昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值Ⅱ．蝌蚪红细胞微核和CHO细胞染色体畸变及SCE试验

本文研究的目的是以蝌蚪微核及ＣＨＯ培养细胞染色体畸变（ＣＡ）及姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）为指示器,研究昆明市各水厂自来水和它们源水的潜在致突变性。结果表明：①各水厂自来水及它们的源水诱发蝌蚪微核率,除Ｙ－水厂自来水外都有显著性差异。②ＣＡ率的结果：各水厂自来水及源水和对照组除了Ｗ－水厂自来水外,都没有显著性差异。③ＳＣＥ率：高浓度组（０．０６２５Ｌ／ｍｌ）的滇池源水及Ｗ－水厂自来水和低浓度组（０．０３１２５Ｌ／ｍｌ）的Ｗ－水厂自来水同对照组相比,有极显著性差异。低浓度组滇池源水和高浓度组的Ｅ－,Ｓ－水厂自来水有显著性差异。     

职业性接触砷、铅工人外周淋巴细胞染色体畸变和姐妹染色单体交换率的变化

本实验以个旧云南锡业公司某矿坑下作业工人和某冶炼厂尿砷,尿铅超标工人为检查对象,初步探讨了污染与人类染色体损伤的关系,结果是使以上受检对象的外周淋巴细胞的染色单体断裂率、裂隙率、畸变细胞率和姐妹染色单体交换率都明显增高,与对照组相比差异显著。尿铅和尿砷超标工人外周淋巴细胞的染色体畸变和姐妹染色单体交换率分别与对照组相比,经统计学处理差异显著(P<0.05),且随着砷、铅在体内蓄积量的增加而有上升的趋势,表明砷、铅污染是引起人类染色体损伤的一个因素。     

Na2SeO3对蚕豆根尖细胞遗传损伤作用的研究

采用蚕豆根尖微核实验和姊妹染色单体交换实验,研究亚硒酸钠(0.01～10.0 mg·L-1)对蚕豆根尖细胞的遗传损伤效应.结果表明一定浓度的亚硒酸钠(Na2SeO3)可导致蚕豆根尖细胞有丝分裂指数下降,间期细胞微核频率明显增高,且Na2SeO3的上述效应具有一定的剂量效应关系;同时Na2SeO3可诱导细胞姊妹染色单体交换(SCE)频率显著增高.研究表明,亚硒酸钠对蚕豆根尖细胞具有遗传毒害作用,并有可能对人体产生遗传损伤.     

石油化学工人的细胞遗传学研究——Ⅱ.姐妹染色单体交换(SCE)和细胞生长周期的研究

本文研究了180名某大型石油化工企业工人和180名对照组的SCE频率及其细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ周期的比率,结果表明,石化工人的SCE频率和细胞各周期比率与对照组无显著差异,即这两个地区由环境因子引起的这种细胞遗传效应差异不显著,表明它们有较相似的环境背景。但是,在石化企业中,两个污水处理车间工人的SCE频率明显地高于对照组和4个生产车间的工人,其细胞生长速率也明显地迟缓,揭示石化物质对人体有一定的细胞遗传效应,而且这种效应与人体所接触的石化物质浓度有关。     

高剂量辐射的中药诱发小鼠骨髓微核和黑麂细胞姐妹染色单体交换的观察

已知6×10~5拉德~(60)Coγ-线照射天麻、当归和党参,能有效地杀虫防霉而药效不受影响。但大剂量照射中药有无可能产生副作用,特别是长期的遗传影响,仍有疑问。我们以常用的小鼠骨髓细胞微核测定和离体细胞的姐妹染色单体交换(SCE)为指标,研究天麻、当归和党参经大剂量照射后,诱变活性有无变化,旨在评定中药辐射保存的安全性。     

非诱变剂对姐妹染色单体交换的诱导效应

检测了１６种非诱变剂对大麦根端分生细胞姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）的影响及其中９种成份对人外周血淋巴细胞ＳＣＥ的影响。在大麦细胞中,用高浓度的葡萄糖、氯化钠、维生素、氨基酸及脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰ）处理均能显著提高ＳＣＥ频率。维生素、氨基酸和ｄＮＴＰ对人外周血淋巴细胞中的ＳＣＥ频率也有显著影响,实验结果表明,不只是诱变剂能提高ＳＣＥ频率,非诱变剂在一定高剂量时也能提高ＳＣＥ频率。非诱变剂影响Ｓ     

