丙型肝炎病毒非结构区NS4b基因片段的克隆和表达

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和ＤＮＡ体外重组方法,克隆出５７９ｂｐ的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ４ｂ基因片段,插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－２８ａ中,构建重组质粒ｐＥＴ／ＮＳ４ｂ,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株,经ＩＰＴＧ诱导培养后,获得了目的蛋白的高效表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在３０ｋＤ处有一条表达的目的蛋白区带。通过固定化金属配体亲和层析（ＩＭＡＣ）纯化目的的蛋白,ＥＬＥＳＡ检测结果表     

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆和乳酸乳球菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人肝总ＲＮＡ中分离扩增了０．４５ｋｂ的人铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ）基因的ｃＤＮＡ序列,首先克隆至大肠杆菌表达质粒ｐＥＴ２３ｂ,进行了序列测定和超高表达,将Ｃｕ／Ｚｎ,ＳＯＤｃＤＮＡ亚克隆至乳酸乳球菌表达载体ｐＭＧ３６ｅ,用电穿孔法将重组质粒ｐＭＧ３６ｅｓｏｄ转化到乳酸乳球菌,获得Ｃｕ／Ｚｎ ＳＯＤ的组成型表达,其表达量约占乳酸乳球菌可溶性蛋白的５％以上,活性染色表     

产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因的克隆

当酵母细胞处于高渗压环境时,甘油被诱导合成以提高其胞内渗透压,这一过程受ＨＯＧ途径的调控。ＧＰＤ１基因为ＨＯＧ途径的重要靶基因,高效表达使胞内３磷酸甘油脱氢酶酶活水平提高可极大地提高甘油的产量。本研究将产甘油假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｏｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）染色体ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ部分酶解后的５～１０ｋｂＤＮＡ片段与经ＢａｍＨＩ线性化及ＣＩＰ处理过的酵母大肠杆菌穿梭质粒ＹＥｐ５１连接,以大肠杆菌ＤＨ５α为受体,构建产甘油假丝酵母的染色体基因文库。通过遗传互补法,在含５０ｇ／Ｌ氯化钠的培养基上筛选出１５个转化子,对转化子０６０１进行了进一步鉴定,转化子０６０１所含质粒ＹＥｐ０６０１带有ＹＥｐ５１的标记并可以消除Ｓａｃｃｂａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ６４２菌株由于其ＧＰＤ１,ＧＰＤ２两基因的缺失突变而表现出的渗透压敏感性,表明已克隆到产甘油假丝酵母的编码胞浆３磷酸甘油脱氢酶的基因     

产气肠杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性？…

用ＰＣＲ方法从产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）中克隆出０．９ｋｂ的ＤＮＡ片段,经ＤＮＡ测序证明是α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,α－ＡＬＤＣ）基因。将α－ＡＬＤＣ基因重组到质粒,ｐＢＶ２２０后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。     

可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体(shTNFR55)在变铅青链霉菌中的分泌表达

从 Ｈｅ Ｌａ 细胞中提取总 Ｒ Ｎ Ａ,采用反转录 Ｐ Ｃ Ｒ 技术,从该总 Ｒ Ｎ Ａ 中扩增了约 ５３０ ｂｐ 的ｓｈ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ５５ 基因的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ,并克隆至质粒 ｐ Ｕ Ｃ ｍ ｅｌ中酪蛋白酶 ｍ ｅｌ Ｃｌ 分泌信号肽编码序列的下游,构建成含融合基因 ｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ 的重组质粒 ｐ Ｕ Ｃ ｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ．把融合基因 ｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ 插入链霉菌表达质粒 ｐ Ｉ Ｊ４５９ 的多克隆位点,使之位于 ｅｒｍ 强启动子的下游,得到重组表达质粒 ｐ Ｉ Ｊ４５９ ｍ ｅｌ／ｓ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ．经 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交证明重组质粒 ｐ Ｉ Ｊ４５９ ｍ ｅｌ／ｓ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ 插入了 ｓ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ５５ 基因片段．对重组菌株 Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ（ｐ Ｉ Ｊ４５９ ｍ ｅｌ／ｓ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ）的发酵液进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、受体配基杂交（ Ｌｉｇａｎｄ ｂｌｏｔ）分析、对 Ｔ Ｎ Ｆ 敏感的 Ｌ９２９ 细胞的细胞毒性中和试验表明,可溶性肿瘤坏死因子受体 ｓ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ５５ 在链霉菌中得到了分泌表达,表达产物具有生物学活性．表达产物的分子量约在 ２６～２８ ｋ Ｄ 之间．     

