5—碘吲哚酚[3]苯基膦酸酯的合成及应用

本文利用苯基氧氯化膦和N-乙酰-5-碘吲(口朶)酚为原料,建立了5-碘吲哚酚苯基膦酸酯铵盐的合成和纯化方法。并报道该产品的紫外光谱、红外光谱、元素分析等理化性质,以及作为酶底物的应用情况。实验结果说明,合成的产品经提取和重结晶可达到层析纯。氢、氮、碳元素分析数据与理论结构计算值相符。产品在常温条件下保存两年以上无结构变化,受酶催化的专一性好,能用于磷酸二酯酶分析和组织化学研究。     

人血清中膦酸单酯酶性质的研究

本文采用4-甲基伞形酮苯基磷酸酯为底物检测人血清中酶活性情况,发现在人血清中存在一种能够选择性水解苯基膦酸单酯键的酶活性成份。该酶具有最适pH8.8—9.1,在60℃(反应30分钟)条件下具有最大活性。Km=1.72×10~(-4)mol/L,Na_3PO_4、EDTA和半胱氨酸可抑制其活性,而CuSO_4、腺苷、胸苷、NaN_3、E600、PCMB、DFP和毒扁豆碱等对其活性没有影响。Mg~(++)可激活酶活性,并能解除EDTA的抑制作用。 此酶不能水解5′-NPDase和APase的底物,有关性质也与5′-NPDase和APasc有区别。本文将此酶暂定名为“膦酸单酯酶”。     

用于肝癌检测的酶底物——5′-(5-碘吲哚酚-[3])胸腺嘧啶核苷酸的制备

检测人血清中5′-核苷酸磷酸二酯酶同工酶谱的变化,是诊断人类原发性肝癌的一个有效的血清酶学方法。和甲胎蛋白诊断法协同,可使肝癌的诊断符合率自80％提高到约94％。减少了甲胎蛋白诊断肝癌存在的假阴性问题,具有重要的临床诊断意义。 检测5′-核苷酸磷酸二酯酶(5′-NPDase)同工酶的底物,5′-(5-碘吲哚酚-[3])胸腺嘧啶核苷酸,我所潘禄兴等已有直接合成法报道。本文在潘禄兴等工作基础上对工艺作了改进,使产率有了明显提高。     

麦芽根中5′-磷酸二酯酶和5′-磷酸单酯酶的提取

建立一种高效快速的从麦芽根中提取5′-磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的方法。通过将麦芽根粉碎后,取一定粒度的麦芽根加一定量的去离子水浸泡,过滤后得粗酶液。用紫外分光光度法测定5′-磷酸二酯酶和5′-磷酸单酯酶的酶活,研究粉碎粒度、料液比、抽提温度、抽提时间等因素对麦芽根中5′-磷酸二酯酶和5′-磷酸单酯酶提取的影响。将原料粉碎至100目,以去离子水为提取剂,于4℃提取20h,料液质量比为1:10,5′-磷酸二酯酶的酶活力可达160U/ml。该法简单、快速、准确、适应性强,为5′-磷酸二酯酶的提取与检测提供了有效的工具。     

5＇-核苷酸的合成方法比较

5’-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途。比较了目前5’-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法。     

高活力5′-磷酸二酯酶制备及水解RNA的研究

目的:获得高活力5′-磷酸二酯酶液,提高核酸RNA酶解效率。方法:采用超滤和盐析技术对从麦芽根浸提液中纯化5′-磷酸二酯酶工艺进行研究,采用单因子试验法优化酶解工艺条件。结果:浸提液依次经过5万Da超滤膜浓缩、40%饱和度硫酸铵盐析、5万Da超滤膜脱盐后,酶活力可达1 500U/ml;第1次超滤膜透过液可作为浸提液循环使用,酶活力是水浸提的1.15倍;第2次超滤膜透过液浓缩5倍后,可回收56.46%硫酸铵,浓缩母液可按1∶2比例循环使用;在底物浓度5.8%、酶用量8%、反应时间2h条件下,RNA酶解率可达95%。结论:初步建立了适合工业化规模的核苷酸生产新工艺。     

5′-核苷酸的合成方法比较

5′-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途。比较了目前5′-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法。     

固定化5′-磷酸二酯酶及其在核苷酸生产中的应用

钛氯活化纤维素固定5’-磷酸二酯酶,使酶活回收率达到70%以上。用这种固定化酶在75℃、pH5.2的条件下降解0.5%浓度的酵母核酸(RNA),用酶量可减少到1.75u/ml底物,酶活利用率可提高6倍以上。核酸降解率可达70%以上。     

麦芽根中5'-磷酸二酯酶和5'-磷酸单酯酶的提取

建立一种高效快速的从麦芽根中提取5'-磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的方法.通过将麦芽根粉碎后,取一定粒度的麦芽根加一定量的去离子水浸泡,过滤后得粗酶液.用紫外分光光度法测定5'-磷酸二酯酶和5'-磷酸单酯酶的酶活,研究粉碎粒度、料液比、抽提温度、抽提时间等因素对麦芽根中5'-磷酸二酯酶和5'-磷酸单酯酶提取的影响.将原料粉碎至100目,以去离子水为提取剂,于4℃提取20h,料液质量比为1:10,5'-磷酸二酯酶的酶活力可达160U/ml.该法简单、快速、准确、适应性强,为5'-磷酸二酯酶的提取与检测提供了有效的工具.     

