毕氏海蓬子光系统Ⅱ颗粒的分离与鉴定

采用去污剂TritonX-100增溶类囊体膜和高速离心的方法,首次分离和纯化了毕氏海蓬子的光系统Ⅱ（photosystemⅡ,PSⅡ）颗粒,通过光谱学和SDS-PAGE对其进行鉴定并与类囊体膜进行比较。室温吸收光谱结果表明,PSⅡ颗粒在蓝区的叶绿素（chlorophyll,ChOb和胡萝卜素类吸收峰为485nm,在红区的Ch1b吸收峰为655nm,这两个峰值均低于类囊体膜中的。77K荧光发射光谱结果表明,提取的PSⅡ颗粒基本不含光系统Ⅰ（photosystemⅠ,PSI）的低温荧光反射峰737nm。77K荧光激发光谱结果显示,海蓬子PSⅡ颗粒在470-485am之间的Ch1b 和胡萝卜素类的荧光发射峰明显低于类囊体膜的。这说明在PSⅡ中大部分的PSI已被除去。电泳结果显示,海蓬子PSⅡ颗粒缺少PSI反应中心蛋白质亚基PsaA和PsaB,这说明提取到的PSⅡ纯度较高,这为进一步研究毕氏海蓬子PSⅡ的结构与功能奠定基础。     

花期海蓬子对盐胁迫的生理响应

研究了花期阶段不同浓度NaCl(0、10‰、20‰、30‰、40‰、50‰和60‰)对海蓬子(Salicornia bigelovii)生长、光合色素、光合作用参数、抗氧化和离子含量的影响.结果表明:10‰NaCl盐处理下海蓬子株高、茎生物量、叶绿素(Chl)含量、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO2浓度(Ci)、茎SOD活性和POD活性等指标值均显著高于其它处理,而高盐(40‰NaCl及其以上)胁迫下,上述指标值均表现为下降,同时茎K+含量也显著下降,而茎Na+、Cl、Na+/K+和MDA含量等显著上升.相关分析显示,生物量与Chl a/Chl b呈现显著正相关,与株高、茎Pn、Gs、Ci、Chl、Chl含量、K+含量、SOD和POD活性呈现极显著正相关,与气孔限制值(Ls)、Car/Chl、MDA含量、Cl含量和Na+/K+等均呈极显著负相关.综上所述,10‰NaCl处理是花期海蓬子生长和光合生长的最适宜盐度,而无盐和高盐下海蓬子光合抑制主要是来自气孔因素,同时高盐胁迫下还伴随着非气孔限制.     

UPLC-MS/MS法同时测定毕氏海蓬子中13个功能成分

利用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法同时测定毕氏海蓬子（Salicornia bigelovii,SB）中没食子儿茶素、表没食子儿茶素、隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、儿茶素、表儿茶素、异绿原酸-B、芦丁、异槲皮苷、褪黑素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮苷13个功能成分的含量。样品利用甲醇提取,过0.22 μm滤膜后上机检测。采用C18 色谱柱 （100 mm × 2.1 mm,1.7 μm）进行分离,以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,流速0.3 mL/min,柱温（35±5）℃,采用电喷雾离子源（ESI）、多反应监测（MRM）进行检测。结果表明：13个功能成分在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数R2均大于0.99,该方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1.0~20.0 μg/kg、2.0~50.0 μg/kg,平均加标回收率在89.10%~109.51%范围内。LC-MS/MS法测定毕氏海蓬子功能成分快速灵敏,准确可靠,可用于毕氏海蓬子中功能成分的检测。     

KCl和NaCl对毕氏海蓬子生长和几种抗氧化酶活性的影响

50-200 mmol·L-1NaCl显著促进海蓬子生长和抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)]活性,与NaCl浓度相同的KCl明显抑制海蓬子生长和此3种酶的活性,但KCl下的超氧阴离子(O2-)和丙二醛(MDA)含量增加程度则明显高于同浓度的NaCI处理.据此认为,KCl伤害海蓬子的原因之一是抗氧化酶活性下降,不能及时清除活性氧,以致活性氧和MDA积累,引起质膜伤害,海蓬子生长受抑和生长量下降.     

