一体化的光声-荧光显微镜用于活体肿瘤成像

报道了一种利用单一波长激发的同时产生光声和荧光信号的显微成像系统,本成像系统具有超高的成像分辨率(<6μm)。借助外源的造影剂在近红外的吸收特性,利用光声-荧光显微成像系统对活体肿瘤进行光声/荧光成像。实验结果表明,光声-荧光显微镜在早期肿瘤的成像和检测等方面具有潜在的应用价值。因此,通过研究和选择适当的双模态造影剂,该系统在不同病理模型中可以提供更准确的组织信息及生理参数。     

基于光学相干检测的非接触全光学光声显微镜

报道了一种非接触、宽频带、联合微型激光器和低相干迈克尔逊干涉仪的全光学光声显微镜(BD-AOPAM)、光学相干层析系统(OCT)的硬件用于光声信号的检测。目前全光学光声显微镜可检测到的带宽为67 MHz,用碳纤维测得系统的横向分辨率可以达到10.8μm。进一步的,利用包埋头发丝的模拟样品和在体小鼠耳朵血管来验证系统的成像能力。实验结果表明,这种全光学光声显微镜可以在体的实现组织高分辨率的成像,有望成为一种便携式非接触的光声显微镜应用于生物医学当中。     

人食管癌细胞株PTEN的激光共聚焦扫描显微镜检测

目的对人胚食管上皮永生化细胞株SHEE、SHEEMT、食管癌细胞株EC8712中PTEN表达情况进行定量比较和定位观察.方法采用激光共聚焦扫描显微镜光学切片和荧光探针的双重标记技术对三株细胞中PTEN的表达和分布情况进行检测.结果人食管癌细胞中PTEN主要表达在细胞浆和细胞核,在人胚食管癌上皮永生化细胞株SHEE、SHEEMT主要表达在细胞浆,食管癌细胞EC8712中细胞核表达增多,差异有统计学意义(P<0.01);PTEN在三种细胞株中表达强弱顺序为SHEE>SHEEMT>EC8712,差异有统计学意义(P<0.01).结论PTEN在SHEE、SHEEMT和EC8712分化程度不同的细胞株中均表达,表达和分布位置与分化程度相关.     

共聚焦显微镜检测细胞蛋白分布的研究

为使学生对位于细胞不同位置的蛋白的分布情况有直观的理解,针对本科细胞生物学基础实验开设的共聚焦显微镜课程内容作了改进研究:将绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒转染入细胞(相当于胞内蛋白);用免疫荧光方法标记细胞膜蛋白;FITC偶联的鬼笔环肽标记的细胞骨架蛋白,用DAPI染核,然后利用共聚焦的特有功能对细胞进行局部放大及分层扫描。实验结果得到了较为清晰的图像。     

内窥式激光共聚焦显微镜

为了能在活体内进行实时的细胞尺寸水平的共聚焦观测,科研工作者开展了大量的将激光共聚焦显微镜和内窥镜技术相结合的内窥式激光共聚焦显微镜的研究.本文主要列举了一些国外典型的内窥式激光共聚焦的结构及性能参数,介绍了我们在这方面取得的成果.我们建立的结构的横向分辨率为3.3 μm,轴向分辨率为16.6 μm.     

原子力及原子力声显微镜应用于生物学领域的回顾与展望

回顾了显微镜的发展史,着重介绍了原子力显微镜的工作原理,工作模式,成像特点及其在生物学领域的应用。对最新的原子力声显微镜的发展做了展望。     

多尺度的光声显微镜用于癌细胞及实体瘤成像

多尺度显微成像系统(M-PAM)被发展,并被用于成像从癌细胞到实体肿瘤的多尺度生物结构.该装置由二维运动平台,扫描振镜,物镜,聚焦超声换能器组成,其横向分辨率达到3 μm.结果显示该系统可以对体外培养黑色素瘤细胞与体内的黑色素瘤进行无标记成像.基于具有靶向性的探针,M-PAM系统可以对体外培养的U87-MG肿瘤细胞以及体内U87-MG实体肿瘤进行成像.综上所述,M-PAM系统将是研究肿瘤的有力工具.     