磷酸二酯酶5（PDE5）在人增生前列腺移行带中的表达及分布

目的:探讨磷酸二酯酶5在人前列腺移行带组织中的表达与分布。方法:应用免疫组化SP法,选择前列腺增生患者34例,检测PDE5表达及分布。结果:34例标本中PDE5均呈阳性表达。PDE5在前列腺移行带的腺组织上皮普遍呈中等表达,间质部分弱表达。结论:PDE5在人增生前列腺组织中分布,但分布不均,表明不同PDE5可能行使不同的功能。     

2'-'5-三腺苷酸对巨噬细胞腺苷酸环化酶和cAMP-磷酸二酯酶活性的影响

1989年,我们曾首次证实干扰素作用介导物pppA2＇p5＇A2＇p5＇A(2＇-5＇-三腺苷酸,2＇-5＇P_3A_3)能引起巨噬细胞中cAMP,cGMP水平升高,表明这两种环核苷酸在传递干扰素信息中起着重要作用。在上述研究的基础上,本研究观察了2＇-5＇P_3A_3对腺苷酸环化酶(AC)和cAMP-磷酸二酯酶(cAMP-PDE)两种酶的活性影响,结果发现,1×10~(-6)mol/L的2＇-5＇P_3A_3可显著增加AC的活性,而对cAMP-PDE活性沒有显著影响,这说明2＇-5＇P_3A_3引起的细胞内cAMP水平的升高是由于激活AC而使其生成增多,而不是抑制cAMP-PDE而使其降解减少的结果。     

磷酸二酯酶5参与平滑肌功能调节的机制

磷酸二酯酶5(phosphodiesterase type 5,PDE5)又称对环鸟苷酸特异的磷酸二酯酶(cGMP-specific phosphodiesterase),广泛分布于机体的平滑肌细胞中,通过对细胞内特定区域的cGMP水平的调节,参与平滑肌(收缩、舒张)状态的快速调控.现对PDE5的基因表达和酶活性的调控方式,亚细胞分布,以及在平滑肌中的调节机制和药理应用进行综述.     

苦荞FtF5H基因克隆及表达分析

阿魏酸-5-羟基化酶(Ferulate 5-hydroxylase)是调控S型木质素合成的关键酶,为研究其在苦荞木质素生物合成途径中的分子机制,该文从苦荞转录组数据中筛选获得一个F5H基因,命名为FtF5H(GenBank登录号:MW455111),采用生物信息学方法对苦荞F5H蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、亲疏水性、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、氨基酸结构、系统进化树等进行分析和预测,并运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析FtF5H基因在厚果壳苦荞与薄果壳苦荞的叶、花、茎、果壳中的差异表达。结果表明:(1)FtF5H基因序列包含1395 bp的完整cDNA开放阅读框,编码464个氨基酸。(2)FtF5H蛋白具有P450超家族结构,为亲水性稳定酸性蛋白,不具有跨膜结构域,且为非分泌性蛋白。(3)FtF5H蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,三级结构预测显示FtF5H蛋白与5ylw.1.A的相似度较高。(4)系统进化分析显示FtF5H属于CYP84A亚家族。(5)qRT-PCR显示FtF5H基因在两种苦荞中的不同部位均有表达,且在厚果壳苦荞果壳中的表达量是薄果壳的5倍,表达具有极显著差异。该研究为进一步研究苦荞木质素合成的分子调控机制奠定了基础,对苦荞新品种的培育具有重要意义。     

5′—磷酸二酯酶高产菌株的选育和发酵培养条件的优点

以ATCC14994为出发菌株,采用紫外线与亚硝基胍相结合的多次诱变育种,获得1株5′-磷酸二酯酶高产菌株HAT2228.通过单因子和正交试验对该菌株的产酶发酵条件进行了优化,优化发酵产酶条件为蔗糖5%,酵母膏0 3%,蛋白胨0.3%,K2HPO4 0.8%,KH2PO40.8%,MgSO4 0.2%,ZnSO4 0.2%,培养基起始pH6 0,接种量10%,培养温度30℃,摇床转速120r/min,发酵时间48h.在优化条件下,HAT2228的产酶水平达1 329u/ml.     

