S-腺苷-L-蛋氨酸高密度发酵工艺优化

利用酿酒酵母在5L发酵罐高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)后期存在稳定性差的问题,本研究考察了在补糖中添加磷酸氢二铵、谷氨酸钠、三磷酸腺苷二钠来提高酿酒酵母发酵后期的稳定性。通过4批5L发酵罐高密度流加发酵实验研究发现:在发酵34h左右,菌体干重超过100g/L后,开始添加50克L-蛋氨酸,并在补糖中加入10g/L三磷酸腺苷二钠,发酵65.7h,最高生物量干重达到180g/L,SAM产量达到17.1g/L。     

pH对S-腺苷-L-蛋氨酸发酵的影响

研究了不同pH控制方式对S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)发酵过程及产量的影响。通过对发酵过程中不控制pH、控制恒定pH、两阶段控制pH和三阶段控制pH实验,研究了不同条件下对菌体干重、葡萄糖代谢和SAM产量的影响。控制合适的pH有利于菌体生长与SAM的生物合成,菌体生长最适pH为6.0,SAM转化最适pH为6.5,采用三阶段控制pH,使SAM产量比不控制pH提高了133%,比控制pH6.5提高了18.6%,比两阶段控制pH提高了10%。     

补加前体L-蛋氨酸对高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸的影响

将高密度发酵技术成功应用于S-腺苷-L-蛋氨酸的生产。考察了补加前体L-蛋氨酸的量以及补加策略对酿酒酵母G14发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸的影响。实验发现补加前体L-蛋氨酸能明显促进S-腺苷-L-蛋氨酸的积累。同时还发现不同的补加策略对菌体浓度以及S-腺苷-L-蛋氨酸的产量和浓度有不同的影响。确定了补加L-蛋氨酸不应低于0.7g/10g菌体干重。比较了五种不同的补加前体L-蛋氨酸的方式。结果表明在菌体干重达到高密度的情况下(120g/L)补加前体L-蛋氨酸进行转化生产S-腺苷-L-蛋氨酸能达到比较好的效果一次性补加9g L-蛋氨酸,SAM的积累量在补加后的18h达到最高,为4.31g/L;采取流加方式补加L-蛋氨酸,流加速率为2g/h,共流加5h,流加结束28h后SAM达到最高积累量后者达到4.98g/L。两者最终的生物量均可达到130g/L以上。     

发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸培养条件的优化研究

考察了摇瓶发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸过程中碳源、氮源、无机盐和生长因子以及培养过程中补加L-蛋氨酸时间对S-腺苷-L-蛋氨酸的产量、含量及生物量的影响。并通过均匀实验设计对培养基配方进行优化,在30℃、180 r/m in的培养条件下,得到最后的培养基配方为:葡萄糖30g,酵母粉11g,(NH4)2SO412g,K2HPO4.3H2O 5g,KH2PO410g,MnSO4.H2O 0.09g,ZnSO4.7H2O 0.14g,MgC l20.5g,CaC l20.3g,CuSO40.005g,自来水定容至1L。摇瓶中优化后的S-腺苷-L-蛋氨酸产量可以达到0.9g/L,比优化前产量提高了30%。采用优化后的培养基和培养条件在5L发酵罐中间歇培养,24h后一次性补加24g/L葡萄糖和1.0g/L L-蛋氨酸,继续培养24h后产量可达2.66g/L,生物量23.4g/L。     

发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸培养条件的优化研究*

考察了摇瓶发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸过程中碳源、氮源、无机盐和生长因子以及培养过程中补加L-蛋氨酸时间对S-腺苷-L-蛋氨酸的产量、含量及生物量的影响。并通过均匀实验设计对培养基配方进行优化,在30℃、180 r/m in的培养条件下,得到最后的培养基配方为:葡萄糖30g,酵母粉11g,(NH₄)₂SO₄12g,K₂HPO₄.3H₂O 5g,KH₂PO     

S-腺苷蛋氨酸研究进展

S-腺苷蛋氨酸(SAM)是生物体内重要的中间代谢物质,参与多种生化反应．重点介绍了 S-腺苷蛋氨酸的制备和稳定性研究,同时综述了其生理功能、提取纯化和分析检测及临床应用．     

S-腺苷酰L-甲硫氨酸 (SAM)对 HL-60细胞 DNA甲基化酶活力和甲基化水平的影响(英文)

 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 .说明细胞基因组甲基化水平升高并不是胞内 DNA甲基化酶催化能力改变的结果 ,而是由于 SAM进入细胞提供过量甲基造成的 .     

