蒲公英研究进展和用生物技术培育耐盐蒲公英展望

蒲公英属（Taraxacum）植物种类多,分布广,是常见的农业杂草,还是重要的中药材。目前,蒲公英作为蔬菜食用得到了人们的充分重视,并逐渐成为时尚。近年来,人们深入研究了蒲公英的化学成分和药理作用,关于蒲公英的组织培养、核型与分子水平的研究也已开展,但蒲公英的生物技术培育工作鲜有报道。在对蒲公英的开发利用和研究现状作概述的同时,结合我们的工作提出生物技术培育抗盐、耐海水蒲公英的努力方向,以期为进一步开发利用蒲公英打下基础。     

蒲公英研究进展和用生物技术培育耐盐蒲公英展望

蒲公英属(Taraxacum)植物种类多,分布广,是常见的农业杂草,还是重要的中药材.目前,蒲公英作为蔬菜食用得到了人们的充分重视,并逐渐成为时尚.近年来,人们深入研究了蒲公英的化学成分和药理作用,关于蒲公英的组织培养、核型与分子水平的研究也已开展,但蒲公英的生物技术培育工作鲜有报道.在对蒲公英的开发利用和研究现状作概述的同时,结合我们的工作提出生物技术培育抗盐、耐海水蒲公英的努力方向,以期为进一步开发利用蒲公英打下基础.     

小麦耐盐突变体的RAPD分析

以冀麦２４和其耐盐的一代８９０１－１７为材料,用ＲＡＰＤ技术对其进行比较分析研究。在的用的２１５个引物中有５１个扩增出多态性,既有量的差异又有质的差异,初步断定此５１个引物扩增出的多态性与突变有关,为进一步用ＢＳＡ方法细筛出与耐盐突变体紧密连锁的ＲＡＰＤ分子标记下打下基础,同时,还分析了影响ＲＡＰＤ扩增结果的因素。     

拟南芥耐盐突变体stg2的筛选

采取在高盐平板上萌发的方法,对一个雌激素诱导激活型拟南芥突变体库进行了耐盐突变体的筛选,最终得到了2株稳定的耐盐突变体。本文中对其中的一株耐盐突变体,命名为stg2(salt tolerance during germination 2),进行了研究。遗传实验表明它的耐盐特性是受雌激素诱导的,是功能获得型的耐盐突变体。本实验中还探讨了stg2突变体的筛选过程及耐盐生理特点。     

九个水稻耐盐突变体的RFLP分析

用６ 个可能与水稻耐盐性有关的ＤＮＡ 探针对来自两个品系的５ 个耐盐突变株系、３ 个耐盐突变体及１ 个弱耐盐突变体进行ＲＦＬＰ分析。结果有８ 个耐盐突变体（株系）检测到ＤＮＡ 水平的变化,６ 个探针检测到具多态性的突变株系（体）的数目分别为ＲＧ４：６ 个;ＲＧ７１１：６ 个;Ｒａｂ１６：５ 个;Ｒａｂ１０Ｅ６：２ 个;Ｒａｂ２１：１ 个;ＳａｌＴ：２ 个;表明ＲＧ４、ＲＧ７１１ 及Ｒａｂ１６三个位点有可能与耐盐性突变相关。多态性图谱中７０．８％ 为２ 个以上的酶切图谱同时显示多态性,说明多数突变是由缺失、插入或重复造成的     

利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究

利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究王仑山王鸣刚王亚馥（兰州大学生物系,兰州７３００００）ＴＨＥＳＥＬＥＣＴＩＯＮＯＦＮａＣｌ┐ＴＯＬＥＲＡＮＴＭＵＴＡＮＴＳＢＹＴＩＳＳＵＥＡＮＤＣＥＬＬＣＵＬＴＵＲＥＩＮＰＬＡＮＴＷａｎｇＬｕｎ－ｓｈａｎＷ...     

水稻突变体M-20的耐盐生理特性

不同盐（NaCl）浓度的水培条件下,水稻耐盐突变体M－20幼苗生长及生存能力优于其原始品系77－170,膜透性测定表明盐胁迫对M－20质膜的损伤较小;同时,外界盐浓度小于100mmol／L时,M－20幼苗根、地上部的钠离子含量低于其原始品系。土培幼苗浇灌盐水（10mmol／L）时,M－20成熟及生长叶片的内源ABA水平增加时期晚于原始品系,增幅也小;而游离脯氨酸的增加时期虽晚,但增幅远高于原始品系。     

小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定

利用Ｆ１花药培养、ＥＭＳ诱变和耐盐性反复筛选后已稳定９ 代的小麦耐盐突变体ＲＨ８７０６－ ４９、Ｈ８７０６－ ３４、Ｈ８７０６－ ４４、Ｈ８７０６－ ４８、Ｈ８７０６－ ５７ 及其亲本濮农３６６５、百农３０３９ 为材料,用生化标记（醇溶蛋白）及分子标记（ＲＡＰＤ）分析了各材料间的差异,发现突变体与亲本相比,不仅发生了蛋白质水平的变异,而且也在ＤＮＡ 水平上证明了突变的发生,从而为耐盐突变体的真实性提供了有力的证据,排除了盐适应的可能性; 经用２１８ 个引物对５ 个突变体之间的多态性进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,它们之间的差异很小,其遗传背景相似,因而它们是一系列耐盐性不同的近似等位基因系     