减毒麻疹活疫苗对小鼠的细胞遗传学效应

本文以C57BL/6J小鼠为材料,以骨髓细胞微核、染色体畸变和生殖细胞微核、染色体畸变为指标,对国产减毒麻疹活疫苗的遗传安全性进行评价。结果表明,麻疹疫苗可引起小鼠骨髓微核细胞率、染色体畸变率以及精细胞微核细胞率明显升高,与接种剂量和接种后的时间有关;生殖细胞染色体畸变和对照比无显著性差异。     

秋水仙素对洋葱根尖细胞的诱变效应

通过三种浓度的秋水仙素对洋葱根尖进行控时处理,结果发现,该药剂能使洋葱根尖细胞有丝分裂指数下降,促进洋葱根尖膨大,导致染色体加倍,并产生畸变细胞。     

昆明山海棠遗传毒性评价——1.致突效应的研究

本文报道了中药昆明山海棠在Ames试验、人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE)及小鼠骨髓细胞染色体结构畸变分析中的遗传毒性效应。结果发现,昆明山海棠根部水提取物(THH)(200-800mg/皿)及乙醇抽提物(ATH)(100-200mg╱皿)在TA97、TA100均不同程度地诱发突变。THH在人体外周血淋巴细胞中显著诱发SCE(0.313-0.625mg/ml)。在小鼠骨髓细胞染色体结构分析中,THH未表现出明显的染色体断裂效应(2.5-14.3g/kg)。结果暗示,昆明山海棠对人类遗传物质具有潜在威胁,其临床应用应持谨慎态度。     

重铬酸钾对蚕豆根尖细胞致畸效应的研究

以蚕豆根尖为材料,研究重铬酸钾对蚕豆根尖细胞的致畸效应。采用蚕豆根尖细胞的微核试验和染色体畸变试验方法,以不同浓度的重铬酸钾为诱变剂,测定蚕豆根尖细胞的微核率和染色体畸变率。结果表明:重铬酸钾能诱发较高频率的微核率,即在一定浓度范围内,其微核率随重铬酸钾处理浓度的升高而增加,但高于一定浓度后反而呈下降趋势;不同浓度的重铬酸钾均使蚕豆根尖细胞有丝分裂指数增大;重铬酸钾还能诱导蚕豆根尖细胞产生较高频率的染色体畸变,且产生多种类型的染色体畸变。结论是重铬酸钾对蚕豆根尖细胞具有明显的致畸效应。     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

玉米赤霉烯酮在小鼠体内的致突变性研究

用小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验评价了赤霉病麦毒素之一玉米赤霉烯酮的体内致突变效应。玉米赤霉烯酮的试验剂量为0,0.1,1.0,10.0,100.0mg/kg体重,以环磷酰胺为阳性对照。实验结果表明,玉米赤霉烯酮各试验剂量组的微核发生率和染色体畸变率与阴性对照组相比均无显著性统计学差异,亦未发现有明显的性别差异。     

玉米赤霉烯酮在小鼠体内的致突变性研究*

用小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验评价了赤霉病麦毒素之一玉米赤霉烯酮的体内致突变效应。玉米赤霉烯酮的试验剂量为0,0.1,1.0,10.0,100.0mg/kg体重,以环磷酰胺为阳性对照。实验结果表明,玉米赤霉烯酮各试验剂量组的微核发生率和染色体畸变率与阴性对照组相比均无显著性统计学差异,亦未发现有明显的性别差异。     