电感耦合等离子体原子发射光谱法同时测定药用玻璃砷、锑、铅、镉浸出量

目的:建立电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES法)同时测定药用玻璃包材的砷、锑、铅、镉浸出量。方法:样品浸出液直接用电感耦合等离子体原子发射光谱仪测定。结果:标准曲线线性良好,相关系数在r在0.99996~0.99998之间,方法的检出限砷、锑、铅、镉分别为0.0228mg/L、0.0072mg/L、0.0039mg/L、0.0006mg/L,样品浸出液加标回收率砷、锑、铅、镉分别95.0%、97.4%、95.2%、94.4%,相对标准差在2.3%~4.8%之间。结论:方法准确、简便、快速。     

HPLC法同时测定延胡索不同部位中11种核苷类成分

目的：测定并评价不同产地延胡索药材不同部位中11种核苷类成分的含量。方法：采用高效液相色谱法测定核苷类成分的含量,并对测定结果进行聚类分析。结果：不同产地延胡索中核苷类物质含量由高到低为鸟苷>尿苷>腺苷>肌苷>胞苷>尿嘧啶>2’-脱氧肌苷>2’-脱氧胸苷>腺嘌呤>胸腺嘧啶>2’-脱氧腺苷,11种核苷总含量整体表现为叶>茎>块茎,不同产地延胡索核苷类总含量由高到低为浙江磐安>浙江东阳>陕西汉中>重庆万州>重庆开州,块茎中的11种核苷成分含量比无显著性差异,但茎和叶差异较大。结论：此方法可用于延胡索不同部位中核苷类成分的测定,为其综合利用提供思路。     

HPLC梯度洗脱同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量

目的:建立一种同时测定牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量的HPLC梯度洗脱法。方法:采用Dionex Summit高效液相色谱系统,ODS C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0ml/min,测定波长280nm,柱温30℃下对牛蒡子液体制剂中牛蒡子苷和牛蒡子苷元进行含量测定。结果:牛蒡子苷进样浓度在0.098～0.98mg/ml、牛蒡子苷元进样浓度在0.0304～0.304mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9997、r=0.9995),平均回收率分别为100.80%,RSD为1.9%(n=6)和98.6%,RSD为2.3%(n=6)。结论:该方法准确可靠、重现性好,可用于牛蒡子液体制剂的含量测定。     

UPLC法同时测定不同种类桑枝中5种黄酮类成分含量

黄酮类成分具有较好的降血压降血脂作用,为了解桑枝中芦丁、桑色素、山柰酚、异槲皮苷、桑辛素等黄酮类成分的含量情况,采用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography, UPLC)对重庆9个产地、3个种类(桑、鸡桑、华桑)的18批桑枝进行黄酮成分的测定。实验结果显示,芦丁、桑色素、山柰酚、异槲皮苷、桑辛素在各自质量浓度范围内,峰面积和浓度呈现出良好的线性关系,相关系数R为0.999 5～0.999 8。18批桑枝中均检测出5种黄酮类物质,但其在含量上存在较大差异,五种黄酮类成分的平均含量由高到低为桑辛素>桑色素>芦丁>异槲皮苷>山柰酚,含量最高的桑辛素平均含量为135.154μg/g,含量最低的山柰酚平均含量为6.929μg/g。不同种类桑枝中5种黄酮类物质含量差异较大,华桑中黄酮总含量最高。本研究能为深入研究桑枝的药用价值提供理论依据以及数据资料参考,为临床上降血压降血脂的治疗提供药物来源参考。     

HPLC法同时测定千斤拔属植物7种黄酮的含量

目的:测定千斤拔属7种植物中的7种黄酮类的含量,为千斤拔类药材质量控制提供依据。方法:色谱条件为Hedera C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm):流速1.2 mL/min,流动相为0.5%HAc水和乙腈梯度洗脱,柱温35℃,检测波长263 nm。结果:七种黄酮类成分在90 min内达到现行分离,线性关系良好(,R2>0.9995),日内、日间精密度、稳定性和重复性的RSD≤3.0%。该法成功的应用于千斤拔药材7种黄酮的评均回收率分别为96.94%～105.29%(RSD≤2.98%)结论:本方法准确、快速、重现性好,不同品种的千斤拔药材质量存在差异,可以为研究千斤拔药材的质量标准提供依据。     

高效液相色谱法同时测定荷叶中6种黄酮类成分

为了探索同时测定荷叶茶及饮片中6种黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈素和异鼠李素)含量的方法,本研究以8种不同的荷叶样本为材料,采用高效液相色谱分析法对6种黄酮类成分进行了同时测定。样品经过前处理,以0.5%甲酸-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为25℃,进样量为20μL,经Agilent TC-C18(2)(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱分离,于360nm波长处检测,结果显示,芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素6种黄酮类成分分别在1.6~160、1.8~180、2.16~216、1.4~140、2.12~212、1.6~160μg/mL浓度范围内有良好的线性关系(R20.9992),其检测稳定性、重复性、日内精密度、日间精密度以及加样回收率的RSD均小于2%。进一步用该方法对不同来源的8个荷叶样本进行检测,结果显示荷叶样本中6种黄酮类成分含量以槲皮素最高,并且以样本G荷叶茶(购自G公司,批号为130802)的槲皮素含量最高。本研究建立的同时测定6种荷叶黄酮类成分含量的方法快速、准确,可为荷叶有效成分的检测和质量控制提供技术支撑。     

