微生物的保存方法(续二)

<正> (11)冷冻干燥法: 1.冻干法的原理及适用范围 (1)冻干法的原理 冻干法的原理简单,即首先使微生物冻结,然后在负压下进行升华、除水。菌体的水分大部分被除掉之后,则细胞的生活反应事实上即将停止,从而得以长期保持其生活状态。冻干有各种方式,这里将包括水升华过程的干燥法统称冻干法。 做为除水的手段,冻干法是个缓和的方法,但对于敏感的生物细胞,如果不加以充分注意,大部分细菌都有可能因冻干处理而死亡。关于菌种保存,可能被认为只要有一点菌活存下来就行了,但这只能是在万不得已的情况下的说法,而要想保持菌株的性质不发生变化,就必须设法尽量使更多的细胞活存下来。特别脆弱的菌另当别论,一般说来都希望活存率能保持在10％以上。 (2)适用范围 冻干法适用于大多数细菌及放线菌,同时病毒、噬菌体、立克次体、霉菌、酵母等,大部分约可用此法保存。     

微生物的保存方法(续一)

<正> (七)冷冻保存法 1.一般注意事项 (1)细胞外冻结与细胞内冻结 大多数微生物都适于冷冻保存。按冷冻的速度,细胞冻结状态分为二种。以一定的冷冻速度为界线,慢于此速度者,仅引起细胞周围外液冻结,而细胞本身并不冻结,这种冻结状态称为“细胞外冻结”。冷冻速度超过此界线者,细胞本身内部也将结冰,称为“细胞内冻结”。一般讲,细胞越大越容易引起细胞内冻结。 对冻结具有强抵抗力的细菌,能够耐受细胞外冻结,但对于大多数细胞,不论是细胞外冻结或是细胞内冻结都容易引起伤害。     

微生物的保存方法(续四)

<正> 14 安瓶启封 首先,仔细检查菌株号码等标记,确保无误。 以酒精棉拭擦安瓶颈部。安瓶内封有棉塞者,用锉对准棉塞的中间部位将玻璃锉一小痕,然后用灭菌纱布或乙烯树脂软片把安瓶颈部裹起来折断。这样做是为了防止由外部吸入杂菌,同时也防止瓶内的干燥菌向外飞散。一般不要用酒精棉包裹折断,因为酒精可能被吸入瓶内。如果玻璃又厚又硬,可先把安瓶颈部在火焰上轻烧一下,立即用酒精棉冷炸,形成裂纹之后就能很容易折断。也可以用烧烫的玻璃棒热炸锉痕。产生裂纹之后,稍放一会儿(半分钟到1分钟),使空气慢慢渗入,以防干燥菌飞散。     

微生物的保存方法(续三)

<正> 10.干燥 (1)冷凝器的冷却或干燥剂的准备 予冻结束后,立即转入减压干燥。此时,必须事先予冷冷凝器,以备收集冻结菌液的升华水分,例如采用图(一)所示的那种最简单的装置,双层简型冷凝器的内筒盛装乙醇或丙酮等有机溶媒,加足够量的干冰,则温度可降至大约-70～-80℃,升华水分则可凝结在夹层内的表面上。为保持冷凝器温度不升高,须及时添加干冰。最近有几家制造厂产销一种浸没式的挠性冷却棒,放入上述有机溶媒中,可使冷凝器降至-60～-100℃,而且无需中途补加,便于长时间运转。如有特殊用途,也可用液氮冷却冷凝器,但对于一般菌种保存,并无如此需要。     

微生物的保存方法(续六) 病原性细菌的保存方法(医学领域)

<正> 一、前言(一)病原性细菌菌株保存的目的保存病原性细菌的目的,有的是为了验证从临床材料分离的病原性细菌的各种性状;也有的是为了研究或生产菌苗而保存菌株,等等。细菌不同于其它生物,其形态特性极为单纯,所以,主要要靠生理生化学、血清学和遗传学的特性进行分类,这就需要性状清楚的标准菌株(type strain)来做为参考对照。但是,生物却具有一种随着逐代相传而发生遗传变异的特性;当然也并不是所有的性质都按相同机率而发生变异的。细菌的世代期限特别短,所以,应考虑在传代培养中或保存中性质上发生变异的可能性,必须择择适合保存目的的保存方法。     

免疫诊断细胞方法(续五)

<正>6.分离T和B淋巴细胞的方法。 为检查T和B淋巴细胞的一系列特性,应使用仅含1—5％另一型淋巴细胞和其他白细胞的纯悬液,这种悬液是利用T和B淋     

微生物的保存方法(续七)——病原性细菌的保存方法(兽医学领域)

一、前言 病原性细菌保存最重要的问题是保持该菌的生物学及免疫学的各种特性,尤其要保持其病原性不变。 保存兽医学领域的病原性细菌,与一般细菌相同,主要采用传种培养方法、冰冻法及冻干法;其它,如Stamp氏明胶片干燥法也可试用。 传种培养保存法具有按需要随时接种,供做试验的方便,但其缺点是可能在传种过     

未完成的回忆录(续五)

1948年秋我应联合国教育科学文化组织（以下简称UNESCO）之聘，到它设在印度的“南亚科学合作馆”工作。全家在德里居住了三年。全国解放后1951年10月我休假回国，即未再去。现在回忆那三年的情况，简述如下。一、背景1948年我在北京大学任教，接到巴黎联合国教科文组织（UNESC     

血浆蛋白质的分级(续五)

