转基因猪外源基因染色体定位的研究

转基因猪外源基因染色体定位的研究ＥＸＯＧＥＮＯＵＳＧＥＮＥＬＯＣＡＬＩＺＡＴＩＯＮＯＮＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳＯＦＴＲＡＮＳＧＥＮＩＣＰＩＧ关键词基因定位染色体原位杂交转基因猪ＫｅｙｗｏｒｄｓＧｅｎｅＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ,Ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄ...     

转基因猪染色体原位杂交外源生长激素基因定位

近些年来随着原位杂交技术的不断改进,该技术已广泛用于染色体的基因定位。非放射性标记探针的应用使基因定位变得更加简单易行,从而有可能对动物的转基因进行定位研究。本文首次采用胶体金标记药盒（Anti-digoxigenin-gold)和银加强试剂（Silver enhance-ment reagents)的非同位素原位杂交技术对转基因猪外基因进行了定位研究。如Fig.1所示：表达质粒pSMTPGH含有载体pUC19,羊启动子MT011和猪生长激素PGH基因。选5头带有pSMTPGH的转基因猪,分别制备含有染色体DNA的杂交膜。用BglII和Smai对pSMTPGH进行完全酶切,收集0．9kb片段作为探针,以dig-11-dUTP进行标记。探针与DNA杂交后,用光学显微镜检查。选择分散良好、显影银颗粒清楚的玻片进行摄影记录（Fig.2)。对染色体上的显影银颗粒进行统计分析,参照家猪的染色体标准带型,确定外源PGH基因整合位点。Fig.3为4104号转基因猪染色体上的银颗粒分布情况。对5头转基因猪外源PGH基因定位的结果见Table1。探针的合理设计是外源基因定位研究成功的关键。本实验所用探针必须地与外源PGH基因杂交,而不受内源PGH基因的影响。我们设计的探针符合这一要求。采用dig11－dUTP标记探针,抗体金显色,银加强试剂放大杂交信号,在光学显微镜下可以直接观察杂交位点处的显影银颗粒,但于对实验进行统计分析。估计数据表明：转基因猪的外源PGH基因随机整合在所有染色体上,但在13号染色体上的机率略高。     

转pGH基因猪外源基因染色体定位研究

应用地高辛标记探针对转pGH基因(猪生长激素基因)猪染色体进行原位杂交,经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明,转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异,但对个体而言,外源基因总是集中分布于某一特定的染色体上。本研究将为探究外源基因整合位点与其表达效率的关系及今后定点整合的研究提供理论指导。     

辐射杂种细胞系技术在基因定位中的应用

利用辐射杂种细胞系 (Radiationhybrid ,简称RH)技术定位 2 6个所克隆的与造血调控有关的新基因 ,其中 2 3个定位明确 ,3个无法定位 .研究证明辐射杂种细胞系技术具有快速、精确、简便、可重复性等优点 ,是基因定位研究中一强有力的技术 .     

运用PRINS和体细胞杂种克隆板对猪新微卫星的定位

In this study, two new microsatellites HAU02 and HAU06, which are screened and cloned. HUA02 and HAU06 are repectively mapped in lq23-27 and 6q11-21 by means of PRINS (primed in situ labeling) and somatic cell hybrid (SCH) panel techniques, we discussed their advantage and disadvantage in gene mapping. These two means provide us more techniques in gene mapping, and the locations of these new microsatellites accumulate more resource for Porcine Physical Map.     

用原位杂交法定位猪乳铁蛋白基因于染色体2q12

本研究以非放射性标记的猪乳铁蛋白(Porcine Lactoferrin简称PLF)cDNA 为探针,通过染色体原位杂交法,对PLF基因进行了染色体定位。实验中采用金胶抗体技术并结合使用银增强系统,提高了方法的灵敏度。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行统计学分析。52%(26/50)的分裂相在第2号染色体具银粒分布,实验结果表明：PLF基因定位于猪2号染色体2q¹²区域。     

定位猪肌红蛋白基因于染色体5p15—pter

利用荧光染色体原位杂交技术,以含有猪肌红蛋白基因的粘粒ＤＮＡ为探针,分析了猪肌红蛋白基因在染色体上的物理位置。从１０５个中期染色体分裂相的杂交结果推断,肌红蛋白基因位于染色体５ｐ１５～ｔｅｒ。就现有的知识范围,这个基因是第一次在家畜中被物理定位     

