快速显示血细胞及骨髓细胞DNA、RNA的方法

实验对传统的甲绿 派若宁法做了一定的改进 ,使染色时间缩短 ,步骤简化 ,效果良好。并对骨髓和脾造血细胞内ＤＮＡ、ＲＮＡ的定性和定量显示进行了一定的探讨。1.材料和方法1 1　材料 :派若宁Ｙ染液的配制 6%派若宁Ｙ(ＡＭＲＥＳＣＯ分装 ) 1ｍｌ,0 2Ｍ醋酸缓冲液(ｐＨ5 0 ) 8ｍｌ,蒸馏水 8ｍｌ ,优质甘油 1ｍｌ。此过程在磁力搅拌器上进行。 2 %甲绿用 0 1ＭＰＢＳｐＨ7 2溶液配制 ,经三氯甲烷洗脱去影响染色效果的甲紫成分 ,制得较纯的甲绿溶液。1 2　染色方法 :取小鼠股骨 (用ＲＰＭＩ 1640培养液将骨髓冲出 )和脾细胞 ,制成细胞悬液…     

禾本红酵母Y－5对结晶紫、孔雀石绿的吸附

研究了培养时间、初始pH、温度对禾本红酵母Y-5吸附结晶紫、孔雀石绿的影响,并对吸附剂的解吸和循环利用等进行考察.结果表明： 在染料浓度为50 mg·L^-1、pH 7.0、摇床转速150 r·min^-1、30 ℃、吸附10 h时,红酵母对结晶紫、孔雀石绿的吸附率分别达峰值,为93.8%和87.7%;解吸后的菌体对结晶紫、孔雀石绿的吸附率分别为85.5%和78.5%,说明菌体对染料的吸附是可逆的,循环利用效果良好,菌体可再生和循环利用;禾本红酵母Y-5对结晶紫、孔雀石绿的脱色机理为吸附作用,染料多被吸附在红酵母表面的羟基（-OH）上,其吸附染料快速、高效、可逆,在染料废水处理上具有潜在的应用价值.     

植物材料光学和电镜蛋白A-金胶体结合体标记技术

这里介绍一种可在光学显微镜薄切片和电子显微镜超薄切片上标记的技术。我们初步应用这一技术来做燕麦球蛋白的定位,结果是成功的(图版图1,2)。现将操作方法简述如下: 一、样品制备 1.把切成2—3微米~3的新鲜材料,用磷酸缓冲液(pH 7.1)配制的3—4％甲醛(加2.5％蔗糖),在室温固定2小时; 2.用磷酸缓冲液清洗两次,每次30分;     

实验15 DNA介导转移基因(DMGT)

1.配制试剂 100×磷酸缓冲液:Na_2HPO_4·7H_2O 0.49克。NaH_2PO_4·H_2O 0.7克,溶于100毫升水中,过滤除菌。—20℃贮存。Hepes缓冲液:Hepes(50mM)1.19克(分子量为238.3),NaCl(280mM)1.64克,溶于水中,用1N NaOH调节pH为7.05—7.10,加水至100毫升,过滤除菌。—20℃贮存。     

嗜酸乳杆菌固态发酵的初步研究

研究了嗜酸乳杆菌在 4种不同固态基质 (豆渣、麦麸、芋艿渣、纤维素 )中的生长情况 ,结果显示 :1)豆渣作为基质时嗜酸乳杆菌生长最佳 ,最高活菌数可达 1.6 45× 10 9cfu/g ,麦麸次之 ,达 3.2× 10 8cfu/g ,纤维素最差 ,仅为 2 .1× 10 7cfu/g ,并且豆渣固态培养基优于对照的 3种液体培养基 ;2 )豆渣的含水量以 75 %左右为宜 ;3)通过加入可中和所产酸量的CaCO3 ,并用缓冲液代替水配制培养基 ,结果发现用pH 6 .0的缓冲液配制的培养基 ,培养后活菌量可达 2 .12 4× 10 9cfu/g ,,比对照用自来水提高了 4.2倍 .     