人抗药基因在小鼠ES细胞中的表达及嵌合体小鼠的研究

本文用磷酸钙沉淀法将含人mdrl 基因表达质粒(pHaMDR 1/A)转染到小鼠胚胎干细胞(ES-5),得到了四个能稳定地在含有200 ng/ml 秋水仙素培液中生长传代的细胞克隆。经Southern 印迹杂交及RNA 印迹杂交证明人mdrl 基因已整合到ES 细胞基因组,并有表达。其中两个克隆杂交信号较强,抗药基因可随秋水仙素浓度提高而扩增,表达量也随之增加。用抗该基因编码的p170糖蛋白抗体对ES-mdr 1细胞作免疫荧光染色,证实p170蛋白分布于细胞表面。未发现ES-mdr 1细胞的体内、外发育潜能与亲代细胞的有何差异。但是mdr1细胞不能被RA 和HMBA 化学药物诱导分化,表明这些细胞已与亲代ES-5细胞不同,具有拮抗化学药物诱导分化的作用,其机理尚待研究。因此,ES-mdr1细胞可作为在细胞水平研究p170糖蛋白作用机理的体系,也可用以建立体外筛选拮抗抗约基因作用新手段的模型。我们也得到了含人mdr1基因的嵌合小鼠,并对它们的嵌合情况作了分析。     

棉酚对大鼠前列腺细胞增殖的影响

我们从体内及体外二个方面研究了棉酚对大鼠前列腺细胞的影响。在体内研究中,给成年SD大鼠口服棉酚对其前列腺作组织学观察;在体外研究中,将棉酚溶液直接加入培养系统中,对包括组织学结构、细胞生长速度、DNA合成状态及细胞分裂周期等多项指标进行分析。实验结果指出,在形态学上,经棉酚处理的大鼠前列腺的体积及重量均下降,与对照组有明显差异;二组前列腺的腺泡在组织学结构上也有明显不同:对照组前列腺的腺泡中充满突出的褶襞,由饱满的立柱形的上皮细胞构成这些褶襞及腺泡壁;而在实验组的腺泡中褶襞较少,构成褶襞及腺泡壁的为方形或扁方形的细胞。而腔内具有褶襞的腺泡总量实验组低于对照组约14%。根据体外实验的结果,可见随着棉酚浓度的增加,细胞增殖水平和DNA合成水平也相应下降,而呈剂量及时间的相关效应,其中10μg/ml的剂量能引起最大的抑制作用。根据对细胞分裂周期的分析,在棉酚组细胞进入S期的比例仅为全部细胞的31%,而对照组则为41%,这进一步说明了由于棉酚阻碍细胞进入S期从而抑制了细胞的增殖。     

维胺酸对体外转化人支气管上皮细胞及体内构建人支气管上皮组织的抑制作用

癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细胞系以及在大鼠气管构建后移植到裸鼠体内生长的具有癌前病变特点的人支气管上皮组织的抑制作用,采用上皮细胞无血清培养技术,人支气管上皮组织大鼠气管内构建／裸鼠皮下移植生长技术,流式细胞学分析,免疫组化、凋亡细胞原位末端标记以及病理学检查等研究方法发现,维胺酸可抑制体外培养的转化人支气管上皮细胞的增殖,使S期细胞比例下降,以及细胞增殖标志Ki-67、mpm-2阳性反应细胞比例下降;明显诱导细胞凋亡。裸鼠腹腔注射给予维胺酸也可使大鼠气管内构建后移植到裸鼠体内生长的癌前期人支气管上皮组织的生长率明显降低,病变程度明显减轻;同样可以诱导细胞凋亡。研究结果提示,维胺酸对体外培养的转化人支气管上皮细胞系及大鼠气管构建／裸鼠体内移植生长的人支气管上皮组织均有明显的抑制作用,是有希望的肺癌化学预防药物。     

成年猴雪旺细胞的在体增殖和体外迁移的研究

为了探讨成年猴雪旺氏细胞的在体增殖和体外迁移的能力,我们对用神经结扎术结扎的A组6只3-13岁雄性恒河猴的腓肠神经进行植块培养,部分细胞培养在聚酯纤维上,2-4周后作抗S-100抗体免疫组化染色和电镜观察;B组2只未做结扎的新生猴腓肠神经培养作为对照.结果显示A组雪旺氏细胞平均在培养的第5天从神经段中迁出,年幼者早于成年猴;细胞在纤维上以螺旋状向前迁移;雪旺氏细胞抗S-100蛋白抗体染色阳性;电镜显示,雪旺氏细胞包卷纤维,但是,未见髓鞘形成.B组神经段培养2周仍无雪旺氏细胞迁出.研究表明,结扎神经使其发生瓦勒氏变性,经植块培养、纯化,能够获得可用于移植的成年猴的雪旺氏细胞.     

