羧甲基壳聚糖膜对皮肤成纤维细胞相容性研究

通过玻璃流延法制备不同分子质量的壳聚糖及羧甲基壳聚糖膜,以体外培养的人皮肤成纤维细胞作为对象,利用膜的浸渍液培养及膜表面直接培养法研究比较了两种多糖膜的细胞相容性.实验发现两种多糖膜的浸渍液对细胞均无毒性效应,生物安全性是小分子质量膜好于大分子质量膜,羧甲基壳聚糖膜好于壳聚糖膜.皮肤成纤维细胞在壳聚糖膜上的生长受到抑制,生长一段时间后细胞有聚集和脱落现象,而羧甲基壳聚糖膜上细胞能很好地贴附、生长,没有聚集和脱落现象.结果表明羧甲基壳聚糖膜具有比壳聚糖膜更优越的细胞相容性.     

新型远距离细胞连接结构——膜纳米管

与细胞间讯息传递相关的细胞结构有紧密连接、黏附连接和缝隙连接,但它们都只能在紧密相连的细胞间发挥作用.最近,人们发现了一种能够介导距离较远的细胞间讯息传递的膜系结构,称之为隧道纳米管或膜纳米管.膜纳米管通过促进细胞通讯影响了细胞的生理和病理变化.膜纳米管结构、形成以及功能已有一些研究报道.然而,作为一种新型的细胞间的连接结构,还有很多未知值得深入探索.     

蛋白激酶C 在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞收缩中的作用

目的:研究蛋白激酶C(pkc)在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞(GMC)收缩中的作用。方法:人肾小球系膜细胞系用于全部实验。应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激蛋白激酶C抑制剂白屈菜红碱(CHE)处理或未处理的系膜细胞。利用激光扫描共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度。结果:①膜细胞经AngⅡ诱导后,细胞出现明显的大幅度起始钙离子浓度升高(vs.control,p<0.05,n=16)②膜细胞经CHE预处理后减少AngⅡ诱导的GMC钙离子浓度(vs AngⅡ,p<0.05,n=16)。结论:①血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞收缩。②蛋白激酶C参与血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞的收缩过程。     

层粘连蛋白与膜受体结合下膜受体构象与膜脂有序性的研究

配体蛋白与细胞膜受体蛋白结合后,可引起膜受体的构象与膜脂的有序性变化.本文研究外源性层粘连蛋白与腹水肝癌细胞膜受体结合后膜热量变化,膜序参数改变和膜电荷及细胞迁移率的变更.就膜蛋白构象与膜脂有序性以及膜电荷等方面改变的生理意义与层粘连蛋白抗癌细胞脱落转移寻找理论关系.本文应用微量量热法、顺磁共振和细胞电泳等技术,得知层粘连蛋白与癌细胞膜作用后细胞膜有放热效应,膜流动性增大,细胞电泳动变慢.癌细胞膜的这些变化对于限制癌的恶性生长与脱落均起重要作用.     

细菌细胞被膜压力响应的研究进展

细胞被膜是细菌监测外部环境变化并及时作出响应的第一道屏障,在面对温度、pH、渗透压、金属离子、活性氧以及抗生素压力时,对细胞进行保护。细胞被膜压力响应可以感受细胞被膜损伤,并通过调控转录以缓解压力,其中双组分系统和胞质外功能性σ因子是主要的压力响应系统。同时,越来越多的研究发现,非编码小RNA可与二者协同作用共同调节细胞被膜压力。由于革兰氏阴性菌和阳性菌的被膜结构不同,各自的响应机制也有所差异。该文基于细胞被膜结构,从革兰氏阴性菌和阳性菌两个方面详细介绍了细胞被膜压力响应及其最新研究进展,并展望了细胞被膜压力响应的未来研究方向。     

HMGB1对小鼠系膜细胞细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响

该实验以小鼠系膜细胞MMC为研究对象,以重组HMGB1为刺激物,通过检测细胞周期的变化及细胞PCNA、CyclinD1、CDK4和p16的表达水平,初步探讨HMGB1对系膜细胞的细胞周期及其相关调控因子的影响。选取小鼠系膜细胞MMC为研究对象,随机分为对照组及0.05mg/LHMGB1刺激组,经流式细胞术检测发现HMGB1能够上调小鼠系膜细胞中S期细胞所占比例;免疫细胞化学检测显示,PCNA蛋白在小鼠系膜细胞中的表达上调;通过RT-PCR技术及Western blot技术检测到小鼠系膜细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白以及CDK4蛋白的高表达情况,而p16蛋白的表达呈时间依赖性降低。由此可见,HMGB1可能是通过上调CyclinD1/CDK4的表达,并下调p16的表达,促进细胞从G_0/G_1期进入S期,介导了小鼠系膜细胞的异常增殖,可能是HMGB1参与狼疮性肾炎发病的可能机制之一。     