人肿瘤坏死因子基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达

以质粒ｐＩＪ４８６为载体,将来源于质粒ｐＨＴ１的肿瘤坏死坏因子（ＴＮＦ－ａ）ｃＤＮＡ克隆至变铅青链霉菌,以新霉素（３０μｇ／ｍｌ）为选择标记,获得了数百转化子,实验表明Ｎｏ．７转化子ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ ＴＫ５４－ＨＴ所含重组质粒ｐＩＪＴ７已克隆有ＴＮＦｃＤＮＡ。Ｌ９２９细胞毒实验结果表明该转化子ＴＮＦ表达量可达１０＾８活性单位／升以上,中和实验确证其表达产物为人ＴＮＦ－ａ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明克     

大肠杆菌JM83精氨酰－tRNA合成酶基因的克隆、测序及表达

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板,扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中,得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ的氨酰化活力,ＴＧ１和ＴＧ１转化子分别为１．６５Ｕ／ｍｇ和２１０Ｕ／ｍｇ,后者为前者的１２７倍。ＤＮＡ顺序测定表明,与从大肠杆菌ＪＡ２００中克隆到的ＡｒｇＲＳ基因相比９１３位碱基为Ａ而不为Ｃ,这种变化使ＡｒｇＲＳ的３０５位氨基酸残基由Ｇｌｎ变为Ｌｙｓ,但这种改变不影响酶的活力。     

汉滩病毒S基因及其5‘端真核表达载体的构建及在细胞中的表达

体外研究汉滩病毒（ＨＴＮＶ）Ｓ基因及其５'端表达的意义,为核蛋　白Ｔ细胞表位的研究奠定基础。设计２套引物,用ＰＣＲ方法从ＰＢＶ２２０－Ｓ２２原核质粒中扩增出Ｓ　基因全读码框（３７－１３２６ｂｐ）及Ｓ基因５'端（３７－５０１ｂｐ）,用ＴＡ克隆将其克隆入ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５－Ｈｉｓ－ＴＯＰＯ载体中,成功构建ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体,并通过脂质体转　染至Ｖｅｒｏ细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ在Ｖｅｒｏ细胞中的表达。ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体有较高的转染效率,目　的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究ＨＴＮＶ－Ｓ基因在Ｔ细胞表位研究中的意义。     

利用Tn5gusA5对大豆慢生根瘤菌lrp基因的诱变

通过对重组质粒ｐＧＸＮ３００中的 ２．３ｋｂ ＥｃｏＲＩ片段测序分析发现,其上有一完整的ｌｒｐ基因和部分 ｐｕｔＡ基因,与 Ｋｉｎｇ ＮＤ等［１］报道的 Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ的ｌｒｐ基因ＤＮＡ序列有 ８８％同源性。利用 Ｔｎ５ ｇｕｓＡ５定位 诱变方法,对质粒ｐＧＸＮ３００进行插入诱变,得到２．３ｋｂ　ＥｃｏＲＩ片段上有Ｔｎ５ｇｕｓＡ５插入位点的质粒ｐＧＸＮ３００－ Ｔ３８,将ｐＧＸＮ３００－Ｔ３８转移到大豆馒生根瘤苗（Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）ＧＸ２０１中,得到的ＧＸ２０１转移接合子与不相容 质粒ｐＰＨ１ＪＩ发生同源双交换。通过抗性及ｇｕｓＡ活性检测,筛选到一ｌｒｐ基因突变株。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析证 明这突变株的 Ｔｎ５ ｇｕｓＡ５插入确实是同源交换而不是转座产生,表明 Ｔｎ５ ｇｕｓＡ５ 诱变可以应用于大豆慢生根 瘤菌中的突变林筛选。     

产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因的克隆

当酵母细胞处于高渗压环境时,甘油被诱导合成以提高其胞内渗透压,这一过程受ＨＯＧ途径的调控。ＧＰＤ１基因为ＨＯＧ途径的重要靶基因,高效表达使胞内３磷酸甘油脱氢酶酶活水平提高可极大地提高甘油的产量。本研究将产甘油假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｏｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）染色体ＤＮＡ经Ｓａｕ３ＡＩ部分酶解后的５～１０ｋｂＤＮＡ片段与经ＢａｍＨＩ线性化及ＣＩＰ处理过的酵母大肠杆菌穿梭质粒ＹＥｐ５１连接,以大肠杆菌ＤＨ５α为受体,构建产甘油假丝酵母的染色体基因文库。通过遗传互补法,在含５０ｇ／Ｌ氯化钠的培养基上筛选出１５个转化子,对转化子０６０１进行了进一步鉴定,转化子０６０１所含质粒ＹＥｐ０６０１带有ＹＥｐ５１的标记并可以消除Ｓａｃｃｂａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ６４２菌株由于其ＧＰＤ１,ＧＰＤ２两基因的缺失突变而表现出的渗透压敏感性,表明已克隆到产甘油假丝酵母的编码胞浆３磷酸甘油脱氢酶的基因     

