Dig标记探针原位杂交检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核TGF-β1mRNA

目的通过建立MSG-肝再生-大鼠模型,检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核(ARN)TGF-β1 mRNA的表达与神经内分泌免疫网络的关系.方法用肝大部分切除MSG-大鼠的方法建立MSG-肝再生-大鼠模型,原位杂交技术检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核(ARN)TGF-β1 mRNA的表达.结果发现MSG-肝再生-大鼠ARN TGF-β1mRNA的表达显著上调,切除11天达20.9±1.6,与生理盐水组(11.1±1.2)和MSG-大鼠假手术组(15.2±1.1)比较,差异显著(P＜0.01).结论 MSG-肝再生-大鼠神经-内分泌-免疫网络功能紊乱与其ARN TGF-β1 mRNA表达失调密切相关.     

脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ 1的表达和血清TGFβ 1水平的影响

目的：研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ1的表达和血清TGFβ1水平的影响,探讨脾切除在肝纤维化中的意义。方法：用CCL4建立50例肝纤维化大鼠模型。于建模第3周,6周,及8周分别取大鼠肝脏和脾脏标本。用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达,HE和姬姆萨染色检测肝纤维化。应用双抗体夹心ELISA方法测定15例模型大鼠行脾脏切除前后的血清TGFβ1水平,以及15例对照组大鼠的血清TGFβ1水平,并于术后4周取两组大鼠的肝脏标本,用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达。应用CMIAS8彩色图像系统对阳性目标进行分析和处理。结果：随着肝纤维化程度的进展,大鼠肝脏和脾脏TGFβ1的表达也随之增加（P〈0.01）。脾切除组大鼠其血清TGF-β1的水平显著低于对照组大鼠（P〈0.05）,且脾切除组大鼠肝脏TGFβ1的表达低于对照组大鼠（P〈0.05）。结论：脾切除术在一定程度上可延缓肝纤维化的发展。     

人皮肤成纤维细胞在紫外线B照射后的TGF—β和HSP70表达

目的和方法：采用人体皮肤成纤维细胞,观察了紫外线照射后细胞TGF－β表达与HSP70表达水平的相关性。结果：①经不同剂量的紫外线B照射后,TGF－βmRNA表达与HSP70表达水平呈正相关（r=0.906);②应用抗TGF－βⅡ型受体抗体后,在紫外线B照射后细胞培养上清液中的TGF－β含量与细胞HSP70表达水平呈负相关（r=-0.995)。结论：在紫外线B照射诱导人皮肤成纤维细胞表达HSP70的反应过程另TGF－β参与其信号转导。     

大鼠肺纤维化血小板源性生长因子、血小板源性生长因子—受体、转化生长因子—β、转化生长因子—β受体的表达

采用免疫组织化学方法观察实验性大鼠肺纤维化肺组织内转化生长因子（TGF－β）及其受体（TGF－βR）和血小板源性生长因子（PDGF）及其受体（PDGF－R）表达的变化。发现：（1）实验早期（1－3天）,TGF－β主要由单核巨噬细胞为主的炎症细胞所产生;7天以后直至实验结束（28天）,TGF－β阳性细胞主要为增生的间质细胞,TGF－βR的变化与之同步。（2）实验1－7天,病灶内单核巨噬细胞细胞PDGF染色呈强阳性反应,少量间质细胞呈阳性反应;14天以后,病灶内PDGF阳性的单核巨噬细胞减少,阳性间质细胞亦减少。PDGF－R的变化与PDGF相似。结果提示PDGF的主要来源是巨噬细胞,在肺纤维化的早、中期发挥重要作用,而TGF－β主要由间质细胞自身产生,在肺纤维化的中、后期发挥重要作用,促细胞外基质合成,使肺纤维化进行性进展。     

转化生长因子-β蛋白及mRNA基因在人类系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的：探讨转化生长因子－β（TGF－β）蛋白及mRNA基因在系膜增生性肾小球肾炎中的表达及其在发病中的作用。方法：采用常规病理,免疫组织化学及原位杂交方法对人系膜增生性肾小球肾炎组织进行染色,并经医学图像分析系统进行分析,结果：在正常对照组,TGF－β蛋白及TGF－β1mRNA小肾小管上皮细胞呈极弱表达,肾小球内TGF－β蛋白及mRNA未见阳性表达,在系膜增生肾小球肾炎组织中,TGF－β蛋白在肾近曲小管上皮细胞胞浆内呈强阳性表达,肾小球球囊壁及系膜区呈阳性,肾小球与肾小管阳性表达与正常对照组相比均具有显性差异（P＜0．01）,TGF－β1mRNA阳性表达位于肾近曲小管上皮细胞胞浆内和肾小球系膜区,肾小球和肾小管上皮细胞TGF－β1mRNA阳性表达与正常对照组相比差异也有显性（P＜0．01）。结论：系膜增生性肾小球炎时TGF－β蛋白及TGF－β1mRNARNA阳性表达与正常对照组相比差异也有显性（P＜0．01）。结论：系膜增生性肾小球肾炎时TGF－β蛋白及TGF－β1mRNA在肾小球与肾小管表达均显增高,进一步显示TGF－β在肾小球系膜细胞增生及肾小管间质纤维化中所起的重要作用。     

脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ1 的表达和血清TGFβ1 水平的影响

目的:研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ1的表达和血清TGFβ1 水平的影响,探讨脾切除在肝纤维化中的意义.方法:用CCL,建立50例肝纤维化大鼠模型.于建模第3周,6周,及8周分别取大鼠肝脏和脾脏标本.用免疫组化SP 方法测定其TGFβ1 的表达,HE和姬姆萨染色检测肝纤维化.应用双抗体夹心ELISA 方法测定15 例模型大鼠行脾脏切除前后的血清TGFβ1 水平,以及15 例对照组大鼠的血清TGFβ1 水平,并于术后4周取两组大鼠的肝脏标本,用免疫组化sP 方法测定其TGFβ1的表达.应用CMIAS8 彩色图像系统对阳性目标进行分析和处理.结果:随着肝纤维化程度的进展,大鼠肝脏和脾脏TGFβ1的表达也随之增加(P<0.01).脾切除组大鼠其血清 TGF-β1 的水平显著低于对照组大鼠(P<0.05),且脾切除组大鼠肝脏TGFβ1 的表达低于对照组大鼠(P<0.05).结论:脾切除术在一定程度上可延缓肝纤维化的发展.     

新生大鼠下丘脑培养细胞LH—RH免疫组化观察

用新生大鼠下丘脑细胞进行全外细胞培养,观察下丘脑神经元的生长分化,并对细胞培养,观察了下丘脑神经元的生长分化,并对培养的下丘脑细胞作了ＬＨ－ＲＨ和ＮＳＥ免疫组化观察。结果显示：新生大鼠下丘脑神经细胞可在体外生长发育,对ＬＨ－ＲＨ和ＮＳＥ均呈阳性免疫反应。ＬＨ－ＲＨ免疫组化阳性细胞的图像分析表明,细胞平均光密度和积分光密度在培养早期较低。至第７天时明显增加,以后随培养时间延长又逐渐下降。提示体外培养     

降低TGFβ1表达后对大鼠糖尿病症状改变的研究

目的：探讨降低TGFβ1的表达后,对大鼠糖尿病模型病症的改变情况,为研究TGFβ1与糖尿病发病之间提供实验数据。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素,建立糖尿病大鼠模型,慢病毒包装TGFβ1-shRNA干扰载体,优选后皮下注射大鼠模型,以慢病毒空载shRNA注射大鼠模型作对照;检测1-5周左右两组大鼠体重和血糖变化;摘取大鼠胰腺,HE染色光学镜下观察组织形态学改变情况。结果：用RNAi沉默TGFβ1表达后,与对照组相比,干扰组大鼠体重下降较缓,血糖持续下降;HE染色可见干扰组大鼠胰岛形态较空载组稍好,分泌细胞数量稍多。结论：TGFβ1对糖尿病的发病和进展起促进作用,当抑制TGFβ1表达后,可延缓糖尿病的进展。     

降低TGFβ1 表达后对大鼠糖尿病症状改变的研究

目的：探讨降低TGFβ1 的表达后,对大鼠糖尿病模型病症的改变情况,为研究TGFβ1 与糖尿病发病之间提供实验数据。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素,建立糖尿病大鼠模型,慢病毒包装TGFβ1-shRNA干扰载体,优选后皮下注射大鼠模型,以慢病毒空载shRNA注射大鼠模型作对照;检测1-5 周左右两组大鼠体重和血糖变化;摘取大鼠胰腺,HE 染色光学镜下观察组织形态学改变情况。结果：用RNAi沉默TGFβ1 表达后,与对照组相比,干扰组大鼠体重下降较缓,血糖持续下降;HE 染色可见干扰组大鼠 胰岛形态较空载组稍好,分泌细胞数量稍多。结论：TGFβ1 对糖尿病的发病和进展起促进作用,当抑制TGF茁1 表达后,可延缓糖 尿病的进展。     