活细胞钙动态的共聚焦扫描显微镜检测技术

共聚焦激光扫描显微镜（Confocal Laser Scarming Microscope,CLSM）广泛应用于活细胞内钙敏感探针标记的钙水平的动态测量。较之传统的显微镜CLSM在钙成像分析上有着不可比拟的优越性,但也存在一些缺陷,近些年陆续出现了一些针对这些缺陷的改善措施,如比率法、葡聚糖探针及其他一些新技术与共聚焦显微镜的联合应用等,并且出现了诸如双光子显微镜等新型激光共聚焦显微镜。随着共聚焦钙成像技术的不断发展进步,其今后的应用前景将会越越广阔。     

多尺度的光声显微镜用于癌细胞及实体瘤成像（英文）

多尺度显微成像系统(M-PAM)被发展,并被用于成像从癌细胞到实体肿瘤的多尺度生物结构。该装置由二维运动平台,扫描振镜,物镜,聚焦超声换能器组成,其横向分辨率达到3μm。结果显示该系统可以对体外培养黑色素瘤细胞与体内的黑色素瘤进行无标记成像。基于具有靶向性的探针,M-PAM系统可以对体外培养的U87-MG肿瘤细胞以及体内U87-MG实体肿瘤进行成像。综上所述,M-PAM系统将是研究肿瘤的有力工具。     

基于直线电机连续-步进运动的快速光声显微成像系统

报道了一种利用直线电机连续-步进的扫描方式进行光声显微成像的系统,该系统在运动时走弓字型路线,其中直线电机在X轴方向上连续运动,在Y轴方向上以步进的方式运动,采集卡只在X轴电机运动的过程中连续采集。该成像系统较之前振镜扫描的方式扫描的范围更大,可达到厘米尺度范围内的生物组织光声成像;较之前的步进电机逐点扫描的方式扫描速度明显提高。同时本文采用电机带动光和超声换能器一同扫描的方式,较光和超声换能器不动电机带动样品扫描的方式更灵活。另外利用包埋碳丝的模拟样品和在体小鼠耳朵血管来验证系统的成像能力。实验结果表明,这种快速光声显微成像方法及其系统可以实现在体组织的高分辨率成像,有望成为一种无创、实时的光声显微镜应用于生物医学当中。     

抗砷细胞荧光染色后的激光共聚焦显微镜检测

目的:应用激光共聚焦显微镜检测活细胞内荧光物质含量.方法:传代培养长期低剂量砷诱导的抗砷细胞,用荧光染料Rhodamine-123对细胞染色30min,实验组与维拉帕米(Verapamil)共同孵育,对照组为单加Rhodamine-123的抗砷细胞.应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录不同时间段的细胞内荧光强度.结果:实验组细胞染色12h,24h,36h,48h,60h后,荧光强度依次为(51.567±0.7572)、(46.533±0.7095)、(39.557±0.601)、(38.6±0.6245)和(38.505±0.718),明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有显著性(P＜0.01).结论:应用激光共聚焦显微成像技术能进行活细胞水平荧光物质实时定量检测.     

激光扫描共聚焦显微镜术检测单个血小板钙波动方法的探讨

目的 探讨血小板贴壁的简易方法,同时,观察单个血小板激活前后细胞内钙波动及形态变化的规律。方法 采用多种粘附剂固定血小板,利用钙荧光探针（Fluo-3/AM)（终浓度10－20μmol)进行染色,在激光扫描共聚焦显同镜检测下加入二磷酸腺苷,观察和分析血小板内Ca^2 浓度及形态变化。结果 多聚赖氨酸促进血小板贴壁固定的效果最佳;单个血小板活后细胞内Ca^2 浓度为激活前的128％,形态圆形或椭形转为不规则形,有空泡,突起形成。结论 多聚赖氨酸是血小板贴壁的理想粘附剂,本方法能简易,快捷地监测血小板激活过程中胞浆内钙离子动态变化及形态改变,有助于血小板功能的深入研究。     

激光扫描共聚焦显微镜荧光探针的选择和应用

激光扫描共聚焦显微镜是检测生物荧光信号的最新技术手段。不仅广泛用于荧光定性、定量测量,还可用于活细胞动态荧光监测、组织细胞断层扫描、三维图象重建、共聚焦图象分析、荧光光漂白恢复、激光显微切割手术等。本文拟就激光扫描共聚焦显微镜常用的检测内容及其相关荧光探针的选择和应用做一简单的介绍。     