稻飞虱染色标记回收方法简介

<正> 为了开展稻飞虱迁飞规律的研究,从1977年起我们进行了试验,并取得了初步结果,现将试验情况简介如下: 一、标记液配方 粘虫、稻纵卷叶螟的标记液由酒精(溶剂),生物染料(碱性品红、碱性品蓝等)和虫胶片(粘着剂)三种成分组成。我们对这三种成分的组合及其比例进行了试验,以寻求适宜的配方。 1.用95％、75％、70％、68％、50％、30％、20％、10％、5％不同浓度的酒精,加0.25％虫胶片和0.25％碱性品红,配制成不同酒精浓度的标记液。     

哺乳类基因工程的一些实验操作 实验7 放射性同位素标记DNA探针

一、切[3移位（Nick translation)标记 DNAI. 配制试剂(1) 10XNT（切口移位）缓冲液：50mMMgCI21 0.1M R-M,基乙醇10.5m Tris·HCI pH7.8/0.，毫克1 毫升小牛血清白蛋白。 (2)2XAct缓冲液：20tnM Tris·HCl PH7.5/ JOmM MgCI,/2毫克/ 升小牛血清白蛋白。 (3) 1:4000 DNasel ＾液：1毫克DNase I/ I,升lomm HCI. B液：取人液5微升，加2XAc。液22.5微升和双 重蒸馏水22.5微克， 终体积为50微升（DNase I 1:10)0 取B液1.25微升，加498.75微升2 X Act缓冲 液。终体积为500微升（DNase 11:4000)a (4) dATP, dTTP, dCTP和dGTP各用重蒸水 配成2mM。体积1毫开。 2． 标记放射性同位素的反应按下列次序在 Eppendorf离心管中加入试剂：DNA探针（0.1-1.0 微克）z微升；IOXNT缓冲液2.5微升；dATP 1.5 微升；dG'TP 1.5微升；dTTP 1，，微升；ddH,0 y微 升；。一，'P-dCTP (3,000居／米摩(mmol), 10微居／微 米）5微升；DNase I (1:4 , 000)Ci/mmol, 0.5-1微 升。使总体积为25微升。置冰上1小时，加DNA多 聚酶I，单位，14℃水浴1-1.5小时，加0.2M EDTA 2.5微升终止反应。     

响应面优化丙酮粉法提取金银花多酚氧化酶

对丙酮粉法提取金银花多酚氧化酶的工艺进行研究,结果表明,缓冲液p H、料液比、提取时间对PPO比活力影响显著。缓冲液p H与料液比交互作用极其显著,回归模型拟合性良好(R2=99.31%);影响显著顺序为:静置时间缓冲液p H值料液比;最优化工艺参数为:缓冲液p H7.5,料液比为1∶120,提取时间为14.5 min。在此条件下,酶比活力为137.389 U/mg。     

新品了望

PCR试剂的缓冲液 Thermo Fisher Scientific宣布Thermo Scientific Thermo-Start系列热起始RCR试剂现提供Reddymix缓冲液可进行更方便,无误差的配置．改善了反应的再现性。缓冲液含有惰性红色染料增加了试剂和塑料容器之间的对比度从而一眼就可以方便的判断是否准确移液。该试剂为每个反应含有正确体积提供了再次保证增加了实验的再现性。缓冲液内含有的红色染料和沉淀剂使终PCR产物可以直接进行琼脂糖凝胶上样,减少了PCR后处理步骤．节省了可观的时间。     

大蒜根的扫描电镜图象

将蒜根切成1-2毫米长的小段,放在2%戌二醛固定液中固定4小时,并用抽气泵抽去组织中的空气;用缓冲液冲洗几次后放入5-6%高锰酸钾固定液中固定48小时,再用缓冲液冲洗后,乙酸逐级脱水,然后喷碳喷金.这种二次固定制取的样品很脆,一碰就碎,这有利于     

