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以λ噬菌体EMBL3作载体,用体外包装技术构建了志贺氏菌属弗氏2a染色体基因文库。该体外包装系统的包装效率达1.6×10~2pfu/μg DNA,重组噬菌体的产量达2×10~6pfu/μg DNA。对重组噬菌体进行了遗传分析,即分别对7个标记(leu,pro,his,arg,thr,purIaroA)作了测定。测得当噬菌体母液的效价为8.7×10~8pfu/ml时,带有以上标记的重组噬菌体的效价为5×10~4-8.2×10~5pfu/ml。这个令人满意的结果为尔后克隆志贺氏菌属弗氏2a染色体上的与群抗原3,4和型抗原Ⅱ有关的基因打下了基础。 相似文献
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野生大豆基因文库的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
以氯化铯密度梯度离心法纯化噬菌体λEMBL4,将纯化的EMBL4 DNA用BamH1/SalI双酶切制成载体。用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法提取野生大豆(种名待定)大分子DNA,Sau3A部分酶解,从琼脂糖凝胶中回收10—22kb“目的”DNA片段,与载体连接,体外包装成重组噬菌体。所得重组子值为8×10(?)pfu(噬菌斑形成单位),达到了构建野生大豆基因文库要求的理论值。以栽培大豆7S贮藏蛋白a′-cDNA作探针,用噬菌斑原位杂交法从文库中筛选出一个阳性克隆。 相似文献
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环境温度对人工饲料育家蚕体温和呼吸量的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以全龄人工饲料饲育的5龄幼虫为材料,调查了二化性和多化性家蚕品种在不同气温条件下的体温及呼吸量的差异.蚕是变温动物,体表温度及体内温度和环境气温虽大致相同,但也有一些微小的差异,体内温度>体表温度>气温.在0-30℃范围内,体内温度比气温高不到1℃.0℃时,5龄蚕仍有微弱的呼吸作用,呼吸强度随体温上升而缓慢上升,超过10℃后,上升速度加快.多化性品种在25—36℃范围内,随温度上升呼吸量增加速度有比二化性品种慢的倾向,这可能与多化性品种抗高温性有关.另外,饷食前后的呼吸量变化相当大,饷食后呼吸量急速上升,约1小时后达起蚕的2.4倍左右,以后相对稳定. 相似文献
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基因文库的鉴定和应用 总被引:2,自引:0,他引:2
由于草菇是一种同宗结合的食用真菌,这给草菇的杂交育种带来了一定的困难。本文在建立草菇部分基因文库的基础上,对草菇的基因文库进行了鉴定,在草菇基因文库中任意抽取72个克隆,利用专一的PCR方法,测出在草菇基因文库中,草菇基因组DNA的平均大小为1156个碱基对。在基因文库中任意选择53个克隆,利用专一的PCR进行DNA扩增以及dig非同位素标记,用于和草菇基因组DNA杂交。在测试的53个克隆中有8% 相似文献
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目的 通过构建牙龈卟啉菌47A-1的基因文库,为进一步深入研究牙龈卟菌的基因结构鉴定基础。方法 选择Sau3AI对牙龈卟啉菌47A-1染色体DNA作酶切,获得的DNA片段与BamBI酶解的质粒pUC18作体外连续并转化大肠杆菌JM109,在含有IPTG、X-gal和氨苄青霉素的LB琼脂平板上,用蓝、白筛选出选出含重组质粒的大肠杆菌扩增并分析。结果 得到的重组质粒经酶切、电泳分析,证实包含牙龈卟啉菌47A-1的插入片段。结论 牙龈卟啉菌47A-1的基因文库构建成功。 相似文献
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大麻哈鱼基因文库的构建及其生长激素基因的克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
本文主要论述了黑龙江省特有鱼种,大麻哈鱼全基因文库的构建方法以及从所构建的1.9×10~(?)噬菌体成斑单位/ugDNA基因文库中克隆出生长激素基因片段的研究结果,作者使用DM-BL3入噬菌为载体,将大麻哈鱼肝总DNA的15-20Kb片段重组到载体中,再包装成新的重组噬菌体,以含虹鳟鱼生长激素DNA部分序列的PAF51为探针,经[~(12)P]dCTP标记后,与噬菌斑杂交,自显影,获得3个阳性斑,复筛获得90%以上阳性斑,酶切回收生长激素基因片段,实验证明,已成功地获得大麻哈鱼生长激素基因片段,可供进一步亚克隆或转移研究使用。 相似文献
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利用限制性内切酶San3A将霍乱弧菌178(埃尔托生物型,小川血清型)染色体DNA进行部分酶切后,分离20~50kb的DNA片断,与经过BamHI酶切的柯斯质粒pHC79连接重组,通过体外包装系统形成噬菌体颗粒,感染受体菌E.coliHB101,构建成霍乱弧菌178染色体基因文库。为霍乱弧菌中未知基因的克隆及其它研究打下了基础。 相似文献
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CONSTRUCTION OF SILKWORM MIDGUT cDNA LIBRARY FOR SCREEN AND SEQUENCE ANALYSIS OF PERITROPHIC MEMBRANE PROTEIN GENES 下载免费PDF全文
Yi‐Jun Zhou Bin Xue Yang‐Yang Li Fan‐Chi Li Min Ni Wei‐De Shen Zhi‐Ya Gu Bing Li Wei‐De Shen Zhi‐Ya Gu Bing Li 《Archives of insect biochemistry and physiology》2016,91(1):3-16
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构建胆固醇氧化酶的短杆菌基因文库 总被引:3,自引:0,他引:3
以内切酶Sau3AI部分水解产胆固醇氧化酶短杆菌的染色体DNA,以质粒pUC18为载体,JM109为宿主,采用碱性磷酸酯酶CIP去除内切酶BamHI水解后质粒的5’端磷酸根,提高质粒的重组率,构建了供筛选胆固醇氧化酶基因的基因文库 相似文献
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由于草菇是一种同宗结合的食用真菌,这给草菇的杂交育种带来了一定的困难。本文在建立草菇部分基因文库的基础之上,对草菇的基因文库进行了鉴定。在草菇基因文库中任意抽取72个克隆,利用专一的PCR方法,测出在草菇基因文库中,草菇基因组DNA的平均大小为1156个碱基对。在基因文库中任意选择53个克隆,利用专一的PCR进行DNA扩增以及dig非同位素标记,用于和草菇基因组DNA杂交。在测试的53个克隆中有8%的高度重复序列,36%中度重复序列和56%的低度重复序列。 相似文献
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家蚕微粒子病母蛾序贯抽样检验方法研究 总被引:6,自引:1,他引:5
本文根据统计学理论,设计了一套家蚕微粒子病母蛾序贯抽样检验方案,用此方案进行的抽样检验,不仅保证了将不合格蚕种判为合格蚕种的概率控制在1.5%以内,而且大大减少了将合格蚕种判为不合格蚕种的概率.并且镜检蛾数一般随总体病蛾率ρ而变化。当ρ较低或较高(相对于0.5%)时,需检验的数量就较少.本方案的实际检验工作量并未比现行检验方案有明显增加. 相似文献
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目前,基因文库的构建方法虽已逐步普及,但仍有不少实验因最终未能从构建的文库中钓出目的基因而告失败。其主要原因是构建的文库没有达到预期的要求——真实有效.我们对核 DNA 分离和载体左右臂制备等的常用方法进行了改进,构建了苜蓿的核基因组文库,其容量测定、重组子鉴定及初步的杂交筛选都证明该文库真实有效。苜蓿(Medicago sativa L.)DNA 的制备参照 Shure 等(1983)和 Ausubel 等 相似文献