体外化学诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

为了探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及化学诱导向心肌细胞分化的过程及条件,我们用1.073g/mL密度梯度离心法分离健康人骨髓单个核细胞,经骨髓间充质干细胞培养基传代培养后用流式细胞仪检测细胞表面抗原,在完全培养基中分别加入3、5、10μmol/L的5氮胞苷(每组n=5)进行化学诱导分化,阴性对照组采用完全培养基培养,诱导后21天细胞爬片免疫荧光法鉴定,透射电镜观察细胞超微结构。结果显示人MSCs为形态均一的梭形细胞,生长旺盛时呈旋涡样分布,流式细胞仪检测细胞表面CD44阳性,CD34、CD45阴性;5、10μmol/L的5氮胞苷进行化学诱导后细胞形态变长,诱导后14天时20%-30%细胞融合形成多核肌管样结构,3μmol/L组MSCs未出现肌管结构,诱导后21天5、10μmol/L组MSCs中desmin、心肌早期转录因子GATA4、心肌特异性cTnI及闰盘蛋白connexin43的表达阳性,10μmol/L组cTnI阳性染色细胞数目(65.3±4.7%)高于5μmol/L诱导组(48.2±5.4%)(p<0.05);3μmol/L组及阴性对照组无心肌特异性蛋白的表达。细胞诱导后28天透射电镜下可见肌丝形成。本实验说明,人MSCs在体外经化学诱导可分化为心肌样细胞,而且5-氮胞苷对于心肌相关蛋白的表达呈浓度依赖性正相关。     

用体外免疫的人淋巴细胞建立抗破伤风类毒素的杂交瘤克隆

我们应用破伤风类毒素体外免疫的人扁桃体细胞和人-鼠异源骨髓瘤RF 系细胞进行融合,从中筛选到一株杂交瘤细胞89112—50,并通过克隆化筛选获得了两个亚克隆,其分泌的抗体是抗原特异的,和三种抗原(OVA、TC-S、FYG)都不交叉,分泌抗体的功能也比较稳定,在培养瓶内连续扩增传代13次后,仍维持相当高的抗体分泌能力,在常规传代培养过程中所收集的培养物上清液中抗体的含量平均为69.6μg/ml。     

体外诱发抗体生成过程中淋巴细胞的变化

为了了解体外抗体应答中T、B淋巴细胞的变化,以进一步阐明体外抗体应答的细胞学过程,并为完善体外免疫实验系统提供方向和依据,利用荧光激活细胞分选仪(FACS),在本实验室建立的人淋巴细胞体外免疫实验系统的基础上,对体外诱发抗体应答中淋巴细胞的变化进行了分析和研究,得到以下初步结果。一、T细胞所占比例的变化与设置培养物时细胞浓度相关,如果T细胞一开始占比例较大时,其变化为下降,否则其变化为上升。但最终都维持在30%上下。二、CD4~+(T辅助)细胞和CD8~+(T抑制)细胞的变化在扁桃体细胞和脾细胞中有所不同。在两周的培养过程中,前者无论加或不加C.M.(T细胞条件培液)或MTG(混合丝裂原),CD4~+细胞的比例均高于CD8~+细胞;而后者在加了C.M.或MTG后,CD8~+细胞的比例明显上升,但CD4~+细胞却有下降趋势。论文讨论了上述变化与免疫应答强度的可能关系。此外,亮氨酸甲酯(Leu-O-Me)的加入对CD8~+细胞没有影响。三、B淋巴细胞的变化,在培养两周过程中,无论扁桃体还是脾脏来源的细胞,B细胞富集的程度没有发生明显的变化,直至培养结束时,B细胞的比例仍维持在60%左右。T、B细胞间的比例也无明显变化,这表明所建立的体外免疫实验系统对B细胞的存活及其应答的诱发是适宜的。CD19~+B细胞的变化较为明显,其意义目前尚难推测。此外,一般认为CD5~+B细胞是一类分泌自身抗体的细胞,在培养过程中一直处于少数,未见增多。四、对于本实验中设置“框界”(“gating”)的合理性进行了讨论。