白腐菌菌体对染料的生物吸附脱色及机理研究

目的：研究了白腐菌菌体吸附染料特性、影响因素及吸附机理。方法：采用分光光度法、吸附热特性、傅立叶变换红外光谱（FTIR）分析等系统地对菌体吸附特性及机理进行研究。结果：白腐菌BP对不同类型的染料有不同的吸附效果,240min内染料RBBR脱色率能达82.35%。菌体对RBBR的合适吸附条件为：温度28℃、转速100r/min、菌体粒径小于60目。吸附符合Freun-dlich模式,为多分子层吸附。菌体吸附染料主要通过菌体表面的羟基、羧基、胺基及磷酸基团与染料分子以共价键、离子交换或氢键结合来进行。结论：利用白腐菌菌体能有效的对部分染料进行吸附脱色。     

西藏21种真菌的血凝活性测定

选用了21种野生真菌,分别以PBS(磷酸缓冲液)浸提,浸提液进行兔红血球血凝活性测定,结果显示:冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、蜜环菌(Armillariella mellea)、翘鳞肉齿菌(Sarcodon imbricatus)等不能使兔红血球凝集,显阴性;其余真菌均能使兔红血球凝集,其中以棱柄白马鞍菌(Helvella crispa)和美味牛肝菌(Boletus edulis)效价最高26;盘状马鞍菌(Helvella pezizoids)次之25;其余的均为20～23.取PBS浸提效价较高的6种样品棱柄白马鞍菌、盘状马鞍菌、真姬离褶伞(Lyophyllum shimeji)、红菇腊伞(Hygrophorus russula)、美味牛肝菌、离褶伞(Lyophyllum)等分别用Tris、NaAcetate(乙酸钠)、Glycin(甘氨酸)等不同pH缓冲液浸提,浸提液进行兔红血球血凝活性测定,结果显示:显弱酸性或弱碱性的缓冲液浸提时,浸提液对兔红血球血凝活性效价高于中性缓冲液,浸提真菌样品时最好使用弱酸或弱碱性缓冲液.     

白桦茸凝集素提取工艺的优化

对白桦茸凝集素最佳提取工艺进行了研究.以2%兔血细胞凝血效价为指标,确定了最佳提取缓冲液.通过正交试验对料液比、提取时间、提取液pH值、NaCl浓度等因素进行了优化分析并确定了提取工艺的最佳参数组合.结果表明,以TBS和PBS为提取缓冲液所得的白桦茸凝集素凝集效价分别为64、16;最佳提取工艺:液料比为50:1,提取时间为20h,NaCl浓度为0mol/L,缓冲液pH值为8.0,按该最佳工艺提取白桦茸凝集素凝血效价为256.所优化的提取工艺稳定、可行,为该凝集素进一步在免疫调节方面的开发应用提供一定基础.     

限制性内切酶反应缓冲液配制

低盐缓冲液中盐缓冲液高盐缓冲液smal缓冲液 10mM 10mM lmM 10mM 50mM 10mM lmM100mM 50mM 10mM lmM 20mM 10mM 10口IM lmMTris一el(pH7 .5)MgCI:盛TTTr七一el(pH7.5)NaCIMgC】:D口fTNaCITr此一el(pH7.5)MgCI:八TTKCITr认cl(pHS.o)MgCI,奋TT。限制性内切酶反应缓冲液配制 ~~     

一种快速简便提取真菌染色体DNA的方法

本文描述一种快速、简便提取真菌嗜松青霉菌染色体DNA的方法,包括液体培养菌体,Tris-EDTA缓冲液中破碎菌体,通过酚、氯仿导戊醇和乙醚提取染色体DNA。用此法提取的嗜松青霉菌染色体DNA分子长度可达50     

