利用原生质体融合研究凤尾菇中性菌株的交配反应

凤尾菇营养缺陷型突变型中性菌株与另一株营养缺陷型的正常交配型菌株进行了原生质体融合反应.融合子之间以及与亲本之间在菌落形态和菌丝生长速度上表现出了较大差异。融合子菌落角变的菌丝体从多核体转变为双核体,并且在菌丝体上产生了圆桶状的特殊结构而不是通常的锁状联合。初步观察表明这些结构似乎与细胞核的迁移有关.对融合子子实体的担孢子进行了遗传分析,结果确证子实体是由两个亲本菌株的融合子产生,同时也表明要对中性菌株交配反应中基因重组进行深入分析还需要进行更多的研究。     

凤尾菇和香菇原生质体非对称融合

The protoplasts of auxotrophic mutant monokaryon of Pleurotus. Sajor-caju was used as recipient parenL the protoplasts of wild dikareon of Lentinus edodes were heat-inactivated and used as nuclear donor parent. The fusants of two parents showed some their individual characteristics and physiological difference between themselves. Thrugh protoplast re-isolation and reversion of one randomly selective fusant, two parents had been recovered and the donor parent achieved some new physiological characteristics su…     

凤尾菇和盖囊侧耳原生质体非对称融合的研究

盖囊侧耳的双核本原生质体经过灭活处理作为供体与带有营养缺陷型标记的凤尾菇单核体原生质体受体融合,得以大量生长速度和菌落形态差交大的融合子,这些融合子主要显示了供体菌株的特性,数次转接和进行原生质体再分离后,有的融合子再生菌株恢复了供体亲本的遗传特性,同时获得了一些新的生理特证。结果表明原生质体非对称融合可以作为食用菌原生质体融合育种的一种有效方式。     

凤尾菇和裂褶菌原生质体非对称融合研究

具有双重营养缺陷型的裂褶菌单核体突变菌株的原生质体经过灭活处理后作为供体与同样带有营养缺陷型标记的凤尾菇单核体原生质体融合,得到大量生长速度和菌落形态差异较大的多核体和双核体融合子。这些融合子完全恢复了供体亲本双核体的遗传特性,同时获得了一些有意义值得继续探讨的新的生理特性,如菌丝体在木屑麸皮以及废棉培养料上生长速度较快,在平板培养基和木屑培养料上均较早较快地形成原基和子实体等。结果表明原生质体非对称融合是一种效率较高的融合方式,可以作为食用菌育种的一种有效途径。     

利用原生质体融合技术选育防治植物病虫害的基因重组菌株

本试验选用抗菌蛋白产生菌枯草芽孢杆菌(B.subtilis) TG26和晶体蛋白产生菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiesis subsp,pacifeus) AS1.904的营养缺陷型衍生株,在聚乙二醇的诱导下进行原生质体种间融合,获得了表现双亲遗传性状的种间融合菌株。融合率为7.52×10~6,融合子经传代10次,稳定率为19.5%。融合菌株的菌落和细胞形态与亲本株明显不同。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,融合菌株表达了亲本的抗菌蛋白和毒素蛋白。抑菌杀虫试验表明,融合重组菌株具有抑制多种植物病原菌和毒杀鳞翅目幼虫的能力。     

凤尾菇和盖囊侧耳原生质体非对称融合的研究

盖囊侧耳的双核体原生质体经过灭活处理作为供体与带有营养缺陷型标记的凤尾菇单核体原生质体受体融合,得到大量生长速度和菌落形态差异较大的融合子,这些融合子主要显示了供体菌株的特性,数次转接和进行原生质体再分离后,有的融合子再生菌株恢复了供体亲本的遗传特性,同时获得了一些新的生理特证。结果表明原生质体非对称融合可以作为食用菌原生质体融合育种的一种有效方式。     

以原生质体融合技术构建广谱抗噬菌体菌株

利用１５株不同品系的噬菌体作筛子筛选的噬菌体抗性自发突变株只对其相应的筛于噬菌体具抗性,为窄谱抗株。利用原生质体融合技术把北京棒杆菌７３３８与钝齿棒杆菌Ｔｓ－Ｌｉ进行融合得融合于ＺＧ８８,通过噬菌体吸附试验,血清学试验证明ＺＧ８８细胞表面结构发生了较大的改变,失去了噬菌体的吸附位点。因此ＺＧ８８是广谱稳定的噬菌体抗性菌株。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究Ⅲ．融合子的遗传分析

本文报道了用聚乙二醇(PEG)方法,将农抗5102产生菌的两株不同营养缺陷型突变体WNF-2-l-135(afg^-leu⁺)的原生质体和WNF-2-1-90(1eu-arg+)的原生质体进行融合,在再生培养基上再生细胞壁并获得稳定的原养型融合子。经测定,其中三个融合子(FR-001,FR—005和FR-008)在营养特性、菌体形态和培养特征等方面与两个亲本都有一定差别,在抗菌活性方面,FR-001菌杆和FR-005菌杆具有两个亲本菌株所能产生的三种抗生素,即5102-1号、5102-2号和5102-3号抗生素,FR-008菌株只能产生5102-1号和5102-2号抗生素,而不能产生5102-3号抗生素。融合子所产生的这些抗生素的活性大多比原始出发菌体和亲本要强。除此以外,三个融合子还都能产生两个亲本所没有的对酿酒酵母具有活性的抗生素,而且这种抗生素的性质,三个融合子也都各不相同。     

