青岛文昌鱼LIM类基因Bblim同源框区的cDNA克隆、序列分析及其在胚胎发育中的表达(英文)

不同卵裂球发育命运的特化、亦即胚胎细胞的分化是动物胚胎发育的重要特征。多数胚胎细胞尽管形态特征完全一致,却具有完全不同的发育命运。预示着：在这些细胞中存在有决定发育命运的因素———决定子。本工作克隆了青岛文昌鱼ＬＩＭ类同源框基因的同源框片段。目的在于揭示决定子的分子本质。青岛近海采集性成熟的成年青岛文昌鱼,收集未受精卵、受精卵以及各个不同时期的胚胎,液氮冻存备用。分别制备总ＲＮＡ。根据其它动物ＬＩＭ类同源框基因的序列设计引物（Ｔａｂ．１）,连续进行ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ两次扩增。其中,原肠胚来源的第二次ＰＣＲ产物经电泳鉴定（Ｆｉｇ．１）后,酶切、克隆入质粒、测序、将该片段所在的基因命名为Ｂｂｌｉｍ基因,该片段称为Ｂｂｌｉｍ同源框。根据Ｂｂｌｉｍ基因同源框的核苷酸序列推导出其相应的氨基酸序列（Ｆｉｇ．２）,与其它ＬＩＭ类同源框基因进行比较（Ｆｉｇ．３）后,认为：Ｂｂｌｉｍ基因可归入ｌｉｍ３类基因。比较胚胎发育各个不同时期第二次ＰＣＲ产物的含量———即Ｂｂｌｉｍ基因的转录（Ｆｉｇ．４）,提示：该基因可能在受·精·后·和·原·肠·形·成·期·前·后·两个发育阶段起作用。此外,Ｂｂｌｉｍ基因的同源域与海鞘Ｈｒｌｉｍ的     

青岛文昌鱼LIM类同源模型基因反义寡核苷酸对其胚胎发育的影响

研究了青岛文昌鱼ＬＩＭ类同源框基因Ｂｂｌｉｍ反义寡核苷酸对文昌鱼胚胎发育的影响。根据已克隆的Ｂｂｌｉｍ基因序列,设计并合成了对应于该基因同源框区的两条反义寡核苷酸链,用电脉冲方法将其导入文昌鱼受精卵。结果表明：反义寡核苷酸与随机序列寡核苷酸都不影响胚胎细胞分裂,而反义寡核苷酸能掏胚胎细胞Ｂｂｌｉｍ基因的表达。还发现只存在于导入反义寡核苷酸的幼体中的两种畸形－一是在幼体的腹侧近咽部有一圆形突起的结构     

大麻哈鱼生长激素基因Ⅱ的分子克隆和序列分析

以λ噬菌体ＥＭＢＬ－３为基因载体,构建大麻哈鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ　ｋｅｔａ）基因组文库,并从中分离出含全长的生长激素（ｃｓＧＨ）基因的克隆。本研究首次报道了对ｃｓＧＨ全长核苷酸序列分析的结果。发现ｃｓＧＨ基因由６个外显子和５个内含子组成,长度为３３６１碱基对（ｂｐ）。由该序列可推导出含２１０个氨基酸的多肽,其中存在２２个疏水氨基酸残基的信号肽。本研究所分析的ｃｓＧＨ的外显子和内含子,其排列方式与其他鲑类（Ｓａｌｍｏｎｉｄｓ）和罗非鱼（Ｔｉｌａｐｉａ）是相似的,而与鲤科鱼类（Ｃａｒｐｓ）不同,后者外显子和内含子的排列方式与哺乳类和鸟类相似。将所测定的 ｃｓＧＨ基因的编码区与已发表的 ｃｓＧＨⅡ和ｃｓＧＨ Ⅱ两种 ｃＤＮＡ序列进行比较,证明本研究所克隆的 ｃｓＧＨ基因应属于 ｃｓＧＨ Ⅱ,因它们的编码序列 １００％同源。     

