冲液稀释 ,0～ 4℃温度下 10 80 0 0×g离心 1h ;孵育 18～ 2 4h。结果 :骨骼肌中雄激素受体的Kd =2 ,8× 10 9mol/ml。单点法与多点法之间无显著区别。     

GLAST基因敲除对小鼠表型及听力功能的影响

目的:观察谷氨酸天冬氨酸转运蛋白(GLAST)缺失对小鼠正常听觉功能的影响。方法:我们选用C57BL/6J背景的GLAST^+/-小鼠进行杂交,用琼脂糖凝胶电泳进行后代小鼠基因型鉴定。我们选用9～10周龄雄性小鼠,用免疫荧光染色技术检测耳蜗中GLAST蛋白表达,对敲除结果进行验证(n=3)。比较雌雄小鼠出生后7d至30 d体重变化及30 d的体长(n=8)。听性脑干反应(ABR)测试9-10周龄雌性和雄性小鼠听觉阈值及其Ⅰ波振幅的变化(n=5)。结果:雄性GLAST^-/-小鼠与雄性GLAST^+/+和GLAST^+/-小鼠相比,体重及体长均显著降低(P<0.01),其中雄性GLAST^-/-小鼠与GLAST^+/+相比,在P7至P30统计时间里,均表现出明显差异;与雄性GLAST^+/-小鼠相比,P15后均表现出体重显著性降低。而雌性GLAST^-/-小鼠与雌性GLAST^+/+和GLAST^...     

Arrb1基因敲除对小鼠T淋巴细胞发育的影响

该文旨在研究Arrb1(β-arrestin1)基因敲除对小鼠T细胞发育的影响,进一步探讨急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)发病机制。该文使用q-PCR、Western blot分别检测Arrb1基因敲除的C57BL/6J小鼠中Arrb1的m RNA和蛋白质水平;流式细胞术检测Arrb1基因敲除小鼠及野生型小鼠的胸腺、外周血、淋巴结的T细胞比例。结果显示,与野生型相比,Arrb1基因敲除小鼠的胸腺CD4CD8双阴(double negative,DN)细胞比例明显增加,DN1期细胞比例增加最为显著(P0.05),而DN4期细胞比例减少(P0.05);CD4CD8双阳(double positive,DP)细胞比例显著减少(P0.05)。外周血CD4阳性T细胞比例减少(P0.05),淋巴结CD4阳性T细胞比例以及CD4/CD8阳性T细胞比值减少(P0.05)。研究结果证明,Arrb1基因敲除显著影响小鼠T细胞发育,使T细胞发育阻滞在DN期,从而可能成为影响T-ALL发病的重要因素。     

基因敲除技术研究进展

基因中断技术是研究基因功能和实现基因的精确缺失重要手段.原核中断系统最近发展较快的是利用λ噬菌体的Red系统在细茵中进行的基因敲除技术,但多在大肠杆菌中进行;真核中断系统属PCK介导的酵母基因中断技术和RNAi干涉技术发展最快.这几种中断技术都大大简化了实验操作,缩短了实验时间,在研究生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景.     

雄激素受体分子病理学研究进展

雄激素受体分子病理学研究进展陈光椿卢建（第二军医大学病理生理学教研室,上海２００４３３）关键词雄激素受体（ＡＲ）雄激素主要是指睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞合成、分泌的睾酮（Ｔ）及其在靶细胞内的活性代谢产物——双氢睾酮（ＤＨＴ）。后者的作用是前者的３倍。雄激素...     

雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立

目的建立雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型,为进一步研究雌激素受体β基因在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用提供平台。方法用外科手术方法对16只β基因敲除小鼠进行自体子宫移植,术后14d、21d取病灶组织进行光镜观察分析。结果建模成功率达95．8％,可形成明显囊肿,内含囊液,囊肿内壁有子宫内膜上皮细胞生长。结论应用本方法可建立稳定的子宫内膜异位症转基因小鼠模型,便于研究雌激素受体β亚型及其相关基因、蛋白在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用机制。     

雄激素受体对真核基因转录的调控

雄激素受体是典型的核受体,它对真核基因转录的调控作用受到日益广泛的重视。本文主要阐述了雄激素受体的分子结构,重点总结了雄激素受体介导真核基因转录起始的过程,概述了激素受体辅助使用因子及受体的核转运等受体功能的调控,这些是进一步研究真核基因表达调控机制及治疗雄激素相关疾病的理论基础。     

雄激素和雄激素受体对骨代谢的调控及机制研究进展

骨代谢由成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收构成。雄激素能调控骨代谢,即促进骨形成、抑制骨吸收,在骨骼生长、骨峰值的获得和骨量维持中起重要作用;且该作用主要通过雄激素受体(androgen receptor,AR)介导。AR调控骨代谢的作用,一方面是通过直接调控骨代谢相关的AR靶基因(如与成骨相关的I型胶原蛋白α1、骨钙素、组织非特异性碱性磷酸酶、小整合素结合配体N-端连接糖蛋白和与破骨相关的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、组织蛋白酶K的表达;另一方面是通过间接调控骨代谢的多个信号通路[如Wnt/β-catenin、骨形态发生蛋白(BMP)/Smads-Runt相关转录因子2(Runx2)、RANKL/骨保护蛋白(OPG)、PI3K/Akt和MAPK信号通路]实现的。该文主要就雄激素/AR在骨代谢调控中的作用及机制作一综述,对丰富AR调控骨代谢的理论认识和骨代谢性疾病的药物研发具有重要意义。     

基因敲除小鼠在疾病研究中的应用

人类疾病动物模型在揭示人类疾病的发生机制或建立治疗方法中具有极重要的作用。然而,许多疾病难以用人工诱发的方法制造动物模型,还有许多疾病在实验动物身上不发生,而难以通过自发或人工定向培育的方法获得动物模型。基因敲除技术的出现,为人类精确地研究基因与疾病的直接关系提供了可能,而且可以在个体发生的每个阶段中进行遗传功能的分析。综述了基因敲除小鼠模型在几种疾病研究中的研究与应用及其发展前景。