热水提取酿酒酵母中S-腺苷-L-甲硫氨酸的研究

研究了采用热水法直接提取酿酒酵母胞内产物S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）北京,并且通过实验对影响SAM抽提的5个条件：抽提温度、抽提时间、热水用量、搅拌转速、硫酸用量等进行了优化。得出的最佳实验条件为：温度70℃、每30g湿菌体加入热水100mL、硫酸浓度0．25mol／L、搅拌转速160r／min,此时SAM的抽提率可达91．5％。与其他方法相比,该方法耗时少、仪器简单、抽提液中S-腺苷-L-甲硫氨酸质量浓度高、经济且无污染。     

发酵法生产S-腺苷蛋氨酸前体蛋氨酸补加策略

利用酿酒酵母菌株高密度发酵法生产S-腺苷蛋氨酸关键的影响因素之一是前体L-蛋氨酸的补加策略.本研究采用一支经过常规诱变处理的S-腺苷蛋氨酸优势积累菌株酿酒酵母SAM0801,通过5 L发酵罐高密度发酵实验研究,考察了6种补加策略,最终确定了L-蛋氨酸的加入时机为30h左右,当茵体干重达到100g/L时,补加量为每罐40gL-蛋氨酸,发酵58 h左右达到最高生物量干重168 g/L,产量14.48 g/L.     

HPLC-UV法定量测定发酵液中的S-腺苷-L-甲硫氨酸

本文采用高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）定量测定发酵液中S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的含量。结果表明,S-腺苷-L-甲硫氨酸浓度在0.1~1.0g/L时,其峰面积（Y）与相应的浓度（X）呈线性关系,线性方程为Y=13.937X－0.1949,相关系数为0.9969。S-腺苷-L-甲硫氨酸的平均回收率为99.89~101.7%,相对标准偏差为0.48~1.36%。该方法精密度、准确度好,稳定性高,能简便、快速、准确地测定发酵液中S-腺苷-L-甲硫氨酸的含量。     

L-蛋氨酸及甲醇浓度对毕赤酵母摇瓶发酵生产S-腺苷蛋氨酸的影响

利用甲醇传感器及高效液相色谱检测毕赤酵母摇瓶发酵过程的甲醇浓度及S-腺苷蛋氨酸(SAM)浓度,发现L-蛋氨酸浓度及甲醇浓度对毕赤酵母细胞生长及合成S-腺苷蛋氨酸具有影响,据此对摇瓶发酵过程的L-蛋氨酸浓度及甲醇浓度进行优化。优化结果表明:当L-蛋氨酸浓度为7.5 g/L时,最适于SAM积累,产量达到0.83 g/L;进而利用甲醇传感器对发酵过程的甲醇浓度进行检测及控制,考察不同甲醇浓度对SAM产量的影响,毕赤酵母产SAM的最佳甲醇浓度为15 g/L,在此浓度下SAM的产量达到1.41 g/L,比对照实验增加了21%。     

酵母细胞破碎方法对S-腺苷-L-蛋氨酸提取的影响

考察了不同细胞破碎方法对酵母释放S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)的影响及雷氏盐沉淀分离SAM的影响。结果表 明,用乙酸乙酯处理细胞,再利用0.35moL·L-1硫酸破壁可以使90%以上的SAM从酵母内释放出来,该方法对其它的干扰物 质释放量少,而且能较好地保持SAM的稳定性,有利于SAM的分离和纯化;采用雷氏盐对SAM进行沉淀分离,能有效保持 SAM的稳定性,简化了工艺流程,有利于降低生产成本。     

S-腺苷甲硫氨酸的研究进展

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是甲硫氨酸和三磷酸腺苷相结合的代谢物,广泛存在于动植物和微生物体内,参与40多种生化反应,主要作为三种代谢途径(转甲基、转硫基、转氨丙基)的前体,临床上被广泛用于治疗肝病、抑郁症、关节炎等。SAM的制备方法主要有化学合成法、酶促合成法、发酵法三种。化学合成的SAM是消旋体,需进行光学拆分,且存在产率低、原料L-高半胱氨酸价格昂贵和环境污染等问题。酶促合成法合成的SAM纯度高,但原料ATP成本太高。发酵法已成为目前生产SAM最常用的方法,欧洲利用发酵法生产SAM已实现了产业化,但国内的起步较晚,目前还处于实验室研究阶段。因此,应加强发酵法生产SAM的产业化关键技术研究。     

双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究

目的:对双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究进行初步探讨.方法:培养收获三种乳酸菌(双歧杆菌、乳杆菌、嗜热链球菌),并采用真空冷冻干燥技术进行处理,从而对干燥效果以及常温保存活性进行评价和分析.结果:三种乳酸菌的干燥菌粉活菌计数均大于1012个/g;凝乳试验显示次代菌种发酵时间明显低于第一代;混合发酵的凝乳中活菌计数均大于106个/ml,单一菌种发酵的凝乳中活菌计数超过1010个/ml;干燥菌种在37℃放置30 d后,活菌数仍可达108个/g以上.结论:双歧酸奶定量干燥菌种实验室研究结果令人满意,为开发双歧酸奶袋装式干燥菌种打下了基础.     

