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本文利用人αD型干扰素基因信号多肽编码区内自身的TGATG序列,在大肠杆菌中有效地表达非融合的人αD型干扰素。其根据是:第一,纯化干扰素的分子量为19.5k,而不是27k的融合蛋白;第二,干扰素活性峰的分布集中在19.5k附近;第三,干扰素抗体的吸收峰与其活性峰相一致;第四,纯化干扰素N端序列分析证明DNA水平设计的准确性。同时,还证明大肠杆菌能够识别并加工人αD型干扰素信号多肽。 在探讨TGATG序列对下游基因表达的影响时发现,“翻译联结”(ATG-TGATG)方式起始的基因表达水平比一般ATG起始方式高约10倍;而在ATG-TGATG起始方式中,第一和第二种读码框架之间的距离,即使相差27个氨基酸编码序列,后一种基因的表达水平也无明显差异。 相似文献
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人α—干扰素基因在昆虫细胞中的表达 总被引:2,自引:1,他引:2
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采用PCR方法改变了表达构建物pRL-rhTNF中的结构,即去掉rhTNFαcDNA3'端非翻译区序列110bp(命名为pRL-rhTNFα2),转入大肠杆菌后,观察数个阳性转化子的表达情况,并与原型pRL-rhTNFα的表达进行比较。结果表明,去掉3'端非翻译区的pRL-rhTNFα2能稳定表达rhTNFα,其发酵及纯化产品的生物学特征均等同于原型的,且其表达量比原型的有提高,提示3'端非翻译区序列对表达有影响。3'端非翻译区内存在一个相似于TA的重复序列——TTTA TTA七聚体。这可能是本研究中影响TNFα表达量的原因之一。 相似文献
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中国人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达 总被引:5,自引:0,他引:5
应用RT-PCR技术从中国人淋巴细胞mRNA反转录产物中克隆了IFN-γcDNA,序列分析证实了分子进化规律对IFN-γcDNA序列存在多态性的推论.在此基础上应用DNA重组技术,将去信号肽中国人IFN-γcDNA克隆到原核表达质粒pBV220 PRPL启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人IFN-γcDNA,其表达水平占全菌可溶性总蛋白的44.4%,初步复性后生物学活性测定结果表明γ-IFN表达量为0.45×107~2.34×107单位/L. 相似文献
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采用PCR方法改变了表达构建物pRL-rhTNF中的结构,即去掉rhTNFα cDNA 3’端非翻译区序列110bp(命名为pRL—rhTNα2),转人大肠杆菌后,观察数个阳性转化子的表达情况,并与原型pRL—rhTNFα的表达进行比较。结果表明,去掉3’端非翻译区的pRL—rhTNFα能稳定表达rhTNFα,其发酵及纯化产品的生物学特征均等同于原型的,且其表达量比原型的有提高.提示3'端非翻译区序列对表达有影响。3'端非翻译区内存在一个相似于 TA的重复序列——TTTA TTA七聚体。这可能是本研究中影响TNFα表达量的原因之一。 相似文献
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人α-型肿瘤坏死因子cDNA在大肠杆菌中的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
人α-型肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)可以在体内或体外特异地杀伤多种肿瘤细胞,并同时具有抗病毒感染及免疫调节活性,是一种非常有前途的抗肿瘤及抗病毒生物制剂。最近,国外用基因工程技术将TNF-α基因克隆并在大肠杆菌及酵母细胞中表达成功。目前,人们正致力于提高其在大肠杆菌中表达产量的研究。据此,我们构建了P_L启动子控制的TNF-α cDNA表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高水平表达。 相似文献
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从p8218、pUR-222、pBV-114及pKC-30组建杂交质粒pBV一867,使人aD型干扰素基因在PL启动于控制下在大肠杆菌中能够直接表达。每升菌液的干扰素平均产量为0.8 x107单位。 相似文献
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干扰素(IFN)是某些生物体细胞抗病毒感染的一类蛋白质,可用于治疗病毒性疾病和某些癌症。但由人血液获得的干扰素其量极微,目前已能通过基因工程大量生产。编码干扰素的基因已能在大肠杆菌~[1,3]、醇母~[4,5]和哺乳动物细胞表达。~[6]但仍需对工程菌的表达规律作进一步研究,特别要弄清各种因素对被克隆的外源基因表达的影响。 相似文献
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人αA干扰素在克鲁氏乳酸酵母中的表达和分泌 总被引:2,自引:0,他引:2
pE1是由酵母天然质粒pKD1衍生出来的重组穿梭质粒,在克鲁氏乳酸酵母中具有高拷贝,高稳定性等特点。把人αA干扰素分泌表达单元克隆到pE1载体中,得到分泌型表达质粒pE-IFN1。pE-IFN1在克鲁氏乳酸酵母中相当稳定,在非选择性培养基中生长50世代后,大多数酵母细胞仍带有质粒。结果表明,分泌表达单元中的酿酒酵母α因子的分泌信号肽能被克鲁氏乳酸酵母的蛋白质分泌系统所识别,人αA干扰素被分泌到细胞外。在摇瓶培养条件下每升发酵液中含有1—2毫克αA干扰素。 相似文献
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人血红蛋白α,β基因在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
从人外周血细胞中提取出RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)得到人血红蛋白的α和β基因片段,与pT7Blue质粒连接,然后将α、β基因克隆进pBV220原核表达载体中,采用Sanger双脱氧终止法测序的结果与文献报道一致。宿主菌经热诱导,在1.6×105处有特异的蛋白带表达,表达量占总菌体总蛋白的20%。 相似文献
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中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
应用RT-PCR技术从中国人淋巴细胞mRNA反转录产物中克隆了IFN-r-cDNA,序列分析证实了分子进化规律对IFN-rcDNA序列存在多态性的推论。在此基础上应用DNA重组技术,将去信号肽中国人IFN-r cDNA克隆到原核表达质粒pBV220 PRPL启动子下游,转化大肠杆菌DH5a,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人IFN-r cDNA,其表达水平占全菌可溶性总 相似文献
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β干扰素基因在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
通过Bal 31酶酶切及筛选从β干扰素基因组克隆中分离到成熟β干扰素基因,并组建了一个在Tac启动子控制下表达β干扰索基因的质粒。研究了不同诱导条件对β干扰素表达的影响。Β干扰素在大肠杆菌中表达的产量为10μ/l。 相似文献
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