转化生长因子-β细胞周期抑制机制

转化生长因子－β（TGF－β）属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖,分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF－β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF－β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF－β可以通过不同的途径使细胞停留在G1期,从而抑制细胞的生长。TGF－β信号转导通路的异常与肿瘤的发生密切相关。本文对近年TGF－β细胞周期抑制机制的研究作一综述。     

褪黑素减弱大鼠下丘脑弓状核β-内啡肽免疫反应的强度

为探讨褪黑素（ＭＥＬ）镇痛作用的机制,本文采用免疫组化方法结合计算机图像处理技术,观察了注射ＭＥＬ对大鼠下丘脑弓状核内神经细胞的β－内啡肽免疫反应的影响。实验大鼠分约药组及对照组,分别腹腔注射ＭＥＬ１１０ｍｇ／ｋｇ或配药液,１ｈ后灌注取脑、冰冻切片,进行免疫组化染色,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度（ＩＯＤ）和平均光密度（ＯＤ）。结果显示,给药组大鼠弓状核内β－内啡肽免疫反应明显减弱,ＩＯ     

损毁弓状核区对大鼠脑内β-内啡肽、5-羟色胺、去甲肾上腺素含量及其对针刺镇痛的影响

下丘脑弓状核区是脑内合成β-内啡肽等物质的主要部位,并与脑内中缝背核、蓝斑等结构有密切的交互纤维支配。本实验用新生期大鼠注射谷氨酸—钠(MSG)损毁弓状核区的方法,观察对脑内β-内啡肽、5-羟色胺、去甲肾上腺素含量及针刺镇痛的影响。MSG 处理组大鼠下丘脑弓状核神经元减少72%左右,脑β-内啡肽含量降低67%,针刺镇痛效应明显下降,电针后脑去甲肾上腺素含量明显高于电针对照组;将 MSG 处理大鼠的垂体摘除后,针刺镇痛效应几乎消失,同时电针后脑去甲肾上腺素含量则显著高于单纯 MSG处理组。本文对可能的机理进行了讨论。     

孤啡肽对海马IL—1β表达的调节作用

采用原位杂交,免疫荧光双标技术及大鼠创伤应激模型,观察孤啡肽对海马白介素－1β（IL－1β）表达水平的影响,结果显示,侧脑室注射抗大鼠IL－1β抗体能明显改善创伤介导的免疫反应,即有效下调巨噬细胞分泌IL－1和TNF－α的能力,侧脑室注射孤啡肽后2h海马IL－1β的表达明显下降,且此作用能反啡肽受体拮抗剂阻断,免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜观察发现,孤喱肽的受体在神经经元,星形胶质细胞及小胶质细胞均有表达,实验结果提示,海马的IL－1β参与创伤应激介导的免疫反应,孤喱肽的神经免疫调节作用可能是通过作用于海马的中枢神经细胞,抑制L－1β的合成及释放而完成的。     

TGF-β1对体外培养的关节软骨细胞的作用

以原代培养的软骨细胞为材料,研究了转化生长因子IGF－β1对关节软骨细胞的增殖和软骨特异性基质代谢的作用,结果显示TGF－β1可以刺激细胞外基质中蛋白多糖含量的增加,并可以在转录水平上调节Ⅱ型胶原的表达。TGF－β1可以在体外诱导高密度培养的软骨细胞形成透明软骨样结构。没有用TGF－β1处理的高密度培养细胞不能形成透明软骨样结构,在透射电镜下观察发现其内部结构发生了异常变化。这些结果表明TGF－β1对于支持关节软骨细胞的体外培养具有重要的作用。     

吡格列酮对大鼠缺血/再灌注心肌转化生长因子β1表达的影响

目的:观察吡格列酮对大鼠缺血/再灌注损伤心肌转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为5组(n=6):缺血/再灌注组、吡格列酮5 mg/(kg.d)组、吡格列酮10 mg/(kg.d)组、吡格列酮20 mg/(kg.d)组、吡格列酮20 mg/(kg.d)+过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)特异性阻断剂GW9662组,利用在体结扎左前降支的方法建立缺血/再灌注损伤模型,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,RT-PCR方法检测心肌组织TGFβ1 mRNA的变化,Western blot方法检测心肌组织TGFβ1蛋白的变化。结果:TUNEL法显示吡格列酮抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡,吡格列酮上调TGFβ1表达,GW9662逆转吡格列酮对凋亡细胞的抑制作用,抑制吡格列酮促进TGFβ1表达上调的作用。结论:吡格列酮可抑制缺血/再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡,吡格列酮可促进TGFβ1上调,这两种作用是由PPARγ介导的。     