番茄抗病基因Cf9的3′UTR区含有内含子序列

从番茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌ．）抗病品种“中杂９号”基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了番茄抗叶霉病基因Ｃｆ９。序列分析结果表明,该基因全长２７５１ｂｐ,含有一个编码８６３个氨基酸的开放阅读框架。在该基因的３′ＵＴＲ区发现了一段未曾报道的内含子序列,长１１５ｂｐ,它所处的位置与番茄另一个抗叶霉病基因Ｃｆ２内含子的位置相似,其５′和３′边界序列为一重复序列,ＴＣＣＡＧＧ（Ｔ）ＡＴＴＣ,并与Ｃｆ２基因内含子边界序列高度同源。与已报道的Ｃｆ９的ｃＤＮＡ序列相比,它的第３７１位的核苷酸Ｔ突变成了Ｃ,从而使其编码蛋白的ＬＲＲ区第１２１位的亮氨酸突变为脯氨酸。     

豌豆外源凝集素基因的克隆及序列分析

从豌豆幼叶分离基因组ＤＮＡ,设计特异引物,用聚合酶链式反应方法扩增出豌豆外源凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＥｃｏＲＶ位点。进一步亚克隆至ｐＵＣ１９。序列分析表明,克隆到的片段大小为８３２ｂｐ,包含了豌豆外源凝集素基因完整的编码序列。该基因无内含子,同报道的已知序列相比,其核苷酸序列及推测的氨基酸序列的同源率分别为９９．６％和９８．９％。     

苏云金芽胞杆菌质粒pBMB2062的克隆及遗传稳定载体的构建

从苏云金芽胞杆菌ＹＢＴ－１５２０菌株中克隆到１个小质粒ｐＢＭＢ２０６２,序列分析表明该质粒由２ ０６２个核苷酸组成。该质粒含２个编码框（ｏｒｆ１和ｏｒｆ２）,可分别编码由２８９个氨基酸和８０个氨基酸组成的蛋白质。这２个潜在的蛋白质分别与质粒的复制启始蛋白和复制蛋白同源。ｐＢＭＢ２０６２与２个已知同源质粒之间有２３个核苷酸的差异,这些差异引起了ｏｒｆ１编码框的变化。ｃＤＮＡ合成和ＰＣＲ检测显示与ｐＢ     

青岛文昌鱼LIM类基因Bblim同源框区的cDNA克隆、序列分析及其在胚胎发育中的表达

不同卵裂球发育命运的特化、亦即胚胎细胞的分化是动物胚胎发育的重要特征。多数胚胎细胞尽管形态特征完全一致,却具有不同的发育命运。预示着：在这些细胞中存在有决定发育命运的因素－决定子。本工作克隆了青岛文昌鱼LIM类同源框基因的同源框片段。目的在于揭示决定子的分子本质。青岛近海采集性成熟的成年青岛文昌鱼,收集未受精卵、受精卵以及各处不同时期的胚胎,液氮冻存备用。分别制备总RNA。根据其它动物LIM类同源框基因的序列设计引物（Tab.1),连续进行RT－PCR和PCR两次扩增。其中,原肠胚来源的第二次PCR产物经电泳鉴定（Fig.1)后,酶切、克隆入质粒、测序、将该片段所在的基因命名为Bblim基因,该自然称为Bblim同源框。根据Bblim基因同源框的核苷酸序列推导出其相应的氨基酸序列（Fig.2),与其它LIM类同源框基因进行比较（Fig.3)后,认为：Bblim基因可归入lim3类基因。比较胚胎发育各个不同时期第二次PCR产物的含量－即Bblim基因的转录（Fig.4),提示：该基因可能在受精后和原肠成形前后两个发育阶段起作用。此外,Bblim基因的同源域与海鞘Hrlim的同源域高度同源,表达模式也相似,提示,Bblim基因可能是Hrlim基因在文昌鱼中的类似物。     

