脑膜炎双球菌蛋白菌苗和多糖菌苗中脂多糖(内毒素)的测定

<正>脂多糖(LPS)、荚膜多糖(PS)、外膜蛋白(OMP)和伞毛(菌毛)是革兰氏阴性菌细胞表面抗原。由于LPS有各种毒性反应故称之为内毒素。除LPS外,其它表面抗原可用来制造菌苗。脑膜炎双球菌荚膜多糖菌苗和外膜多糖菌苗已用于预防脑膜炎双球菌感染。当非肠道使用的脑膜炎荚膜多糖(PS)菌苗、沙门氏伤寒ViPs菌苗和脑膜炎蛋白(OMP)菌苗含有LPS时,会引起发烧和其它反应。而对于OMP菌苗要想不使蛋白抗原变性而彻底除去LPS是不可能的。所以,菌苗中的LPS应设法降低其含量达不至于引起发烧或其它异常反应的水平。在这些制品的质量检定中,—个特定剂量的家兔热原试验应为阴性。 Gotschlich等人报道用10ng/kg或更高剂量的脑膜炎菌LPS静脉注射家兔会引起明显的体温上     

酵母浸出粉在奈瑟脑膜炎双球菌培养中的比较观察

目的探索A群,C群奈瑟脑膜炎双球菌(简称流脑)多糖疫苗生产中奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。方法在培养基配制中用增减酵母浸出粉的方法制备相应的培养基,8h收菌,通过菌体的收获量并参考多糖量来确定较好的培养基配比。结果不同培养基用于A群、C群奈瑟脑膜炎菌培养8h后均有收获,其中2号培养基(酵母浸出粉)培养的菌体的浓度明显高于1号和3号培养基,它们之间有显著性差异(P<0.05)此种培养基能提高奈瑟脑膜炎双球菌的产量。结论添加酵母浸出粉的培养基可作为A群、C群奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。     

C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性

用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化C群脑膜炎球菌多糖(GCMP),以己二酰肼(ADH)作为连接子,与重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白64 KD(rP64K)在碳二亚胺的(EDAC)作用下结合,制备GCMP-P64K结合物。纯化后免疫NIH小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GCMPIgG抗体水平,并GCMP-TT结合物比较载体诱导的免疫抑制。所制备多糖-蛋白结合物(GCMP-P64K)保持了GCMP抗原特异活性,结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GCMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。     

载体蛋白对多糖蛋白结合疫苗中多糖免疫应答的影响研究

多糖蛋白结合疫苗的研发及成功上市是预防细菌性传染病(bacterial infectious diseases)的突破,目前已批准上市的多糖蛋白结合疫苗主要有b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗和脑膜炎球菌结合疫苗.载体蛋白的选择是多糖蛋白结合疫苗的免疫原性增强的关键因素,目前获批上市的疫苗主要使用的载体蛋白有破...     

马来眼子菜多糖的提取纯化及组成性质

本文通过正交实验研究马来眼子菜多糖的提取工艺,并初步研究其组成性质.采用热水提取马来眼子菜多糖(Potamogeton malaianus polysaecharide PMPS),经乙醇沉淀,活性碳脱色,Sevage法去蛋白,DEAE-Cellulose离子交换和Sephadex G-25柱层析纯化,电泳鉴定纯度和纸层析分析其组成.确定最佳提取条件为加10倍体积的水,80℃提取3 h,所得二个多糖电泳均为单一组分,层析证明马来眼子菜多糖I(PMPS I)由D-果糖和D-木糖组成,马来眼子菜多糖Ⅱ(PMPSⅡ)则含有D-葡萄糖、D-果糖和另一未知单糖成分.     

一种发展B群脑膜炎球菌疫苗的分子和免疫学途径

<正> 脑膜炎奈瑟氏球菌是引起人类脑膜炎的革兰氏阴性双球菌。以血清和脑积液中分离到的毒力菌株含有荚膜。荚膜有助于微生物侵袭宿主的防御系统。荚膜是由高分子量多糖组成,它是脑膜炎球菌血清学分群的依据,在一种血清群中又含有许多抗原性不同的外胰蛋白和脂多糖,它们是进一步血清学分型的根据。     

中华绒螯蟹精荚分级分离及其蛋白组分分析

对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精荚进行分级分离,获得的精液、精荚基质和精子等不同组分,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,对其可溶性蛋白成分进行比较分析。结果显示,中华绒螯蟹精荚的各个组分均含有其特定的蛋白谱带。经糖蛋白特异染色发现,精液中含3种糖蛋白,精荚基质中含2种糖蛋白。     