LncRNA H2k2促进高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的研究

该研究主要探讨lncRNA H2k2对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRTPCR检测lncH2k2在正常及糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的表达,以及高低糖培养的系膜细胞中的表达;FISH与qRT-PCR检测lncH2k2的亚细胞定位;qRT-PCR检测lncH2k2过表达质粒及siRNA的转染效率;EdU检测转染lncH2k2过表达质粒或siRNA后系膜细胞增殖的变化。结果表明,lncH2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高糖培养的系膜细胞中的表达升高,且lncH2k2主要分布于系膜细胞的细胞质中。在低糖培养的系膜细胞中转染lncH2k2过表达质粒后,与低糖培养的系膜细胞相比,过表达lncH2k2的低糖培养的系膜细胞增殖能力显著提高,并且将qRT-PCR检测筛选出的一条lncH2k2 siRNA转染到高糖培养的系膜细胞内,与高糖培养的系膜细胞相比,敲低lncH2k2后系膜细胞增殖能力显著降低。研究结果揭示,lncRNA H2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及系膜细胞中表达显著,lncRNA H2k2促进了系膜细胞增殖,这些结果表明,lncRNA H2k2可能参与了糖尿病肾病的发生发展。     

细胞内膜的区域化作用

生物膜在空间区域上不仅把细胞与外环境隔离开,而且在细胞内也起着隔离作用。膜在细胞内形成一个个小区域,使与某种机能有关的酶或酶系集中于一定的区域内,把细胞中不同的功能活动和代谢反应相互分开,这就是细胞内膜的区域化作用。细胞中机能与反应的区域化各种膜系细胞器是细胞内膜区域化的重要方式。线粒体的双层单位膜,内质网、高尔基体、溶酶体等的单层单位膜,以及双层单位膜构成的细胞核,可以把细胞中各种不同的功能活动分开。见下表。     

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合对膜下F－actin的影响

配体与膜受体结合可启动细胞信息传递通路,激活细胞并产生生物学效应。应用共聚焦激光扫描显微术,流式细胞分光光度计,生物活性测量等技术,研究ＭＡ与巨噬细胞膜受体结合后,膜下肌动蛋白丝构筑和含量随时间变化,以及细胞热能量改变。结果是ＣｏｎＡ结合巨噬细胞膜受体后,膜下肌动蛋白多聚化加快,构筑成细胞内Ｆ－ａｃｔｉｎ立体空间网络,Ｆ－ａｃｔｉｎ含量增加具有时间相关性,细胞热能量增加。巨噬细胞内这些变化提示ＣｏｎＡ通过膜受体诱导膜下肌动蛋白多聚化和构筑过程有信息传递和激活细胞等重要作用。     

蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞收缩中的作用

目的：研究蛋白激酶C（pkc）在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞（GMC）收缩中的作用。方法：人肾小球系膜细胞系用于全部实验。应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激蛋白激酶C抑制剂白屈菜红碱（CHE）处理或来处理的系膜细胞。利用激光扫描共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度。结果：①膜细胞经AngⅡ诱导后,细胞出现明显的大幅度起始钙离子浓度升高（vs．control,p〈0．05,n=16）⑦膜细胞经CHE预处理后减少AngⅡ诱导的GMC钙离子浓度（vsAngⅡ,p〈O．05,n=16）。结论：①血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞收缩。②蛋白激酶C参与血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞的收缩过程。     

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合对膜下F－actin的影响

配体与膜受体结合可启动细胞信息传递通路,激活细胞并产生生物学效应。应用共聚焦激光扫描显微术,流式细胞分光光度计,生物活性测量等技术,研究ＭＡ与巨噬细胞膜受体结合后,膜下肌动蛋白丝构筑和含量随时间变化,以及细胞热能量改变。结果是ＣｏｎＡ结合巨噬细胞膜受体后,膜下肌动蛋白多聚化加快,构筑成细胞内Ｆ－ａｃｔｉｎ立体空间网络,Ｆ－ａｃｔｉｎ含量增加具有时间相关性,细胞热能量增加。巨噬细胞内这些变化提示ＣｏｎＡ通过膜受体诱导膜下肌动蛋白多聚化和构筑过程有信息传递和激活细胞等重要作用。     