用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因

用ＰＣＲ技术,从ＧＡ株马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染的成纤维细胞（ＧＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因片段的约１３００ｂｐ编码序列,将该ｐｃＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和Ｋｐｎｌ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中,在以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记的ｇＤＰＣＲ产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含ＭＤＶｇＤ基因的重组质粒ｐ１８ＭｇＤ。将ｐ１８ＭｇＤ质粒ＤＮＡ用ｄｉｇ标记后,在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中,该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ－Ａ克隆中的Ａ片段ＤＮＡ。酶切位点分析表明,该ｇＤ克隆也和已发表的ＭＤＶ的ＲＢＩＢ株ｇＤ一样,不含有ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ｐｖｕⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是ＭＤＶｇＤ克隆。     

SINPV p10基因簇的序列及结构特征分析

以病毒感染后期的ｃＤＮＡ为探针,将ＳｌＮＰＶ ｐ１０基因杂交定位于基因组ＤＮＡ的ＢａｎＨＩ－３．０ｋｂｐ片段上。ＳＩＮＰＶ ｐ１０基因长３１８ｎｔ,编码一１０５ａａ的Ｐ１０蛋白,为目前发现的最长的ｐ１０基因;基因的启动子内含有两个ＡＴＴＧＴＡ模体（ｍｏｔｉｆ）,是目前发现的ｐ１０基因中唯一含有两个Ａ／ＴＴＴＧＴＡ模体者。ＳＩＮＰＶ Ｐ１０蛋白含有１０个七肽重复单元,可形成一个相对较长的卷曲螺旋。Ｓ     

水稻D1snoRNA及其基因的鉴定和功能分析

测定和比较了籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）、粳稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）和多年生野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＷ．Ｇｒｉｆｉｔｈ）ｈｓｐ７０基因第一个内含子中Ｄ１ＤＮＡ以及部分上游序列,并通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ｃＤＮＡ序列分析对Ｄ１ＤＮＡ编码的Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ进行了实验鉴定。Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它与水稻２５ＳｒＲＮＡ互补序列为１４个核苷酸长。根据理论计算,Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ具有指导水稻２５ＳｒＲＮＡ中第８０７位的核糖甲基化功能。Ｄ１ＤＮＡ与Ｃ１ＤＮＡ相隔仅１０５个核苷酸,在内含子中如此短的距离内连续编码两种ｓｎｏＲＮＡ是罕见的,这一结构为研究串联结构的ｓｎｏＲＮＡ转录后加工机制提供了一个良好的研究体系。     

niaD基因与uidA基因共转化糖化酶高产菌株Aspergillus niger T21

从AspergillusnigerT21分离到自发性的氯酸盐抗性株,再经氮源生长试验获得硝酸盐还原酶缺陷的niaD突变体N44。用含有niaD的质粒pSTA10转化N44,转化频率为5个／μg（转化子／DNA）。转化子的Southern印迹分析表明niaD基因同源整合到N44的染色体DNA中。pSTA10与含葡糖苷酸酶基因（uidA）的质粒pNOM102共转化N44,共转化频率为40％。共转化子的GUS（葡糖苷酸酶）活力测定结果表明uidA基因已在N44中表达。由此可知,以niaD为选择标记,uidA为报告基因,以N44为受体的转化系统可用于丝状真菌启动子功能检测和已知调控序列的功能分析。     

蓝藻的一种人工转化系统研究

本研究用溶菌酶处理ＳｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓＰＣＣ６３０１细胞诱导人工感受态,并用外源质粒ｐＢＲ３２５转化受体细胞表达氯霉素抗性,转化频率接近５×１０￣（－５）转化子／细胞。用转化子ＤＮＡ再进行次级转化,转化频率可达５×１０￣（－４）转化子／细胞。这比以前的研究者对同种藻株,用克隆的ＤＮＡ、通过生理感受态进行转化得到的转化频率要高。ＤＮＡ电泳、次级转化和斑点杂交证明外源质粒通过单交换已经整合到了受体细胞染色体上。这些结果表明,人工转化系统是有效的,并具有可重复性。对于影响转化的一些条件,如ＤＮＡ与细胞保温时间、藻龄、光照或黑暗培养,也同时进行了研究。     

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术,以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板,经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）７０的启动子下游,再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中,得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原,所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见,Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．     

一个高效表达、快速纯化大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶的新系统(英文)