火木层孔菌发酵菌粉及其组分对小鼠移植性肝癌H22的体内生长作用

采用肝癌H22荷瘤小鼠的肿瘤模型,对火木层孔菌(桑黄)Phellinus igniarius发酵菌粉及其各提取物组分的体内抗肿瘤活性进行评价。结果表明,火木层孔菌发酵菌粉及其各提取物组分对荷瘤小鼠肝癌H22都具有一定的抗肿瘤作用并能延长荷瘤小鼠生存期,其中,火木层孔菌发酵菌粉(1,000mg/kg/d)及其组分I(I多糖组分)(360mg/kg/d)具有较为显著的抗肿瘤作用,抑瘤率分别为33.5%和40.3%。组织病理学研究结果表明在菌粉及其多糖组分作用后,肿瘤细胞坏死细胞明显增多,免疫组化检测表明火木层孔菌发酵菌粉及其多糖组分能明显的降低瘤组织中Bcl-2基因蛋白的表达,提高小鼠瘤组织中的Bax基因蛋白的表达。火木层孔菌发酵菌粉及其多糖组分具有较好的体内抗肿瘤活性。     

利用热稳定蛋白特异条带鉴别籼粳稻的方法研究

以85份栽培稻为材料,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹技术分析籼稻和粳稻热稳定蛋白的表达差异.探讨利用特异蛋白来建立籼粳稻的鉴别方法.结果表明,在籼粳稻品种之间存在热稳定蛋白的差异表达,尤其在分子量约42～47kD范围.其中45.2kD条带(Band I)和46.5 kD(Band Ⅱ)条带为典型粳稻特异蛋白(Os03g0168100)的标志带,42.0kD条带(Band Ⅲ)为典型籼稻特异蛋白(OsI_10172)的标志带.以这3条带作为鏊别方法,并与程氏指数法进行比较,典型籼稻和粳稻的一致度分别为80.0%和86.4%,表明热稳定蛋白标志带法在一定程度上可用于鉴别典型的籼稻和粳稻.     

肺炎链球菌相关毒力因子及其作用的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)是导致黏膜疾病(如中耳炎、肺炎)和系统性疾病(包括败血症和脑膜炎)等严重疾病的主要病原体之一。肺炎链球菌毒力因子分为荚膜多糖、S.pn相关蛋白、细胞壁及细胞壁多糖三大类,其中荚膜多糖为最主要的毒力因子,也是疫苗中最有效的成分。毒力因子在S.pn入侵机体及引发疾病的过程中起着重要的作用。因此,毒力因子及作用的研究,不仅对预防和治疗肺炎链球菌的感染有着重要的意义,并为研发安全、有效的多糖疫苗提供一定的技术支持。现就肺炎链球菌毒力因子及其作用作一综述。     

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

目的利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法(HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸(TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/m L范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系,r均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/m L(信噪比3∶1),定量限为0.10μg/m L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。     

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究

采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)作为连接剂,1乙基13(3二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂制备A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物,经皮下免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗载体蛋白的IgG抗体水平。用补体介导的体外杀菌试验检测血清中GAMP抗体的杀菌活性。结果显示,实验中制备的多糖衍生物和多糖蛋白质结合物都具有GAMP抗原特异活性。结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,产生再次应答。结合物免疫小鼠所诱生的血清GAMP抗体较之多糖组具有更强的体外杀菌活性。表明此方法制备的结合物可获得优于多糖的、稳定的特异免疫原性。     

抗脑膜炎奈瑟氏球菌脂多糖单克隆抗体

<正>在细菌学领域中,单克隆抗体越来越成为菌株血清定型和抗原鉴定的有效工具。例如单克隆抗体已经用来分析霍乱弧菌及淋病奈瑟氏球菌的脂多糖(LPS)结构,绘制淋菌表面外膜蛋白(Ⅲ)的结构图,确定淋球菌和流感嗜血杆菌不同菌株细胞表面蛋白的存在,以及将淋球菌蛋白分成血清型等等。 已经表明,抗LPS和外膜蛋白抗原的抗体对脑膜炎双球菌的血清定型在流行病学上是有用的。Griffiss发现经过吸收的抗脑膜炎双球菌的LPS血清对血清群A的菌株定型是有效的。本研究是要获得抗-LPS的单     

脑脊液乳酸和血清降钙素原及C反应蛋白 对小儿细菌性脑膜炎的诊断价值

目的探讨脑脊液乳酸、血清降钙素原及C反应蛋白对小儿细菌性脑膜炎的诊断价值。方法选取我院2016年4月至2017年6月收治的50例细菌性脑膜炎患儿以及50例病毒性脑膜炎患儿进行作为研究对象,比较2类患儿脑脊液乳酸(LA)、血清降钙素原(PCT)及C反应蛋白(CRP)的水平,并分析其诊断价值。结果细菌性脑膜炎组患儿脑脊液LA、血清PCT及CRP水平显著高于病毒性脑膜炎患儿(均P0.05)。血清PCT诊断的灵敏度和特异度最高(96.4%、90.9%,P0.05)。3项指标联合检测的灵敏度(100.0%)和特异度(95.5%)明显高于任一单项指标(均P0.05)。经过Pearson相关性分析,脑脊液LA、血清PCT及CRP与小儿细菌性脑膜炎均呈显著正相关关系(均P0.05)。结论脑脊液乳酸、血清PCT及CRP对小儿细菌性脑膜炎的诊断和治疗效果监测有重要应用价值。     