当归对高脂血清所致ECV304细胞损伤的保护作用

实验观察了高脂血清对培养的人脐静脉内皮细胞（ECV304）的损伤及传统中药当归的保护作用,以探讨当归的抗动脉粥样硬化作用及其可能机制,培养人脐静脉内皮细胞,以高脂血清作损伤因子,用扫描电镜观察细胞的超微结构,分光光度法检测细胞培养液中一氧化氮（NO）的含量,免疫细胞化学方法检测细胞表面细胞间粘附分子－1（ICAM－1）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)及转化生长因子β1（TGFβ）的表达,与高脂血清孵育24h后,内皮细胞的超微结构明显收损,且细胞表面ICAM－1,bFGF的表达明显增加,而细胞培养液中NO的量及细胞表达TGFβ1明显减少,加入当归后,高脂血清对内皮细胞的这些作用均可被逆转,当归对内皮细胞中ICAM－1,bFGF,TGFβ及NO表达改变的影响可能与其抗动脉粥样硬化的作用有关。     

α-黑色素细胞刺激素对白细胞介素-1β发热的解热机理研究

本研究观察了α－黑色素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对家兔白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）发热效应及下丘脑组织腺苷环－磷酸（ｃＡＭＰ）含量的影响;同时观察了下丘本外培养过程中,α－ＭＳＨ对ＩＬ－１β刺激下丘脑释放ｃＡＭＰ的影响。结果显示：α－ＭＳＨ能显著降低ＩＬ－１β引起的体温升高（Ｐ〈０．０５）;同时抑制下丘脑组织ｃＡＭＰ含量的增高（Ｐ〈０．０１）。ＩＬ－１β与下丘脑组织培养,其上清液的ｃＡＭＰ含量明显     

新生期注射谷氨酸单钠对大鼠骨骼的影响

目的：探讨下丘脑弓状核对大鼠骨骼的影响。方法：用损毁弓状核（ARC）的方法。将SD大鼠于出生后第1、3、5、7、9d皮下注射10％谷氨酸单钠（MSG）4g／kgbw,对照组同法注射等体积生理盐水。存活至第200d处死。剥净左侧股、胫、肱、桡、尺骨,测其重量、长度、横长径、横短径、体积。下丘脑作石蜡切片,HE染色。光镜观察ARC神经元,并用图像分析仪计算ARC神经细胞数。用放免法测血清中GH（生长素）,E2（雌二醇）含量。结果：MSG大鼠弓状核神经细胞数量显著减少,股、胫、肱、桡、尺骨的重量、长度、横长径、横短径、体积都明显减少。与对照组比较差异非常显著（P〈0．01）。但单位体积骨重量（g／cm^3）与对照组差异不显著。血清GH、E2显著降低。结论：提示下丘脑弓状核通过调节与骨代谢有关的激素参与全身骨骼生长发育的调控。     

反义c—fos和c—jun抑制IL—1诱导阿片肽分泌

白细胞介素（ＩＬ－１）及阿片肽作为神经调质参与了神经细胞兴奋性毒性作用,以大鼠大脑皮层神经细胞为研究对象,探讨了ＩＬ－１、阿片肽和ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达产物之间的关系,结果表明,ＩＬ－１β能诱导大脑皮层神经细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ瞬时短暂表达,１５ｍｉｎ增高,３０ｍｉｎ达高峰,ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ ２ｈ回至基线水平,ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ ８ｈ回至基线水平;联合应用ｃ－ｆｏｓ,ｃ－     

以纤连蛋白(FN)细胞结合片段研究大鼠肝星状细胞FN受体表达及调控

应用亲和层析、凝胶过滤法以及X型蛋白酶消化结合制备电泳分别提取纯化大鼠FN及FN细胞结合片段（120 KDa FN-f）,后经生物素标记后,用亲和细胞化学方法研究大鼠肝星状细胞（HSC）FN受体（FNR）表达及调控。结果显示,生物素标记的120KDa FN－f与FNR的结合具有特异性。原代培养5d、7d的正常大鼠HSC表达FNR较培养1d、3d的明显增强,血小板源性生长因子（PDGF）和转化生长因子－β、（TGF－β1）可上调大鼠HSC表达FNR,全反式维甲酸（atRA）则下调细胞因子再激活的HSC表达FNR,并呈剂量依赖性。本建立了检测FNR的一种新方法,即配体（120KDa FN-f）－受体（FNR）亲和细胞化学方法,该方法能反映FNR的总体水平及活性状态。同时初步探讨了影响大鼠HSC表达FNR的因素,确切机制有待进一步研究。