5′-磷酸二酯酶高产菌株的选育和发酵培养条件的优化

以ATCC14994为出发菌株,采用紫外线与亚硝基胍相结合的多次诱变育种,获得1株5′-磷酸二酯酶高产菌株HAT2228.通过单因子和正交试验对该菌株的产酶发酵条件进行了优化,优化发酵产酶条件为:蔗糖5%,酵母膏0 3%,蛋白胨0.3%,K2HPO4 0.8%,KH2PO40.8%,MgSO4 0.2%,ZnSO4 0.2%,培养基起始pH6 0,接种量10%,培养温度30℃,摇床转速120r/min,发酵时间48h.在优化条件下,HAT2228的产酶水平达1 329u/ml.     

PDE5 shRNA对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响

目的:探讨磷酸二酯酶5(PDE5)shRNA对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响。方法:通过结扎小鼠左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,并将建立好的模型随机分为实验组(n=10):将携带有抑制PDE5的shRNA(PDE5 shRNA)重组腺病毒载体对小鼠心肌组织多部位注射;模型组(n=10):将没有插入PDE5 shRNA的普通腺病毒载体对小鼠心肌组织多部位注射。1周后,进行免疫组化和TUNEL分析检测梗死及梗死周边细胞凋亡情况,ELISA法检测环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,c GMP)和蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)的表达,免疫蛋白印迹分析检测各组磷酸二酯酶5(phosphodiesterase5,PDE5)的表达情况。结果:心梗1周后,和模型组相比较,实验组小鼠梗死区及梗死周边区域细胞凋亡明显减少(P0.05),实验组小鼠心肌PDE5表达明显减少,cGMP和PKG表达明显上调(P0.05)。结论:PDE5 shRNA可以明显减少梗死区及梗死周边区细胞凋亡,可能与上调cGMP和PKG的表达密切相关。     

5'-核苷酸的合成方法比较

5'-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途.比较了目前5'-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法.     

脑室注射5-HT对应激后胃粘膜中ATP酶活性及ATP和ADP含量的影响

中枢5-羟色胺(5-HT)可通过兴奋下丘脑-垂体-甲状腺轴加重大鼠冷冻加束缚应激性溃疡。本工作进一步观察了脑室注射5-HT对胃粘膜代谢的影响及其与甲状腺激素的关系。应激180min大鼠的胃粘膜ATP酶的活性较非应激发对照鼠升高42.6％;如应激前10min向侧脑室注射5-HT50μg或腹腔注射四碘甲腺原氨酸(T_4)200μg/kg,均匀进一步提高应激后胃粘膜ATP酶的活性。在侧脑室注射5-HT后应激180min的鼠,血浆三碘甲腺原氨酸(T_3)和T_4水平均与胃粘膜ATP酶的活性呈明显的正相关关系。用高效液相层析测定观察到,应激鼠胃粘膜ATP和ADP水平均明显低于非应激鼠,分别为非应激鼠的70.3％和76.8％。腹腔注射T_4进一步减少应激后胃粘膜ATP和ADP的水平。这些结果提示,中枢5-HT可能通过甲状腺激素提高胃粘膜ATP酶的活性,使ATP和ADP含量下降,这可能与其加重溃疡的机制有关。     

长爪沙鼠冷驯化中褐色脂肪组织产热活性及解偶联蛋白基因表达

长爪沙鼠暴露于冷环境 (4± 2℃ ) 1天至 4周的过程中 ,褐色脂肪组织 (BAT)线粒体的GTP结合能力逐渐增加 ,3周达到最大值 ;解偶联蛋白 (UCP)基因表达只有一种 ,分子量为 1 5kb ,并在冷暴露一天时明显上调 ,一周时达到高峰 ;BAT的T4 5′ 脱碘酶活力也逐渐增加。表明UCPmRNA上调对BAT合成新的UCP是必需的 ,T4 5′ 脱碘酶的激活对BAT的产热和增生是重要的。     

萘查耳酮类化合物的设计合成及对CYP1B1酶的抑制活性评价

目的:设计并合成几类新型的萘查耳酮衍生物,初步测定其对CYP1B1酶的抑制活性,筛选具有良好抗癌作用的CYP1B1抑制剂。方法:以1,5-二羟基萘为原料,首先合成两个重要的中间体2-乙酰基-1,4,5,8-四甲氧基萘、1,5,6-三甲氧基-2-萘乙酮,然后利用羟醛缩合反应合成所需要的化合物。结果:合成了19个目标化合物,其结构均经过核磁共振氢谱确证,所有化合物均为全新化合物。对所合成的新化合物均进行了EROD酶实验测定。结论:所合成的化合物均具有较强的CYP1B1酶一抑制活性,其中4-1、4-2、5'-1对CYP1B1的抑制活性强于CYP1B1强抑制剂α-萘黄酮(IC50=11 nmol/L),他们的IC50分别为6.5、0.47、8nmol/L。