蝾螈胚胎表皮细胞膜的静息电位,输入电阻与其兴奋性的关系

用微电极细胞内记录技术研究了东方蝾螈胚胎表皮细胞膜的静电位、输入电阻与其兴奋性的关系,在兴奋性形成期间正常胚胎表皮细胞的静息膜电位逐渐增大,膜的输入电阻逐渐减小。与不显示兴奋性的离体非典型胚胎表皮细胞相比,显示兴奋性的膜电位较高,膜电阻较低。用葡萄糖处理非典型表皮,在兴奋性出现同时,细胞膜超极化,膜电阻减小。用哇巴因处理表皮囊泡,在兴奋性消失同时,细胞膜去极化。结果表明,细胞能量供应不足所造成的膜     

B细胞利用机械能判别与抗原的亲和力

高亲和力抗体的产生是依赖于B细胞从抗原呈递细胞表面提取抗原的能力。B细胞首先与抗原呈递细胞(APC)相结合,其膜上的B细胞受体(BCR)与APC膜上的抗原结合形成免疫突触。随后B细胞从APC的膜上获取了抗原,并对其进行加工,呈递给辅助性T细胞。然而,B细胞是如何从抗原呈递细胞膜上获取抗原的,其机制目前尚不清楚。研究人员利用具有流     

玉米螟幼虫侧单眼的神经鞘和胶质细胞

用透射电镜观察了欧洲玉米螟Ostrinia nubilalis(Hbner)5龄幼虫侧单眼神经的神经围膜、周神经细胞和其他神经胶质.神经围膜与若干周神经细胞包围若42根轴突.周神经细胞的原生质膜在它们的侧面和内面高度卷曲,并与相邻细胞交错对插,这是细胞与细胞间的特殊连接方式;它们的外面以桥粒和半桥粒固定在神经围膜内面.周神经细胞由神经胶质细胞演化而来,所形成的膜称神经束膜,它与神经围膜组成围在侧单眼神经外面的神经鞘.侧单眼神经内的神经胶质细胞大而平整,具有许多突起物(相当于脊椎动物的少突神经胶质细胞),每一个突起物包被一个感光轴突.神经胶质细胞包被轴突的形式有三种不同的类型:一种是相邻轴突间插入15层神经胶质细胞突起物所形成的普通轴系膜形式,另两种是神经胶质细胞突起物在一个轴突的周围,由一些褶所形成的不同形式.最后,对这些神经胶质细胞以不同形式包被轴突的功能意义进行了讨论.     

南方鲶卵巢滤泡细胞和卵膜生成的组织学研究

南方鲶的卵巢滤泡细胞源于卵巢基质细胞,从发生到退化分为零散卵泡膜细胞期、单层扁平泡膜细胞期、多层扁平卵泡膜细胞期、立方形颗粒细胞期柱状颗粒细胞期、颗粒细胞分泌期和颗粒细胞退化期。精孔细胞中发育中滤泡细胞分化形成。初级卵精源于卵母细胞,次级卵膜由晚期滤泡细胞分泌形成。本文还对滤泡细胞和卵膜的作用进行了阐述。     

Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞的扫描与透射电镜对比观察

以感染复数为3的 HSV—Ⅱ(333株)感染兔婴肾单层细胞,不同间隔时间取材作扫描(SEM)及透射电镜(TEM)观察。感染1小时后,SEM 下显示细胞表面有大量病毒颗粒吸附,颗粒均匀分布或积聚成簇,多数病毒颗粒有囊膜,少数无囊膜。感染2小时后,变化与上基本类似,但有少数细胞变园。感染4小时后,变园的细胞数量增多,在此种细胞的核周区及边缘区积聚有大量病毒颗粒,而核上区则仅见少量散在的病毒颗粒,感染16小时后,部分细胞表面出现大小及形状不规则的孔洞;部分细胞解体成碎片,在孔洞边缘及细胞碎片中,可见有囊膜及无囊膜的病毒颗粒。病毒感染1—2小时后,TEM 下可见有囊膜及无囊膜的病毒颗粒吸附于细胞表面,随后在细胞表面的凹陷及胞浆小泡中,亦可见到类似的病毒颗粒。感染4小时以内的细胞超微结构变化主要有:髓膜的形成,线粒体肿胀,粗面内质网腔扩张及染色质边聚。感染16小时后,细胞呈现严重的变性及解体,在细胞碎片中,亦可见到有囊膜及无囊膜的病毒颗粒。对病毒的吸附,穿入,释放等问题进行了讨论.     

