微生物的保存方法(续二)

<正> (11)冷冻干燥法: 1.冻干法的原理及适用范围 (1)冻干法的原理 冻干法的原理简单,即首先使微生物冻结,然后在负压下进行升华、除水。菌体的水分大部分被除掉之后,则细胞的生活反应事实上即将停止,从而得以长期保持其生活状态。冻干有各种方式,这里将包括水升华过程的干燥法统称冻干法。 做为除水的手段,冻干法是个缓和的方法,但对于敏感的生物细胞,如果不加以充分注意,大部分细菌都有可能因冻干处理而死亡。关于菌种保存,可能被认为只要有一点菌活存下来就行了,但这只能是在万不得已的情况下的说法,而要想保持菌株的性质不发生变化,就必须设法尽量使更多的细胞活存下来。特别脆弱的菌另当别论,一般说来都希望活存率能保持在10％以上。 (2)适用范围 冻干法适用于大多数细菌及放线菌,同时病毒、噬菌体、立克次体、霉菌、酵母等,大部分约可用此法保存。     

微生物的保存方法(续七)——病原性细菌的保存方法(兽医学领域)

一、前言 病原性细菌保存最重要的问题是保持该菌的生物学及免疫学的各种特性,尤其要保持其病原性不变。 保存兽医学领域的病原性细菌,与一般细菌相同,主要采用传种培养方法、冰冻法及冻干法;其它,如Stamp氏明胶片干燥法也可试用。 传种培养保存法具有按需要随时接种,供做试验的方便,但其缺点是可能在传种过     

Frankia内生菌冷冻真空干燥保藏的研究

冷冻真空干燥保藏法(或低压冻干法)已具有70年历史,是微生物学中常用的保藏技术。可用于保藏多种微生物,如病毒、细菌、酵母等。作者试用于Frankia菌的保藏,共保藏了分离自赤杨、木麻黄、沙棘、杨梅的Frankia纯培养46株,经一年半的保藏,无论在存活率和固氮酶活性上,均获得了很好的结果。     

蔗糖液在生物制片中的应用

从事生物学研究和教学工作,形态观察是十分重要的.就目前来说,微生物的形态观察主要以涂片镜检法较为快速简捷.无疑,一种好的微生物涂片方法,对于微生物的研究及微生物学的教学工作都是十分必要的.因此,做好微生物涂片这一基本工作,探讨微生物涂片的方法,是一项很重要的工作.我们在从事细菌细胞融合和教学工作中,对微生物涂片的方法进行了探索,发现在微生物涂片中,应用蔗糖液,效果很好.现介绍如下: (一)蔗糖液在一般微生物涂片中的应用 1.方法基本上与常规的微生物涂片方法相同,但不同的是在涂片前应先在清洁的载玻片上滴少许蔗糖液进行擦试;而后由原来加一滴无菌水改为滴加一滴蔗糖液(0.4M—0.6M);再涂菌. 2.优点经我们在不同菌种(细菌、放线菌、酵母菌等)上进行多次实验,发现这种方法具有(1)使载玻片清洁,在一定程度上减少一些印痕;(2)可增加透明度和清晰度,便于进行观察和显微摄影;(3)易使所涂样品分散开来,提高涂片的效果;(4)对革兰氏染色等     

鲜叶保存方法对茶树基因组DNA提取效果的影响

探讨一种简便有效的鲜叶保存方法,对克服茶树DNA研究中远距离采样的困难具有重要意义．为此,以槠叶齐品种的鲜梢为材料,分别采用-20℃、-70℃、硅胶脱水干燥3种方法保存样品,采用改进的CTAB法与SDS法分别对3种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行基因组DNA的提取与纯化,对所得DNA的质量进行多重检测的结果表明,硅胶脱水干燥法保存的样品与其他几种方法保存的样品一样,都提取获得了高质量的DNA,因此,硅胶脱水干燥法可作为远距离采样制备茶树DNA的一种较好的鲜叶保存方法,具有操作简单、经济实用、不受时空等条件限制的特点,该方法同样适用于其他植物．     

尿蛋白膜保存法与直接冻存法的成本效益分析

为了比较尿液蛋白PVDF膜富集保存法(尿膜)和尿液直接冻存法两种方法的优缺点。通过比较两种方法在时间、所占空间、费用、蛋白降解程度及大样本临床实践性方面的区别。发现在所占空间、电费方面及临床实践性方面尿膜保存法优于直接冻存法,而在时间及耗材花费方面直接冻存法优于尿膜保存法。因此尿蛋白的尿膜保存法比直接冻存法有更强的实际应用价值。     