微波消解ICP-AES法测定糙苏不同部位中的微量元素

利用微波消解电感耦合等离子发射光谱(ICP-AES)法测定野生中药糙苏根、茎、叶、花和籽中钠、钾、钙、铁、锌、镁、锰、铜、镍、钼、铅和镉的含量,并进行了分析比较。糙苏不同用药部位的微量元素含量存在差异,其中钠、钾、钙、铁、镁在根、茎、叶、花和籽中的含量均较高,锌、锰、铜、镍、钼的含量较少,铅和镉只在根和茎中痕量存在,结果表明糙苏中含有大量人体必需的微量元素,可为进一步探讨糙苏中元素含量与其药效的相关性提供科学的理论依据。     

毕氏海蓬子SbDREB基因的克隆与表达分析研究

以毕氏海蓬子的基因组为模板,通过PCR技术扩增到一个编码DREB蛋白AP2保守结构域的基因片段;根据该片段序列设计引物,以毕氏海蓬子经NaCl处理的植株肉质茎cDNA为模板,应用RACE技术获得该基因的cDNA全长,命名为SbDREB(GenBank登录号:JF894301)。SbDREB基因cDNA全长1206bp,包含一个编码284个氨基酸的完整开放阅读框。对氨基酸序列比对分析表明,该蛋白在靠近N端具有典型的AP2/EREBP保守结构域,且该结构域与一些高等植物DREB类转录因子的AP2区域具有高度同源性。进化树分析表明SbDREB属于DREB亚家族中的A-6亚族。实时荧光定量PCR结果显示:干旱、高盐和ABA能够诱导其表达,而低温则使其表达下调,表明该基因在毕氏海蓬子植株对干旱、盐和低温等非生物胁迫的应答中起作用。     

紫菀根中矿质元素及氨基酸质量分数的测定

采用原子吸收分光光度法和高效液相色谱法测定了紫菀根中的矿质元素和游离氨基酸的质量分数。矿质元素Cu、Zn、Fe、Mg、Ca、Mo、Mn、Se的质量分数分别为 42 .89、5 8.14、92 0 .93、2 5 48.2 5、392 5 .43、0 .6 5、5 2 .18mg·Kg- 1 、<0 .0 0 0 5mg·Kg- 1 ;氨基酸 :天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、苏氨酸、组氨酸 +精氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸的质量分数分别为 2 6、17、40、36、190、36、37、80、8.7、4.5、13、41mg·Kg- 1 。     

盐度和温度对北美海蓬子在厦门海区引种以及生长特性的影响

研究了厦门海区盐度和温度对北美海蓬子（Salicornia bigelovii）种子萌发和幼苗生长的影响。结果显示,海蓬子种子对温度变化反应非常敏感,在15°C时发芽率最高（94%）,但萌发指数最低,而在20°C时萌发指数最大;在盐度5g·L^-1时种子具有最高的发芽率和萌发指数,在盐度50g·L^-1时仍有13.3%的发芽率,并且各种盐度处理下逐日萌发指数均能在2天内达到最大。盐度10-20g·L^-1最适宜幼苗生长,高盐（〉30g·L^-1）具有一定的抑制作用,主要表现为生长缓慢,含水量和根系活力下降,并且根的盐敏感程度大于茎。在不同盐度处理下,北美海蓬子适应一种新的耐盐机制,在无盐（0g·L^-1）和高盐（40g·L^-1）胁迫下,过氧化氢酶（catalase,CAT）和过氧化物酶（peroxide,POD）这2种酶蛋白对盐离子效应敏感,起主要的抗氧化作用;相反,生长在适宜盐度范围（10-30g·L^-1）内,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）维持较高活性。研究结果表明,北美海蓬子适宜在沿海滩涂环境条件下生长,有望作为一种抗盐耐海水蔬菜加以开发和利用,并进一步在污染海水净化修复中发挥可能的生态功能。     