编码大肠杆菌精氨酰ｔ Ｒ Ｎ Ａ 合成酶（ Ａｒｇ Ｒ Ｓ） 的基因ａｒｇ Ｓ 被克隆到ｐ Ｍ Ｆ Ｔ７５ 载体上。将此质粒转化的大肠杆菌 Ｊ Ｍ１０９（ Ｄ Ｅ３） 中, 该转化子粗抽液的比活是宿主菌的２ ５００ 倍。通过 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ Ｌ６ Ｂ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ 和 Ｂｌｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ Ｌ６ Ｂ两步柱层析在一天内即可将精氨酰ｔ Ｒ Ｎ Ａ 合成酶纯化至电泳一条带, 比活为３６ ０００ ｕ／ｍｇ , 总收率可达６９ ％ 。与以前报道的 Ａｒｇ Ｒ Ｓ的高表达质粒相比, 使用该重组质粒可以很方便地将昂贵的标记氨基酸高效地参入酶分子内。目前的研究结果表明,该新系统能够很方便地提供大量的更高比活的大肠杆菌精氨酰ｔ Ｒ Ｎ Ａ 合成酶以进行该酶的 Ｎ Ｍ Ｒ 和结晶学研究     

DMBA、垂体移植诱发性乳腺瘤内172~（Arg－Leu）突变型p53的特性及其与基因重排和扩增关系的研究

ｐ５３最早发现于ＳＶ４０转化的细胞系,后来几乎在所有不同类型的细胞内均检测到这种蛋白质,野生型Ｐ５８是一种有效的肿瘤抑制因子,但突变体ｐ５２可与ｒａｓ－肿瘤基因协同转化体外的腺代细胞,而且在肿瘤发生时常伴随有ｐ５３基因的突变。乳腺癌内,ｐ５３基因的突变率为４０％,并可见到某些肿瘤基因参与癌症的形成过程,暗示ｐ５３基因结构和功能的改变可能与这些基因的重排和扩增有关。本实验选择４种不同年龄的１７２~（Ａｒｇ－Ｌｅｕ）突变型ｐ５３转基因小鼠为受试动物,将同系动物的垂体腺植入小鼠的肾脏后,再以致癌剂ＤＭＢＡ处理,以使动物乳腺内的ｐ５３基因表达和诱导小鼠乳腺癌形成。从乳腺癌小鼠分别摘取乳腺组织,提取ＤＮＡ和ＲＮＡ,以Ｈ－ｒａｓ、ＰＣＮＡ、ＣｙｌｉｎＤ１、ｐ５３基因的ＤＮＡ片段作为特异性核酸探针,进行ＳｏｕｔｈｅｒｍＢｌｏｔｔｉｎｇ和ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分析,以检测在突变体Ｐ５３表达的情况下,ＰＣＮＡ、Ｈ－ｒａｓ、ＣｙｉｎＤ１等基因在体内的变化规律。实验发现,在４组不同的受试动物中,其乳腺癌细胞的ＰＣＮＡ和Ｈ－ｒａｓ两种基因发生了基因重排,特征是其ＤＮＡ标本中分别出现了一条很强的额外杂交带,但对照动物乳腺该类     

α-乙酰乳酸脱羧酶的基因克隆及在大肠杆菌和酿酒酵母中的表达

以ｐＵＣ１９质粒为载体,以Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９为受体,构建了含α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡＬＤＣ）基因的地衣芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＳ１０１０６的基因文库,得到４８００个重组转化子中均含有４～１０ｋｂ的外源插入ＤＮＡ片段,从基因文库中筛选到６个阳性克隆,对其中１个克隆的α－乙酰乳酸脱羧酶基因片段进行亚克隆分析表明,该α－乙酰乳酸脱羧酶基因位于１．６ｋｂ的ＢａｍＨⅠ     

表达barstar基因及bar基因的转基因油菜的研究

从细菌Ｂａｃｉｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ染色体ＤＮＡ中克隆了ｂａｒｎａｓｅ抑制剂ｂａｒｓｔａｒ的基因,构建了带有ＴＡ－２９基因５′调控区（－１３００－＋３）与ｂａｒｓｔａｒ基因编码区、ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与除草剂抗性基因ｂａｒ两个表达框架的植物表达质粒ｐＢＢＳ。以“双低”油菜“５－４”的子叶柄为受体,通过农杆菌介导的遗传转化,获得了在含有１０ｍｇ／Ｌ卡那霉素和２０ｍｇ／ＬＰＰＴ的筛选培养基上再生的转基因植株。ＰＣＲ分析结果表明,ｂａｒｓｔａｒ基因已整合到油菜染色体上;Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,ｂａｒｓｔａｒ基因及ｂａｒ基因在转基因植物中得到了正确的调控与表达。以转基因油菜“５－４”为父本授粉给表达ｂａｒｎａｓｅ基因的雄性不育植株,不育株能正常结实。