保藏菌种的先进方法

目前保藏细菌的常用方法有:①根据不同菌种低温保藏,隔双周或隔月移种传代,②在很低的温度下。使微生物细胞快速冻结且保持完整,然后在真空下使水分升华达到干燥,即冻干保存。前种操作简     

扫描电子显微镜植物材料的一种化学干燥技术

扫描电镜新鲜生物材料的制备,一般都要经过干燥处理,其目的主要是使样品不产生收缩畸变,以使样品的形态结构保持在生活状态,如此获得的样品图像才自然真实。现代广为应用的扫描电镜生物样品的干燥方法是临界点干燥(CPD)法。另外还有莰烯干燥法、乙腈干燥法和叔丁醇干燥法等。Jemes(1983)应用化学试剂六甲基二硅胺烷(nexamthyl disilazane,简称 HMDS),分子式[(CH_3)_3Si]_2对昆虫组织进行干燥处理并     

土壤样品长期保存对微生物群落代谢活性和功能类群的影响

【目的】评估土壤长期保存(4个月)对土壤微生物群落代谢活性的影响。【方法】采用Biolog? EcoPlateTM生态板研究4 °C风干保存和?20 °C低温冻存的农田土壤和森林土壤中微生物群落的碳源利用模式。【结果】与新鲜土壤样品相比,长期保存的土壤样品的微生物群落对碳源的利用能力大大降低,其多样性、均匀度和Simpson指数均降低;风干保存和低温冻存两者对土壤微生物的碳源利用的影响没有显著差异;除风干保存的土壤样品中利用多聚物类的微生物类群的代谢活性外,两种保存方法显著降低微生物群落的代谢活性,降低幅度为54.5%–99.8%。【结论】长期保存土壤可能会导致对微生物群落信息的低估,土壤微生物代谢活性研究的最佳样品为新鲜 土壤。     

超低温保存植物种质资源的新途径——小滴玻璃化法

超低温保存是一种安全、有效的种质资源保存途径,可长期保存种质资源。小滴玻璃化法是在滴冻法和玻璃化法上基础上发展起来的用于植物种质资源保存的新技术。本文综述了该方法的技术概念、主要优点、基本程序、应用前景及国内外研究现状。     

药用植物艾纳香基因组DNA提取方法研究

以药用植物艾纳香为研究对象,以-20℃保存、4℃保存、室温自然干燥和硅胶干燥四种样品保存方式,并采用SDS法、CTAB法、SDS-CTAB法和改良CTAB法4种不同的基因组DNA提取方法进行了对比试验,以期建立艾纳香的较好的样品保存方法和基因组DNA提取方法。结果表明,-20℃保存是艾纳香的较理想的样品保存方式;改良CTAB法是艾纳香基因组DNA提取较适宜的方法,该方法提取的DNA经紫外检测,其A_(260)/A_(280)为1.8左右,明显优于SDS法(1.1～1.5)、CTAB法(1.2～1.5)和SDS-CTAB法(1.4～1.6),琼脂糖凝胶电泳、酶切检测和PCR扩增也得出了同样的结论。     

谷子胚性细胞系的超低温冰冻保存

超低温冰冻保存是保存生物材料的一种方法。目前禾本科植物原生质体培养的主要问题之一是胚性细胞系的状态不稳定。试验比较了影响谷子(Setaria italica(L.)Beauv)胚性细胞系超低温冰冻保存的因素如：不同的冰冻保护液组成,不同培养时间的胚性细胞系以及细胞系的恢复生长和原生质体培养。结果表明：本实验采用超低温冰冻保存方法不会影响胚性细胞系原生质体的培养特性,能够保持或提高原生质体培养的植板率。     

L-干燥法和冷冻真空干燥法保藏放线菌效果的比较

L-干燥法和冷冻真空干燥法保藏不同放线菌效果是不一致的。在低温5℃多数放线菌用L-干燥法保藏,无论是干燥后及保存11个月以后其成活率均比冷冻真空干燥法高,但L-干燥法对温度较敏感,在温度37℃保藏成活率有下降的趋势。而冷冻真空干燥法在短期内保藏受温度影响较小。两种方法使用三种保护剂:10%脱脂牛奶粉,3%谷氨酸钠,1%蛋白胨+10%蔗糖,其中以10%脱脂牛奶粉为最理想。因此,采用L-干燥法以10%脱脂牛奶粉为保护剂,在低温5℃长期保存放线菌是较理想的方法之一。两种方法三种保护剂保存11个月后对葡萄糖异构酶     