甘薯叶片超氧化物歧化酶基因克隆及测序

以甘薯（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｐｏｉｒ）叶为材料提取植物总ＲＮＡ,经反转录后,利用多聚酶链式反应技术,扩增并克隆超氧化物歧化酶基因的ｃＤＮＡ,并进行测序分析。该序列全长４８２ｂｐ,其读码框编码１５２个氨基酸,与国外文献报道的甘薯块根ＳＯＤ基因的ｃＤＮＡ序列相比,具有９９％的同源性。     

苎麻疫霉激发蛋白基因断裂现象初探

苎麻疫霉可分泌具有诱抗作用的激发蛋白（α－ｅｌｉｃｉｔｉｎ）,根据α－ｃｌｉｃｉｔｉｎ第２４￣３０和５６￣６３位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组ＤＮＡ进行特异ＰＣＲ扩增反应,发现其扩增的ＤＮＡ片段大于预计的片段。回收纯化的特异扩增ＤＮＡ,并进行克隆和测序分析,结果表明特异扩增的ｃｌｉｃｉｔｉｎ基因亚克隆ＤＮＡ为５７０ｂｐ,大于预计的１１７ｂｐ。在特异片段中,存在３个内含子将基因     

抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体表达载体的构建及其表达

用ＰＣＲ方法以分泌抗甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞的基因组为模板,扩增了编码ＢＮＹＶＶ单抗的重链可变区（ＶＨ）基因。测序表明,该ＶＨ序列属于小鼠ＩＩ（Ａ）亚类,全长为３６０ｂｐ,编码１２０个氨基酸。将其和先前克隆的轻链基因分别插入到一个含有连接ＶＨ和ＶＬ基因的连接序列的质粒之中,构建成单链抗体（ｓｃＦｖ）基因的表达载体ｐＴＣｓｃＦｖ。将质粒在大肠杆菌中表达,ＥＬＩＳＡ法检测出     

稻胚凝集素基因的克隆,序列分析及表达

以水稻基因组ＤＮＡ为模板,以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＳｍａⅠ位点。序列分析表明,克隆到的基因片段大小为７８１ｂｐ,没有内含子,编码１条长２２７个氨基酸、分子量约２３ｋＤ的肽链,其中Ｎ－端２８个氨基酸是信号肽。与报道的稻胚凝集素ｃＤＮＡ序列进行顺序同源性比较,发现它们之间有很高的同源性（９９．７４％）,其编码区第１６７     

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3′端非编码区的克隆、序列分析及其表达

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系（ＴｏＭＶＬ）序列人工合成引物,经ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物（ＴｏＭＶＳ１）的外壳蛋白ＣＰ基因及３′端非编码区。序列测定结果表明,所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸,其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸,编码１５８个氨基酸,３′端非编码区含２０２个核苷酸,其核苷酸序列与ＴｏＭＶＬ株系具有９９．５％的同源率。将该基因片段克隆到ｐＧＥＭＥＸ１载体中,转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证明,该基因已在大肠杆菌中正确表达。这是我国首次报道ＴｏＭＶＣＰ基因序列。     

鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达

鸡马立克氏病病毒ＢａｍＨＩ基因文库Ｉ３质粒中含有编码Ｂ抗原膜外Ｄｏｍａｉｎ的ＤＮＡ序列。经ＳｃａＩ和ＳｐｈＩ双酶酶解Ｉ３质粒,分离获得７６４ｂｐＤＮＡ片段,并克隆进Ｍ１３ｍｐ１９中。ＤＮＡ序列测定分析表明克隆片段为ＭＤＶ－Ｂ抗原基因的４９４－１２５８ｂｐ部分序列。进一步分离ＮｃｏＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ部分基因片（５３０ｂｐ）,克隆于ＰＬＰｒｏｍｏｔｅｒ控制下的含有修饰型ｃＩｔｓ８５７基因的表达载体中,     

