脱氧核酶研究进展

使用体外分子进化技术,从一个人工合成的随机多核苷酸单链DNA库中筛选出具有酶活性的DNA分子,称为脱氧核酶. 目前已经筛选出具有RNA切割作用、DNA切割作用、金属螯合作用和过氧化物酶活性、DNA激酶活性以及DNA连接酶活性等多种催化功能的脱氧核酶. 特别是脱氧核酶10～23,无论在体外应用于RNA限制性内切酶,还是在生物系统内作为RNA水平上的基因失活剂,都具有很好的应用前景.     

高温胁迫对‘黄冠’、‘翠玉’梨耐热生理指标及相关基因表达的影响

为探讨高温胁迫对梨树的影响,对2年生‘黄冠’(Pyrus pyrifolia‘Cuiguan’)、‘翠玉’(P.bretschneideri×P.pyrifolia)盆栽苗胁迫后叶片的抗氧化物质、抗氧化酶、渗透物质和激素的变化进行了测定,利用q RT-PCR分析了叶片中抗性基因的表达。结果表明,在高温胁迫下,梨树叶片的叶绿素含量明显下降,而MDA含量则持续上升;梨叶片中的POD和CAT活性总体呈下降趋势,但‘黄冠’的POD和CAT活性均高于‘翠玉’;PRO含量随胁迫时间延长逐渐增加;ASA含量表现出先上升后下降,且‘黄冠’的ASA含量高于‘翠玉’;IAA和ABA含量都随胁迫时间的延长呈下降趋势,但‘黄冠’的IAA和ABA含量比‘翠玉’高。q RT-PCR结果表明,叶片中相关基因的表达量与对应的ASA、IAA和ABA含量变化趋势基本一致。因此,‘黄冠’比‘翠玉’抗高温性能强,且高温处理第4天为‘黄冠’和‘翠玉’梨的生理变化转折点。     

催化RNA的结构与功能

在核酶被发现以前,RNA就因为可以像蛋白质一样折叠成高度有序的结构而被预测可能具有催化的功能.该猜想在20世纪80年代得到了证明,四膜虫的Ⅰ型内含子RNA与负责tRNA成熟的核糖核酸酶RNaseP的RNA组分被发现具有催化功能.近年来,在核酶的结构和功能研究方面取得了很大进展,包括核糖体在内的多个核酶的高分辨率晶体结构被解析出来.本文介绍了这方面的最新研究成果.     

适体酶的筛选及应用

适体酶也称为别构效应核酶或别构效应脱氧核酶,是一种新的人工合成酶,它兼具适体的靶物质特异性结合与核酶或脱氧核酶的催化活性优点。这种酶是从大量随机序列库中针对各种效应分子筛选获得的目的酶。适体酶为效应分子的定量分析提供了新的思路。适体酶不仅在基因组学和蛋白质组学研究中得到应用,而且在生物传感器和DNA分子逻辑研究中也具有潜在的应用前景。     

核酶设计、合成与克隆的一种新方法

介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶半切点,一步直接将核酶模板连接、聚合、克隆到体外转录载体上,大大简化了以往核酶克隆的繁琐操作,省时、省力,克隆效率也较高.     

桉树木栓形成层脱落期间抗氧化物酶活性与DNA动态分析

以桉树品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层为材料,比较分析了其从形成到脱落期间,3种抗氧化物酶(POD、SOD、APX)和LOX的活性,以及叶绿素、MDA、H2O2和DNA含量的动态变化.结果显示:随着2个品种木栓形成层衰老的加剧,叶绿素的含量均下降,但MDA含量、H2O2含量和LOX活力均增加.品种‘3229’木栓形成层成熟期的SOD活性显著高于形成期和脱落期,但形成期与脱落期的酶活性却无显著差异;品种‘U6’木栓形成层成熟期SOD的活性也为最高,但各时期间的SOD活性差异不显著.品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层从形成期到成熟期APX活性均呈显著增加趋势,但成熟期后活性均又呈下降趋势.品种‘3229’木栓形成层的POD活性在成熟期到脱落期期间显著增加,而品种‘U6’却在形成期到成熟期显著增加.两品种DNA的动态分析电泳结果表明,桉树木栓形成层的脱落很可能包括细胞程序化死亡过程(PCD).     

核酶研究的进展

核酶作为一种特异性抑制转录后基因表达的遗传操作工具,已在基因治疗和后基因组研究领域显示出其巨大的应用价值。目前,人们正致力于提高核酶在体内的活性,以及寻找新的更有价值的核酶结构。本文就在核酶的设计目标剪切位点的选择促进核酶剪切活性的额外因于用体外筛选方法获得新型核酶、在哺乳动物模型中的应用等方面的进展以及核酶研究中应注意的问题作一介绍。     

一种快速非同位素测定2‘,5’—寡聚腺苷酸合成酶活性的方法

介绍一种新的非同位素测定２‘,５’－寡聚苷酸合成酶（２‘,５’－ＯＡＳＥ）活性的方法,反应液经已糖激酶处理,点样于ＰＥＩ－纤维素薄层层析板上,经甲醇浸泡与预层析和在０．７５ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ２（ＰＨ３．５）缓冲液中的层析可使ＡＤＰ和２‘,５’－Ａｎ分离开,系统偏差和２‘,５’－ＯＡＳＥ测活分析表明,本方法可用于粗酶液及部分纯化酶液的２‘,５’－ＯＡＳＥ活性测定,并可用于临床生化分析。     

特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒负链的多价核酶的构建和体外活性测定

根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成并克隆了特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)负链RNA不同区域位点的双价和三价锤头型核酶基因。通过体外转录 ,将PSTVd负链RNA分别与双价和三价核酶混合 ,37℃温育 2h。结果表明 ,双价核酶和三价核酶均表现出较高的切割活性 ,其中双价核酶处理的切割产物的大小与理论值相符合。三价核酶虽表现出较高的切割活性 ,但只是其中一价核酶在起作用。讨论了二价和三价核酶的应用前景。