车前草可溶性膳食纤维的提取及其对自由基清除能力的研究

本文采用超声技术提取车前草中可溶性膳食纤维;通过单因素及L9(34)正交实验获得提取最佳工艺,即用固液比1:30,pH为4的0.2 M乙酸-乙酸钠缓冲液提取,提取时间为20 min。车前草水溶性膳食纤维对.OH-自由基有较强的清除能力,其IC50为0.323 mg/mL;对.O2-和DPPH的最高清除率分别为19.2%和13.7%。     

碱性染料用酸配制的原因分析

“观察植物细胞的有丝分裂”实验中介绍的染色剂有2种,一种是质量浓度为1%或2%的龙胆紫溶液(将龙胆紫溶解在质量分数为2%的醋酸溶液中配制而成的),另一种是醋酸洋红。很多教师及学生对于以上染色剂的配制有很大的疑问:碱性染料为什么用酸配制?配制好后的溶液是酸性的还是碱性的?如果是酸性的还     

去氧核醣核酸,多醣类,蛋白质的三色染色

甲)材料及固定:哺乳类、两栖组织,包括甲状腺、肾、小肠、胃、睾丸;昆虫的精巢,肌组织;及数种植物组知,固定于 Carnoy 氏液,福尔马林液,Helly 氏液,或 Smith 氏液皆可。乙)试剂试剂 T:天青 A-schiff 液——溶0.5克天青 A(azureA)于100毫升漂白液内(见下)可保持数周,用前加100%偏亚硫酸氢钾(K-me(?)abisulfite)数滴。试剂Ⅱ:漂白液——1N盐酸5毫升;10%偏亚硫酸氢钾或钠5毫升;蒸馏水90毫升;新鲜制备。试剂Ⅲ:高碘酸液(periodic acid solu)——高碘酸0.8克;蒸馏水90毫升;0.2M醋酸钠10毫升;新鲜配制。试剂Ⅳ:硷性复红 schiff 液——根据 Stowell 氏法(1945)配制,溶液置冰箱内可保持数月。     

海藻希瓦氏菌(Shewanella alga)发酵培养基条件优化的研究

目的:优化海藻希瓦氏菌生产河豚毒素的发酵培养基。方法:通过测定菌体密度(用OD600表示)和菌体收获量,研究了部分初始条件及添加不同营养物质对海藻希瓦氏菌生长的影响,采用单因素试验和正交试验对发酵条件进行了优化。结果:最适发酵初始pH为7.5,最适摇瓶装液量为150mL。通过正交试验找出最大影响因素为葡萄糖供应,优化后的培养基最佳配方为:在2216E培养基中添加1.0%葡萄糖、2.5%酵母粉、1.0%磷酸高铁。结论:优化后的培养基培养供试菌,菌体收获量比在2216E培养基中培养增加了2.012g.L-1。     

痢疾阿米巴培养的研究痢疾阿米巴在双相培养基内生长的分布情况

自双相培养基内转种痢疾阿米巴之培养物时,都是自培养基的底部取材,因为底部的虫体较多,但究竟在底部的哪一层,沉淀物曲底呢或表层呢?关于这方面的问题尚缺乏参考资料。本文的研究目的是了解痢疾阿米巴在双相培养基的液体部分中生长和分布的情况,作为转种及浓集虫体的参考。一、方法①培养基是洛克——鸡蛋——血清培养基(1):鸡蛋斜面部分分装于试管(16×1.5厘米)内,每管约1.5毫升,斜面高度约4厘米;复盖液为5毫升(洛克氏液∶牛血清=8∶1);米粉1白金耳。②痢疾阿米巴培养48小时后,在培养基试管外壁,用蜡笔划分6个不同的水位标记(图1),即:Ⅰ.沉淀物下层;Ⅱ.沉淀物上层;Ⅲ.沉淀物表层——紧接触沉淀物上层之一薄水膜;Ⅳ.沉淀物上部1—5毫米处;