一个新的水稻MADS—box基因的克隆及表达分析

根据ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因保守区结构,设计简并性引物,利用３＇ＲＡＣＥ从水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）中克隆了１个新的水稻ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因的ｃＤＮＡ片段,同时利用５＆ＲＡＣＥ获得了全长ｃＤｎＡ命名为ＦＤＲＭＡＤＳＳ。序列分析表明,该ｃＤＮＡ全长１４０６ｂｐ,开放阅读框共编码２３３个到,具有典型的植物ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因的结构。推测的氨基酸序列与拟南芥的ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因,ＡＧＬ１４同     

BRCA1基因结构及其在乳腺癌中的表达

利用ＭＰＣＲ技术从乳腺组织分离到抑癌基因ＢＲＣＡ１的ｃＤＮＡ片段,将此９１４ｂｐ的片段克隆进质粒ｐＵＣ１１８,并经全序列测定证实。序列分析表明,ＢＲＣＡＩｃＤＮＡ编码的肽链ＮＮ２－末端有一锌指结构,抑癌基因ＢＲＣＡＩ的产物可能是ＤＮＡ结合蛋白,ｃＤＮＡ序列存在两个变异位点：一个是第４０９位的Ｃ→Ａ（Ａｓｐ→Ｇｌｕ）：另一个是第８７９位的Ａ→Ｔ（ＭＩａ同义突变）。以该片段为探针,检测６例乳腺癌组织中ＢＲＣＡＩｍＩＭＡ表达,一例表达明显下降,一例没检测到表达的ｍＩＭＡ产物,说明一些乳腺癌组织的ＢＲＣＡ１基因转录水平降低     

人骨形态发生蛋白—7全长cDNA的克隆及序列测定

从人胎儿肾中提取总ＲＮＡ,反转录得ｃＤＮＡ,ＰＣＲ扩增获得１．３ｋｂ的骨形态发生蛋白－７（ＢＭＰ－７）的全长ｃＤＮＡ。克隆的ＢＭＰ－７基因编码的氨基酸序列与献报道相同。     

中国人β神经生长因子前体基因的克隆及其序列分析

从正常人外周血白细胞中提取基因组ＤＮＡ,用ＰＣＲ扩增神经生长因子（ＮＧＦ）β亚基前体的全长编码区序列,将其克隆到Ｔ－ｖｅｃｔｏｒ（原始质粒为ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（＋））上,取两个独立的克隆采用自动测序仪进行双链ＤＮＡ双向测序,结果表明：两个克隆的序列完全相同,该序列与国外报道的ＮＧＦ序列有一个碱基的差别,从而导致ＮＧＦ前导肽中一个氨基酸的改变,而成熟的ＮＧＦ序列没有改变。     

一种与Calpastatin具有部分同源结构的人精子膜蛋白的发现与研究

在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为ＢＳ－１７。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达库中克隆了编码ＢＳ－１７的ｃＤＮＡ片段。序列分析表明ＢＳ－１７ｃＤＮＡ片段长７９１ｂｐ,开放阅读框架５５８ｂｐ,可编码１８６个氨基酸。经数据库检索,该ｃＤＮＡ片段与人Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ（Ｃａ￣（２＋）依赖的半胱氨酸蛋白酶ｃａｌｐａｉｎ抑制剂）基因３’端顺序具有９９．７％的同源,与Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ蛋白质羧基末端同源性为９９．５％。用ｃＲＮＡ进行组织原位杂交结果表明,ＢＳ－１７基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。     

47个早期人胚胎低丰度表达基因ESTs筛选及结果分析

构建高质量ｃＤＮＡ文库在基因克隆、ｍＲＮＡ差异展示、表达序列标签测序和基因定位等研究中具有十分重要的作用。为了从早期胚胎中分离人类新基因,构建了受精后３周龄的人ｃＤＮＡ文库,用标记的一链ｃＤＮＡ探针对该文库的６５０８个克隆子进行菌落原位杂交,得到１６７７个无任何杂交信号的低丰度表达克隆子,从中随机挑选了４７个进行５′端部分测序,将测序结果与三大基因库进行序列同源性比较,发现１８个克隆（３８．３％）