微波消解-FAAS法分析并比较旱芹(Apium graveolens L.)不同部位八种金属元素的含量

采用微波消解法处理旱芹根、茎、叶,并用火焰原子吸收法测定其中的Na、K、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu 8种金属元素的含量。结果表明:旱芹中富含人体必需的Na、K、Mg、Fe、Ca等元素,各元素在不同部位含量有一定差异。Fe元素在旱芹根中含量为883.57μg.g-1,明显高于茎和叶;Ca、Zn和Mn元素在旱芹叶中的含量分别为11 103.74,214.04,88.07μg.g-1,明显高于茎和根;K、Na和Mg元素在旱芹茎中的含量高于根和叶中,Cu元素含量在各部位差异不大。方法的加标回收率为96.8%～105.8%,相对标准偏差(RSD)≤3.36%。     

Reliability of the ICP-AES for trace elements studies of biological materials

In order to investigate the reliability of the Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometer (ICP-AES) for trace element analysis of biological materials, we have carried out extensive investigations on human plasma, using an Applied Research Laboratory’s ICP-AES. When we aspirated the untreated plasma into the spectrometer, we obtained unreliable and nonreproducible results. However, when we pretreated the plasma by wet digestion (to destroy all the organic material), we achieved reproducible and consistent results. It is, therefore, suggested that biological samples should be pretreated, preferably by wet digestion, before being aspirated into the ICP-AES for analysis.     

玉米黑粉菌孢子粉的无机元素和氨基酸含量测定

对玉米黑粉菌(Ustilago maydisDC.Corola.)孢子粉的无机元素和氨基酸含量进行了测定。结果表明:玉米黑粉菌孢子粉含有丰富的无机元素,其中铁、钙、镁、磷、锌、锰含量分别为100μg/g、3 561μg/g、1 382μg/g3、500μg/g、101μg/g和24μg/g;同时含有8种必须由食物蛋白质提供的氨基酸,以苏氨酸含量最多,为340.18 mg/100 g。     

空气重金属元素在悬铃木叶中的亚细胞分布及其区隔化效应

以南京市常见行道树二球悬铃木为试材,研究了交通繁忙区和相对清洁区道路两边悬铃木叶内6种重金属元素的亚细胞分布及其区隔化效应.结果显示:交通污染区悬铃木叶内各亚细胞组分中Cr、Cu、Ni、Pb和Zn 5种重金属元素的含量均明显高于对照区,交通空气污染是影响其含量增加的主要原因之一.相对清洁区和交通污染区5种重金属元素在悬铃木叶片、叶柄的细胞壁组分中含量最高,胞外隔离系数和污染指数均大于0.900,细胞壁是大气重金属元素重要的吸滞器官,并对重金属有明显的阻隔效应;胞内细胞器对Pb和Cu的隔离系数和污染指数最大,细胞器双层膜能在一定程度上抵御重金属元素进入细胞内.悬铃木叶片和叶柄亚细胞组分的污染指数表现为胞质组分＞细胞壁组分＞细胞器组分,即包括液泡液在内的胞质组分是囤积重金属元素的场所.研究表明,悬铃木叶片、叶柄各亚细胞组分对重金属均有不同程度的累积能力,叶内胞质组分的囤积作用以及细胞壁、质膜与细胞器双层膜的区隔化作用可能是悬铃木叶解除重金属元素毒害的重要原因.     

微波消解-FAAS法测定普通甘薯和紫甘薯中的金属元素

采用微波消解法处理普通甘薯和紫甘薯样品,运用火焰原子吸收光谱法测定其中的K、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu 7种对人体有益的金属元素含量。结果表明,普通甘薯和紫甘薯中K、Ca、Fe、Mg元素含量较高,Mn、Zn、Cu元素含量较低,且7种金属元素含量在两者之间存在一定的差异,各元素在紫甘薯中的含量均比普通甘薯中含量高。方法的加标回收率介于98.5%～103.2%,相对标准偏差(RSD)不大于3.14%。可为普通甘薯与紫甘薯的品质评价提供理论参考。     

蚕蛹、蝎子、海肠中20种元素的ICP-AES测定和氨基酸含量测定

采用ICP-AES法直接快速测定蚕蛹、蝎子、海肠中20种元素含量,本法简单快速,灵敏度高,检出限低,精密度好,RSD为1.4%~6.8%。是同时检测食物中多元素的理想方法。与其它食物比较,这几种食物的钙、锰、铁、锌、铜、镁、钠、钾等元素含量极为丰富。用氨基酸测定仪测定了这几种食物中氨基酸和牛磺酸的含量,为它们的营养研究提供了理论依据。