海藻糖载入血小板的研究

将不可渗透型的保护剂海藻糖有效地载入血小板内部是用冷冻干燥法保存血小板重要的第一步。研究血小板对海藻糖的载入量随外部海藻糖浓度、孵化时间、孵化温度改变的变化规律,发现在细胞外海藻糖浓度为50mmol/L、孵化温度37℃、孵化时间4h的条件下,血小板能有效地吸收海藻糖,细胞内海藻糖浓度达到15mmol/L以上。对孵化后的血小板进行形态观察、血液学分析和膜联蛋白(annexin)V结合活化分析,结果表明孵化后的血小板保持了正常血小板的形态和功能。     

灵芝孢子油微胶囊制备技术

灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中提取的具有一定药理活性的脂质成分。为提高灵芝孢子油稳定性,以大豆分离蛋白和麦芽糊精为壁材,采用喷雾干燥法和冷冻干燥法制备灵芝孢子油微胶囊。通过试验优化了制备工艺条件并比较了两者干燥方式制备微胶囊的理化性质。结果表明：最佳工艺为大豆分离蛋白和麦芽糊精质量比1:1、固形物含量20%、均质压力30MPa、壁材芯材质量比4:1。两种干燥方式微胶囊流动性、溶解性均较好,差异不显著。但两种微胶囊形态差异较大,喷雾干燥微胶囊整体呈球状、表面紧密无裂缝有凹陷,包埋率为90.84%;冷冻干燥微胶囊结构疏松呈片状,表面多孔。因此喷雾干燥法更适合包埋灵芝孢子油。     

刺梨活性冻干粉冷冻干燥工艺研究

研究了刺梨汁的真空冷冻干燥工艺,得到其冻干曲线,测定了刺梨汁的共融点,确定经济合理的装料量和工艺参数.根据本研究工艺参数真空冷冻干燥刺梨汁,较好的保持了SOD的活性.     

Preparation and application of freeze-dried platelets

Clinical platelet infusion is primarily used to prevent or stop bleeding, but can also have a role in treating infections or promoting wound healing. The demand for platelets has increased in recent years. However, as platelets can only be stored for short periods, there is a substantial loss due to the products reaching their expiry date. Platelet lyophilization is a particularly valuable and important research field. The purpose of studying the freeze-drying preservation of platelets is to realize the long-term preservation of platelets at room temperature. It is very possible to prepare qualified freeze-dried platelets. However, there are still problems that have not been solved in the process of platelet lyophilization. This review mainly summarizes research progress in the preparation and application of freeze-dried platelets.     

A New Series of S-Adenosyl-L-Methionine Synthetase Inhibitors

Abstract

A new series of epithio and epoxy amino acid analogues of L-methionine or L-methoxinine were examined as potential inhibitors of the enzyme S-adenosylmethionine (AdoMet) syn-thetase. The kinetic behaviour of these compounds was studied using recombinant rat liver S-adenosyl-L-methionine sythetase (α-isoform) fractionated from E. coli, transformed with the plasmid pSSRL-T7N. All the compounds tested were competitive inhibitors with respect to L-methionine and the (2S, 4S)-2-amino-4,5-epoxy pentanoic acid was found to be a very potent inhibitor of the enzyme compared to those already reported for AdoMet synthetase from other mammalian tissues.     

Pituitary Secretory Granule Topography: Influence of Different Electron Microscopic Preparation Procedures on the Surface of Epon Sections

Human, rat and mouse pituitary tissues have been examined electron microscopically in transmission (TEM), scanning-transmission (STEM) and scanning (SEM) modes for the surface appearance of the secretory granules in tissue sections. Cryofixed and cryosectioned tissue showed only slightly protruding granule profiles which had a smooth surface. Cryofixed, freeze-dried and Epon embedded pituitaries, on the other hand, demonstrated swollen and furrowed surfaces over the granules after contact with water. This topography could also be seen after glutaraldehyde fixation but less after post-fixation in OsO₄. The surface alterations in the sections of pituitary secretory granules are thought to be due to differences in the homogeneity of the resin infiltration, leaving resin-free openings where water can enter. It also seems probable that the Epon resin is more influenced by water than has been previously assumed, based on the findings of efficient elimination of osmium from the granules after incubation of tissue sections in water for only 10 min.