凤尾菇和裂褶菌原生质体非对称融合研究

具有双重营养缺陷型的裂褶菌单核体突变菌株的原生质体经过灭活处理后作为供体与同样带有营养缺陷型标记的风尾菇单核体原生质体融合,得到大量生长速度和菌落形态差异较大的多核体和双核体融合子．这些融合子主要显示了供体菌株的特性,数次转接后,有的融合子从多核体转变成双核体,有的融合子完全恢复了供体亲本双核体的遗传特性,同时获得了一些有意义值得继续探讨的新的生理特性,如菌丝体在木屑 皮以及废棉培养料上生长速度较快,在平板培养基和木屑培养料上均较早较快地形成原基和子实体等．结果表明原生质体非对称融合是一种效率较高的融合方式,可以作为食用菌育种的一种有效途经．     

链霉菌菌株A与哈茨木霉T-23原生质体融合条件的研究

报道了链霉菌菌株和哈茨木霉菌株属问原生质体融合构建生防工程菌的前期研究成果,研究结果显示：链霉菌菌株A与哈茨木霉T-23分别以1000μg／ml庆大霉素和50～53℃热灭活120min作为遗传标记;融合系统采用聚乙二醇(PEG)作为促融剂,通过对PEG最佳分子量、浓度、处理时间的筛选,确立最佳融合技术系统,即内含0．05mol／L Ca^2 的35％ PEG6000,融合处理15min。所得融合子经过选择再生培养基培养后,在132株融合子中初步筛选出2株稳定的融合子。经孢子大小和DNA含量测定,确立一株为单倍重组体,另一株为杂合二倍体。     

原生质体融合构建直接利用淀粉产衣康酸菌株

采用衣康酸高产菌株栖土曲霉T-730的原生质体,与葡萄糖淀粉酶产生菌黑曲霉Ni-5k的原生质体进行融合处理.在以30%PEG6000为促融剂,30℃保温20min的融合条件下进行融合,所得异核体经诱导获得3株稳定的融合株(F3,F9,F11).以生淀粉为唯一碳源,对F3,F9,F11的发酵性能测定表明,F3在发酵过程中积累葡萄糖淀粉酶和衣康酸;对F3进行发酵条件初步探讨的结果表明,以10%生淀粉为碳源,连续发酵6d,F3的衣康酸产酸率达40.9mg/mL,对供给淀粉的转化率为40.9%.     

荧光标记香菇原生质体融合菌株的鉴定

以异硫氰基荧光素（FITC）标记和香菇单核L4菌株的原生质体和未经标记的香菇单核B14菌株的原生质体为亲本,在聚乙二醇（PEG）的促融下进行融合,选取一个带有荧光,另一个不带荧光的原生质体粘合对进行再生培养,通过对利用“锁状联合”筛选得到的菌株进行鉴定后表明：融合菌株为双核菌丝,与双亲产生明显拮抗,其酯酶同工酶及可溶性蛋白质凝胶电泳图谱分析表明融合菌株均与双亲有区别,经琼脂平板快速出菇及出菇实验证明融合菌株出菇早,产量有所提高。     

斑玉蕈不同交配型的原生质体单核菌株差异分析

对2个斑玉蕈菌株进行了原生质体分离与交配型鉴定,并对不同交配型单核体的代谢特性进行了研究。结果表明,2个斑玉蕈菌株均出现2种交配型,2种交配型比例不一致,且2个菌株的两种单核体的分离比例均不符合1∶1分离比,交配型比例上出现明显的偏差现象。2个菌株中,不同交配型单核菌株的菌丝形态有明显差别,代谢过程中的菌丝生物量及发酵液的pH、还原糖含量和电导率均存在差异,表明在这2个菌株中不同交配型单核菌株的菌丝形态及代谢特性与交配型因子相关。     

原生质体融合技术选育分解草酸乳酸菌菌株的研究

将具有草酸分解能力的乳双歧杆菌和具有耐氧特性的嗜酸乳杆菌进行原生质体融合,其最佳条件为:50%的PEG6000,融合温度30℃,融合时间为7 min,CaCl2浓度为0.02 mol/L,MgCl2浓度为0.5 mol/L,在此条件下融合率可达7.6%。从中筛选出同时具有耐氧特性和草酸分解能力的融合子,草酸分解率为13.4%。     

通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株

用苏云金杆菌以色列变种Bacillus thuuringiensis subsp.israelensis和苏云金杆菌库斯塔基变种Bacillus thuringuensis subsp.kurstaki HD-1进行了PEG诱导的原生质体融合实验,探讨了影响原生质体形的几个条件。用抗性标记对融合子进行了选择,在198株融合子中,有17株稳定传代10次以上。它们具有两个亲本菌株所具有的一些特性。在融合子中,BTI比HD-1稳定。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究比较了稳定融合子的晶体毒素成分,观察到了代表HD—l毒素蛋白和BTI毒素蛋白的带。杀虫试验结果表明,融合形成的杂种菌株具有毒杀文字孑孓和鳞翅目幼虫的能力。     

平菇与香菇属间原生质体融合的研究

通过分离和出菇试验,获得了纯化的平菇(Pleurotus sapidus)和香菇(Lentinus edodes)单孢系。用溶壁酶去细胞壁制备成原生质体。以PEG为融合诱导剂,诱导两者原生质体融合。1988年获得了可以出菇的融合子。这些融合子形成的子实体,从形态、生长习性和菌伞的颜色特征上都与双亲有明显的差异。大部分氨基酸含量介于双亲之间。同功酶分析也显示出融合子呈现与双亲不同的酶带。融合子出现的上述新性状,可能是平菇与香菇的原生质体基因重组的结果。