细胞穿膜肽的研究进展

细胞穿膜肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其穿膜能力不依赖经典的胞吞作用。经过对天然存在的细胞穿膜肽的生物化学性质研究,已经逐渐掌握了细胞穿膜肽的一些共有特性,这类物质均为带有正电荷的长短不等的多肽片段,其中富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基,二级结构皆具有α-螺旋的空间构象。利用这些特性,目前已人工合成了穿透力更强、效率更高的穿膜肽PEP-1、MPG,并且成功地携带大分子物质进入细胞发挥生物学活性。     

膜上糖蛋白与细胞识别

细胞膜上的糖蛋白在生命活动中起着重要的作用,特别与细胞识别关系密切。细胞识别是指细胞对同种和异种细胞的认识,以及对自己和异己物质的识别。在细胞膜上有许多识别位点,包括膜受体和膜抗原,细胞之间的识別主要通过这些识别位点的作用实现的,现在知道膜上的识别位点大多是糖蛋白。糖蛋白在细胞识别中的重要作用体现在以下几个方面: 细胞粘合与受精作用、细胞分化、酵母菌的有性生殖、粘菌凝聚、海绵细胞的再团聚等等有关。其粘合机制依赖于膜上的糖蛋白。现已从细胞表面分离出促进     

改良的高纯度人早孕绒毛膜滋养层细胞培养方法

目的培养纯度较高的人早孕绒毛膜滋养层细胞,为研究胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制提供细胞学基础。方法胰蛋白酶-DNA酶消化法分离培养绒毛膜滋养层细胞,再运用流式细胞仪细胞分选获得高表达HLA-G的人早孕绒毛膜滋养层细胞。流式细胞术检测分选前后原代培养细胞HLA-G的表达率,相差显微镜观察滋养层细胞形态学特点,免疫荧光显微镜鉴定细胞来源,台盼蓝染色检测细胞活力。结果通过流式细胞检测,分选前的原代培养细胞体系中HLA-G的表达率为86.5%,经过分选带有PE荧光/HLA-G阳性表达的原代培养细胞后,其纯度可达98.0%。倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性,表明细胞性质为上皮来源的绒毛膜滋养层细胞。台盼兰排斥试验检测细胞活力,细胞活力良好,存活率超过92%。结论该方法可以有效获得高纯度的,具有生物学活性的人早孕绒毛膜层细胞,为在体外研究生理妊娠及病理妊娠中滋养细胞的作用提供了一种改良的技术手段。     

长链非编码RNA 1500026H17Rik对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响

为了探讨长链非编码RNA 1500026H17Rik对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)检测1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及在高糖和低糖条件下培养的肾小球系膜细胞中的表达水平;扩增小鼠1500026H17Rik的全长序列,将其克隆到pcDNA3.1(+)载体上,构建pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒,并设计合成si RNA;将1500026H17Rik-si RNA和pcDNA(+)-1500026H17Rik过表达质粒分别转染至高糖或低糖培养的肾小球系膜细胞中,通过5-乙基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethyny1-2′-doexyuridine,Ed U)检测肾小球系膜细胞的增殖能力。结果表明,在糖尿病肾病小鼠肾脏组织和高糖培养的系膜细胞中1500026H17Rik表达水平显著提高。在低糖培养的系膜细胞中转染pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒后与低糖培养的系膜细胞或空质粒转染对照组相比,低糖1500026H17Rik过表达的肾小球系膜细胞的增殖能力明显提高。同时,将通过qRT-PCR筛选出的一条敲低效率最佳的1500026H17Rik-si RNA转染至高糖培养的系膜细胞后,与高糖培养的系膜细胞或si RNA转染对照组相比,1500026H17Rik敲低的肾小球系膜细胞的增殖能力明显减弱。lnc RNA-1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中呈高表达,且影响高低糖培养的肾小球系膜增殖,提示1500026H17Rik可能参与了糖尿病肾病的发生。