基因在染色体上的定位

概述了染色体的发现和基因在染色体上定位的荧光原位杂交技术,放射杂交体法,重叠群拼接和染色体步移及基因定位克隆的常用方法以及基因定位的应用。     

人类生殖相关新基因的定位和组织表达

基因定位对研究基因之间以及基因与疾病之间的相互关系具有重要意义。应用辐射杂种细胞系技术（RH）对我们克隆的人类新基因HBRP（Human BSP-Related Protein）进行了染色体定位,结果将该基因定位于19q13.2～13.3,同时应用生物信息学方法在人类基因组重叠片段数据库进行该基因的定位,结果相吻合。研究证明,RH技术具有快速、精确、简便等优点,是基因定位研究中一强有力的技术。同时通过RT-PCR方法研究了HBRP基因在人体各组织中的表达分布,结果显示该基因在睾丸、肠、肾、肝、脾、胃、胰腺组织有较高的表达,而在检测的脑、肺、骨骼肌、心肌组织中表达较弱。 Abstract:Gene localization is significant in elucidating the interaction between genes,gene and diseases.Using radiation hybrid (RH) technique,we cloned and localized a novel gene,designated human BSP-related protein (HBRP) on 19q13.2～13.3,in line with its localization in data bank of overlapping fragment of human genome through bioinformatics method.It is suggested RH is rapid,precise,simple and powerful in gene localization.In addition,we detected the expression and distribution of HBRP in human tissues by RT-PCR.The results showed HBRP was highly expressed in intestine,kidney,liver,spleen,stomach and pancreas,whereas lowly in brain,lung,muscle and heart.     

两种泥鳅中PdSox8和PdSox9基因的染色体定位

应用染色体原位杂交技术,以地高辛标记的大鳞副泥鳅ＰｄＳｏｘ８和ＰｄＳｏｘ９基因片段为探针,研究了二者在泥鳅和大鳞副泥鳅染色体组中的定位。结果表明,在大鳞副泥鳅中ＰｄＳｏｘ８、ＰｄＳｏｘ９分别于端部着丝粒染色体第４和第２号即１４和１２染色体上,信号位点距着丝粒的相对距离分别为４０．２％和６７．５％,在泥鳅中,则分别位于ｔ９、ｔ６上,信息位点距着丝粒的相对蹁分别为５８．３％和３０．８％。     

运用PRINS和体细胞杂种克隆板对猪新微卫星的定位

本研究采用引物原位DNA合成PRINS)技术,结合体细胞杂种克隆板,将新克隆的猪微卫星HAU02和HAU06定位于1q23-27、6q11-21.并对这两种基因定位方法的优缺点和应用进行了比较和讨论.这对于我国进行猪基因定位工作开展提供了思路;同时,新微卫星的定位为建立猪染色体物理图谱积累了有益的资料.     

浅谈基因定位的方法

归纳并介绍了基因定位的4种方法,这些方法在中学生物学教学中是经常涉及的。     

人基因组连锁分析和基因定位

连锁分析是确定基因之间连锁关系的统计学方法,是目前进行基因定位的重要手段,ＬＯＤ法是最为常用的有效的连锁分析的方法,本文连锁分析原理,方法和应用成果及前瞻等三方面进行了介绍。     

用原位杂交技术定位甲状旁腺素基因于猪染色体14q25—q28

本文报告了以氚标记的人甲状旁腺素ＤＮＡ片段为探针,用原位杂交法将此基因定于猪染色体１４ｑ２５－ｑ２８的实验结果。此外本文还对相关问题进行了讨论     

草鱼的βHCG基因同类物及其染色体定位

本研究以~(?)s标记的人类绒毛膜促性腺激素(humgn chorionic gonadotropin)β链(βHCG)的克隆基因(cDNA)为探针,分別与人类、草鱼(Cteaopharynogodon idellus)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的总DNA进行点杂交,以~3H标记的同一探针与草鱼中期染色体作原位杂交,结果表明:草鱼基因组中存在βHCG基因的同类物,这一同类物的基因座位在草鱼m组一染色体(可能是第4号染色体)一个臂的末端。本文对所得结果的意义进行了讨论。     

猪的肉质性状基因定位研究进展

随着生活水平的提高,猪肉的肉质问题已引起消费者和生产者的重视。遗传 因素是改善肉质品质的关键。对猪的肉质性状进行数量性状位点(QTL)定位是当前国际畜禽遗传育种的一个热点。本文较全面地介绍了有关肉质基因定位的情况,包括基本明确的主效基因:氟烷基因和酸肉基因;肌内脂肪的统计分析、候选基因及基因扫描定位结果:以及肌纤维、嫩度、多汁性、失水率、pH值和肉色的定位。同时论讨了肉质检验和基因定位面临的问题。 Abstract:People tend to be interested in meat quality when the standand of living has been increased.Location of quantitative trait loci(QTL)affecting meat quality were performed in many countries.The objective of this review is to provide a detailed introduction of meat quality mapping in pig.It included halothane gene,acid meat gene,intramuscular fat,firmness,fruice,drop loss,pH value and meat color.It also discussed the problems of meat quality testing and QTL mapping.     

苜蓿核糖体基因物理定位及染色体荧光分带

利用核糖体基因为探针对,二倍体和四倍体苜蓿(Medicago sativa)进行原位杂交,结果表明,45s在四倍体、二倍体种中总是以单位点位于核仁组织区,5s则有2～3个位点;以二倍体种的基因组DNA为探针的原位杂交表明,蓝花苜蓿(M.coerulea)和黄花苜蓿(M.falcata)均能与四倍体染色体进行杂交,仅杂交信号强弱的染色体数目有差别;荧光染料DAPI使苜蓿的染色体显示带纹,蓝花苜蓿的DAPI带与C-带基本一致.文章对四倍体苜蓿的可能来源进行了讨论.