激光共热扫描显微镜的光学层析特性研究

本文从理论上研究了激光共焦扫描显微镜的光学层析特性,并给出了探测器的针孔大小,聚焦物镜数值孔径与光学层析的关系,最后还给出了利用光学层技术发现的一种寄生虫新的形态结构的实验结果。     

水稻双受精过程的共聚焦显微镜观察

(郑州大学离子束生物工程省重点实验室,郑州450052)摘要:首次利用核特异荧光染色与整体透明技术并利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)对水稻双受精过程进行了观察。激光扫描共聚焦显微镜具有"组织与细胞CT"的功能,可以对整体组织进行扫描并构建三维结构。经荧光染色及透明处理后,在激光扫描共聚焦显微镜下经488nm激光激发,胚囊内各细胞的细胞核以及核仁发出明亮荧光,细胞核轮廓比较清晰,层次感强,并能清晰观察到胚囊内各细胞的结构特点和空间位置关系。不论是对开花前较小的成熟胚囊材料还是开花后较大的胚囊材料都取得了较好的观察效果。同传统的光学显微镜和荧光显微镜相比,其观察到的图像更清晰、更直观、更具立体感。     

激光扫描共聚焦显微镜在医学研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope,CLSM）具有高分辨率、高灵敏度、三维重建、动态分析等优点,使图像更为精确清晰和数字化。该仪器现已广泛应用于细胞生物学、生理学、病理学、遗传学和药理学等研究领域中。本文简述了激光扫描共聚焦显微镜的结构、工作原理并归纳了其在医学各领域研究中的应用。     

光声结合用于生物组织成像的研究进展

光声结合为生物组织层析成像提供了一种新的有效的手段。这种新方式克服了传统成像技术的一些不足,能获得更多的信息。本文总结了该领域三个主要研究方向的工作,同时分析了目前存在的问题。     

激光共聚焦显微镜在肿瘤免疫治疗检测中的应用

目的:通过激光共聚焦显微镜对肿瘤生物治疗后患者的外周血淋巴细胞进行亚群计数,为生物治疗后外周血淋巴细胞无法分群的肿瘤患者提供新的监测免疫功能状态的方法。方法:收集35例肿瘤生物治疗后患者的外周血标本,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪两种方法分别对患者外周血淋巴细胞亚群进行分类计数。结果:流式细胞仪和激光共聚焦显微镜同时分类计数的患者外周血细胞标本30例,两种方法在检测CD3、CD3~+/CD4~+、CD3~+/CD8~+、CD3-/CD16~+56~+、CD3-/CD19~+细胞时均无统计学差异(P值0.05);5例流式细胞仪无法将患者外周血淋巴细胞分群的样本,通过激光共聚焦显微镜可以进行分类计数。结论:激光共聚焦显微镜亦可以用于外周血淋巴细胞的分类计数。     

激光扫描共聚焦显微镜术中活细胞标本的制备

激光扫描共聚焦显微镜是以单个的、活性的、贴壁的细胞标本为主要的研究对象。为了获得适合共聚焦显微镜分析的组织细胞标本,本文讨论了标本制备存在的一些问题并提出了改进的方法。结果显示：组织细胞外环境中盐溶液、ｐＨ值、温度、氧气等均为影响细胞活性的重要因素;而且细胞的贴壁效果也是观测分析的关键条件之一。本文对激光扫描共聚焦显微镜术中的组织细胞学方法进行了探讨,并为此提供一些有实效的实验方法。     

利用转盘共聚焦显微镜进行快速实验的新方法

转盘共聚焦显微镜是快速激光共聚焦显微镜的一种,与传统的激光共聚焦显微镜相比具有一些相同点,也有其特有的优势。本文主要介绍转盘共聚焦显微镜的基本原理及如何利用转盘共聚焦显微镜进行快速实验及应用实例,并与传统激光共聚焦显微镜进行比较。转盘共聚焦显微镜具有速度快、灵敏度高、对样品光损伤和光淬灭程度低、操作灵活简单,是随着实验技术发展使用越来越广泛的实验仪器。