L-干燥法和冷冻真空干燥法保藏放线菌效果的比较

L-干燥法和冷冻真空干燥法保藏不同放线菌效果是不一致的。在低温5℃多数放线菌用L-干燥法保藏,无论是干燥后及保存11个月以后其成活率均比冷冻真空干燥法高,但L-干燥法对温度较敏感,在温度37℃保藏成活率有下降的趋势。而冷冻真空干燥法在短期内保藏受温度影响较小。两种方法使用三种保护剂:10%脱脂牛奶粉,3%谷氨酸钠,1%蛋白胨+10%蔗糖,其中以10%脱脂牛奶粉为最理想。因此,采用L-干燥法以10%脱脂牛奶粉为保护剂,在低温5℃长期保存放线菌是较理想的方法之一。两种方法三种保护剂保存11个月后对葡萄糖异构酶     

组织化学(续)

(五)冰冻干燥法的介紹 从组织化学的观点看来,用一般的固定及包埋方法是有許多不合适的地方。所以多年以来,許多学者采用了冰冻干燥法以期克服其中的一些缺点。最初在1890年,Altmann氏曾設計了一种方法,这种方法是先将组织冰冻。然后,在硫酸內真空低溫(-15℃)下,使组织脫水,他当时的目的是为了准备一种材料,以便于研究各种不同的固定方法和染色方法对于同一组织的效果如何。为了达到这个目的,他曾将冰冻干燥后     

微生物的保存方法(续三)

<正> 10.干燥 (1)冷凝器的冷却或干燥剂的准备 予冻结束后,立即转入减压干燥。此时,必须事先予冷冷凝器,以备收集冻结菌液的升华水分,例如采用图(一)所示的那种最简单的装置,双层简型冷凝器的内筒盛装乙醇或丙酮等有机溶媒,加足够量的干冰,则温度可降至大约-70～-80℃,升华水分则可凝结在夹层内的表面上。为保持冷凝器温度不升高,须及时添加干冰。最近有几家制造厂产销一种浸没式的挠性冷却棒,放入上述有机溶媒中,可使冷凝器降至-60～-100℃,而且无需中途补加,便于长时间运转。如有特殊用途,也可用液氮冷却冷凝器,但对于一般菌种保存,并无如此需要。     

平板凝胶简易快速干燥法

本文介绍一种简易凝胶快速干燥法,无需抽真空、恒温水浴和电炉等装置。制成的干胶无气泡、无皱褶,图谱清晰,可永久保存。用这种方法制作干胶,成品率高。即使凝胶本已有少许破裂,但在干燥过程中裂缝不会继续加深。如果操作过程中不小心使凝胶和玻璃纸之     

脑标本热甘油浸渍法

一般脑标本,多用瓶装液体保存,有时往往由于瓶口封闭不严,瓶内液体蒸发而降低质量。此外,液体保存的标本,使用时也不方便。因此,不少作者先后介绍了各种制作干标本的方法,企图弥补液体保存的缺陷。例如:Rack(1951)曾介绍过石蜡浸渍法;(1954)、横地千仞和大手裕(1957)等分别介绍过冰冻法;Kubik(1957)曾介绍过先用食盐福尔马林液固定,然后再用甘油浸泡的方法;Sakla(1959)还介绍了先用逐增浓度的福尔马林液固定,继之用酒精、丙酮、甘油混合液涂浸标本,然后晾干的方法。上述各种方法,各有利弊,如用石蜡浸渍法作出的标本,能够保持其体积不发生大的变化,但往往由于蜡液处理而使脑表面的结构不太明显;冰冻法制作的干标本往往体积收缩较剧。Kubik和Sakla介绍的方法比前两种好,做出的标本既能使体积变化不大,又能使表面结构清晰,但是,需要较长的时间才能得到令人满意的结果。因此,我们试用了热甘油浸渍法制作脑的干标     

人工瘤胃发酵饲料的简易保温方法

利用牛胃液中的多种微生物,在体外接种于粗料而调制成的一种喂猪的饲料,就叫做“牛胃液”发酵饲料。因为它是模仿牛瘤胃环境条件对饲料进行发酵,所以也叫“人工瘤胃”发酵饲料。这种发酵饲料,经瘤胃微生物(特别是纤维分解菌)的作用,能把饲料中一部分不能被猪利用的粗纤维分解,变为可被消化吸收     

光镊捕获的单个解冻人血红细胞的拉曼光谱研究

红细胞的冰冻与解冻的实施为血液的长期保存提供了有效的方法。在过去的几十年中,红细胞冻存有过数种方法,其中高甘油冻存法比较普遍,因而用此方法保存红细胞是否对红细胞产生了影响及产生了什么影响是值得研究的。作者利用激光光镊拉曼光谱系统,通过拉曼光谱对冻存人血红细胞进行研究;结果显示,红细胞冻存前后的拉曼光谱有一定的变化,解冻提取后也产生了一定的变化,这些变化主要体现在对应拉曼光谱的位置和强度上。研究结果对进一步研究红细胞的冻存具有一定的参考价值。