<正>Ⅴ 各个血浆蛋白质的纯化方法 各个血浆蛋白质的纯化方法和步骤摘要列于表Ⅶ。     

水样保存方法对青藏高原湖泊可培养微生物的影响

青藏高原湖水中生存着大量适应极端环境的微生物,如耐冷及嗜冷菌。合适的湖水样品保存方法是野外取样的关键和开展深入研究的前提。本研究对比了冷冻和4℃冷藏两种保存方法对湖水中可培养微生物种类的影响。首先从不同保存方法样品中分离得到纯菌,然后对分离菌的16S rRNA测序进行菌种鉴定。结果表明,自冷冻保存湖水中分离得到7个不同的16S rRNA基因OUT(operational taxonomic unit),冷藏保存水样共分离得到14个不同的16S rRNA基因OTU。冷冻保存水样分离得到的可培养微生物包括芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、微小杆菌、不动杆菌、苏云金芽孢杆菌;冷藏保存水样分离得到的微生物包括γ-变形菌、金黄杆菌、芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、寡养单胞菌、假炭疽杆菌、缺陷假单胞菌、细杆菌。研究表明,冷藏保存方法比冷冻保存方法可分离得到更多种类可培养微生物,这两种保存方法均分离得到了芽孢杆菌。     

不同保存液和保存期限下肠道微生物组的变化

肠道菌群与人体健康的关系密切,通过检测肠道菌群可以获得有关健康的信息。新鲜粪便不易获得,很难做到快速低温冷冻,在进行标准化和大规模人群采样时,可用于常温条件下采集和保存样本的保存液可以弥补采集样本数量多、地域分布广、现场采样条件多样、工作量大、运输条件差等条件不足。本研究招募了5名健康志愿者,采集他们的粪便样本后,通过对比不同市售微生物样本采集常温保存液对新鲜粪便样本的影响,评估了各类保存液的保存效果。在室温下把粪便放置于5种保存液,在第0、1、3、7、15、30天提取元基因组DNA,进行16S rRNA V3–V4区高通量测序,来分析不同保存液,在不同时间段对肠道菌群组成的影响。结果显示,不同保存液对肠道菌群的影响存在差异,与对照组相比,不同保存液对样本中的OUT数量影响不大;保存液A、B和C在菌群构成上更接近对照组,保存液D会明显改变肠道菌群组成,使放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)增加;随着时间延长,各类保存液都有降低菌群多样性趋势,保存液E降低菌群多样性更明显;第30天时,5种保存液都会改变肠道菌群构成;肠道菌群组成存在个体差异,是影响各...     

多环芳烃(PAHs)微生物降解的原位表征方法

多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是一类在环境中广泛存在的持久性有机污染物,微生物降解是去除环境中多环芳烃污染的主要途径。传统的有关PAHs微生物降解的研究主要依靠分离培养技术,难以准确认识PAHs微生物降解的原位过程及机制。近年来发展起来的原位表征方法可以在基因及单细胞水平研究PAHs在复杂环境中的微生物降解过程,能够原位表征具有PAHs降解功能的微生物及其功能基因和代谢活性,是阐明PAHs原位降解过程及分子机制的强有力的手段。该文综述了宏基因组技术(meta-genomics)、稳定同位素探针技术(stable isotope probe,SIP)、荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)、拉曼光谱技术(Raman spectra)以及二次离子质谱技术(secondary ion mass spectrometry,SIMS)等原位表征技术在PAHs微生物降解研究领域的应用及其存在的问题和发展趋势等。PAHs微生物降解过程及机制的原位表征将为缓解与修复PAHs污染提供科学基础。     

普通微生物学 (六)微生物的代谢活动(续)

第二部分微生物的氮素代谢含氮有机物主要是蛋白质和核酸,它们是组成细胞最重要的大分子化合物,在微生物细胞的结构中以及新陈代谢过程中都占有极为重要的地位。另一方面,在土壤中微生物分解与合成含氮有机物的同时,又直接影响到土壤含氮肥料的数量,并和整个自然界中     

遗传饰变的微生物及其制备和使用方法(续)

E.温度对存活力和质体消除的影响: 当X1776在L-液体培养基+DAP+Tha中生长到对数期,再把它悬浮在BSG或L-液体培养基+DAP+Thd之中,然后放在43℃下温育培养时,在培养的头6-9小时内,可观察到菌落形成能力的指数丧失率。在L-液体培养基中,存活力降低55％/每小     

普通微生物学 (二)怎样认识微生物(续)

第四节 霉菌 霉菌在各类微生物中数目最多,大量存在于土壤中,比其它微生物能耐受较酸的环境,空气中也有大量霉菌孢子。霉菌分解一些复杂的有机物(如纤维素、木质素、几丁质、淀粉、蛋白质等)的能力比较强,在自然界物质循环中起了很大作用,同时霉菌也是生产酶制剂、有机酸、抗菌素、植物激素及发酵饲料的主要微生物。然而,事物总是一分为二的,霉菌也是造成食品、衣物及各种器材霉腐的主要微生物,又是很多农作物和动物的病原菌,对人类的关系是非常密切的。     

遗传饰变的微生物及其制备和使用方法(续)

四、微生物的基因型和表型特征的实验方法和结果,特别举出X1776为例来说明 (一) 材料和方法: 上文已经叙述了培养基、噬菌体和菌株(参见表1)以及转导、诱变突变体富集、。     

遗传饰变的微生物及其制备和使用方法(续)

1.X1776的组建 表格C列出从X1276到X1776的谱系。选择X1276作为饰变起点是因为(1)它具有在菌株组建和安全性方面有用的遗传标记;(2)80～90％染色体来自W1485;(3)能产生在研究质体嵌合体表达方面有用的微细胞。组建X1776的基本目的是确定一定的遗传标记群能否阻碍细胞壁的合成和消除细胞在非实验室控制的环境下的存活能力。在