新的四价脑膜炎球菌糖结合疫苗

<正>最近有研究报告说,脑膜炎球菌性脑膜炎和败血病因其死亡率和长期伤害人的后遗症成为公共卫生持续关注的问题,所有年龄段的人群都可能感染,危险人群中疾病负担更高。免疫接种是预防侵袭性脑膜炎球菌病的最合理的手段。新的脑膜炎球菌(Men)血清群A、C、W-135和Y 4价多糖-蛋白结合疫苗(MenACWY     

乌龙岭’龙眼胚胎发育时期特异性蛋白质的变化

应用IEF-SDS-PAGE技术分析龙眼胚胎分化发育过程中蛋白质组分的变化。结果表明,在各发育阶段大多数蛋白质组分的电泳图谱基本一致,但也有变化。其中花后38d存在TE1(27．1kD、p,7．3),TE2(17．5kD、pI8．2)2个特异蛋白,45d存在TE3(11．4kD、pI7．6),TE4(13．2kD、pI9．9)2个特异蛋白,52d存在TE5(22．6kD、pI7．2),TE6(18．6kD、pI8．3),TE,(23．5kD、pI3．6)3个特异蛋白。31d胚胎电泳图谱中的蛋白质点数相对较多,表明此时蛋白质旺盛合成与积累,这与蛋白含量的变化基本一致。龙眼胚胎发育过程中特异蛋白的出现或消失．对胚胎的分化发育具有重要作用。     

顶空气相色谱法测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环

目的建立并验证四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环的检测方法。方法采用顶空气相色谱法,样品中加入碳酸钠固体,产生"盐析"效应,以增加二氧六环在顶空瓶中的浓度。通过HP-5毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm,5%Phenyl Methyl-Siloxane),氢火焰检测器测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环。结果二氧六环平均回收率及变异系数分别为86.16%～106.54%和2.4%～8.7%,在0.5004～40.032mg/L范围内相关系数值r=0.999 41,线性关系好,最低检测限为0.5 mg/L,最低定量限为2.5 mg/L。结论该方法溶剂用量少、灵敏度高、出峰特异、专属性强、色谱峰型好、分离度高、出峰时间短、影响因素少,是一种易于实现仪器自动化的分析方法。     

云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖,初步纯化后,用DEAE-Sepharose CL-6B进行分离,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP-I和CVP-Ⅱ,对这两个组分分别用Sepharose CL-6B凝胶柱层析进行纯度鉴定,均出现单一峰,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收,从而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。     

超声波及脱蛋白处理对猴头菌子实体多糖提取效果的影响

本研究以猴头菌子实体为供试材料,在采用水提醇沉法进行多糖提取的过程中,系统研究了超声波和脱蛋白处理两个关键工艺环节对多糖提取效果的影响。研究结果表明：采用超声波辅助处理可提高猴头菌多糖提取率,降低多糖的纯度,使部分由蒸馏水洗脱获得的HEFP-α组分与全部0.1mol/L NaCl洗脱获得的HEFP-β组分经Sephacryl-S400洗脱后的曲线的小峰面积增加,也使主峰处的吸光值出现偏移。3种脱蛋白方法中,复合法对蛋白的除去效率最高,但多糖的保留率最低;亚铁氰化钾-乙酸锌法操作简便且蛋白除去率与多糖保留率均较高,但会使HEFP-β-2组分的含量和回收率降低;Sevage法蛋白脱除效率最低,多糖组分的保留率相对较高,且柱洗脱后发现经Sephacryl-S400凝胶柱分离后获得的主峰整体峰值较高,该方法较为适合多糖活性组分未知时的蛋白脱除。这一研究结果将会为该类大型真菌子实体的大分子生物活性物质的提取以及相关产品的开发提供重要的参考依据。     

疫苗

940236在大肠杆菌中表达的脑膜炎双球菌运铁蛋白结合的蛋白一1是表面曝露的运铁蛋白并和人运铁蛋白结合〔英〕/Palmor,H.M.…/FEMS Mierobiol.Let七一1993,110(2)一139~146【译自DBA,1993,12(16),93一09208〕 在噬菌体补Zapll中建立了脑膜炎双球菌SD(B15pl.16)DNA的基因库,根据与运铁结合蛋白一1(TBP一1)的前21个N一末端氨基酸密码子为基础的63bp DNA探针杂交证明,含编码运铁结合蛋自DNA的克隆为一种疫苗候选物。含最天的插入片段 (2 2.3kb)的质粒pxl.6的定序证明,所有的基因间DNA(贯穿运铁结合蛋白一2基因3产端的tbp一1上游)…