拟南芥耐旱、耐高盐突变体sdtl的获得

Among the 20000 independent Arabidopsis activation tagging lines, we screened a novel mutant with high-salinity and drought tolerance, namely sdt1 (high-salinity and drought tolerant 1). sdt1 kept normal growth under drought stress by consecutively withholding water for 26d, while all the wild type wilted to death. Furthermore, the same result was repeated under high-salinity stress when sdtl and wild type were treated with 150 mmol/L NaCl. Seeds germination test on the medium indicated that the response of sdt1 to endogenous or exogenous ABA was reduced as compared with wild type. Under drought stress conditions the rates of water loss of sdt1 rosette leaves were significantly lower than that of wild type. Southern hybridization of sdt1 and the result of high-salinity tolerance genetic analysis showed that two copies of T-DNA were inserted into the two linking sites by shoulder to shoulder.     

拟南芥耐旱、耐高盐突变体sdt1的获得

在有20000个独立转化株系的拟南芥(Arabidopsis thaliana)激发标签突变体库中,筛选到1 株耐旱、耐盐突变体sdt1(high-salinity and drought tolerant 1)。实验结果表明在连续26d不浇水的干旱胁迫条件下,sdt1可保持正常生长而野生型全部萎蔫死亡。此外,在外施150 mmol/L NaCl水溶液的高盐胁迫条件下．sdt1可正常生长,而野生型全部死亡。在0．5xMS培养基上进行的发芽实验表明sdt1对内源和外施ABA的敏感性均低于野生型,为一个ABA不敏感突变体。对叶片失水率的测定结果表明,在干旱胁迫下sdt1的失水率显著小于野生型。Southern杂交结合sdt1的遗传分析表明该突变体为紧密相邻的2个T-DNA串联插入,对突变的功能基因有待进一步分子鉴定。     

园艺植物耐盐细胞突变体的筛选和鉴定

本文介绍了园艺植物耐盐细胞突变体获得途径及其耐盐性鉴定的研究进展。     

PCR—SSCP与测序技术相结合检测小麦耐盐突变体

根据位于小麦第四同源群上与耐盐有关的gf-2.8基因的编码区序列设计1对引物,分别以两个耐盐突变体及其亲本的总DNA为模板进行PCR扩增,在5个供试材料中均扩增出1条约685bp的目的条带,SSCP电泳显示突变体974915与其他供试材料之间存在差异。测序表明冀麦24和其耐盐突变体8901-17的扩增产物序列与gf-2.8基因的发表序列相同,这表明突变体8901-17的突变位点不在该基因上,而另一耐盐突变体974915的序列中则至少存在2个单碱基突变,有一处突变导致了氨基酸的变化,该突变位点位于gf-2.8基因的保守区域内。     

‘巴斗’杏再生体系的建立与耐盐突变体的筛选

以‘巴斗’杏试管苗茎段为外植体,研究其再生体系的建立以及在含不同浓度NaCl培养基上诱导耐盐愈伤组织,筛选耐盐突变体。结果显示：茎段在MS＋6-BA1．5mg·L^-1＋IBA0．5mg·L^-1培养基上诱导愈伤组织效果最好,芽的分化率可达88％;将出芽愈伤组织块接种到附加IBA0．5mg·L^-1＋KT2．0mg·L^-1的MS分化培养基上效果最佳,芽的分化系数最高为12．7;较理想的生根培养基为MS＋NAA0．1mg·L^-1。＋IBA0．2mg·L^-1,生根率在46．3％以上;在含0．8％NaCl的愈伤组织诱导培养基中,连续继代筛选2代,转入不含NaCl的分化培养基中,分化出了完整植株。经继代培养筛选,测定发现获得的耐盐植株比正常培养植株的游离脯氨酸含量高。     

利用组织培养研究植物耐盐机理与筛选耐盐突变体的进展

概要介绍近年来利用组织培养研究植物耐盐的机理,培养的细胞与整株植物之间耐盐的相关性,列举国内外从17种植物筛选出的耐盐细胞系及其再生植株的研究结果,讨论了选择细胞的耐盐性在再生植株表达的问题,并展望这项研究工作的前景。     

常夏石竹耐盐突变体渗透调节的研究

在离体培养条件下利用γ-射线作诱变剂获得耐0.5%、0.7%、1.0%NaCl的突变系,通过对稳定突变系植株叶片渗透剂含量及对渗透势贡献大小的测定表明耐盐突变体叶中K+、游离氨基酸、Na+、脯氨酸的含量高于对照,其中脯氨酸和Na+积累最明显。而叶片中可溶性糖的含量、K+/Na+低于对照。Na+对突变体植株叶片渗透势贡献最大,是最主要的渗透调节剂之一。耐盐突变体植株内存在渗透物质的再分配,叶内有吸钾排钠现象。     

新疆盐生植物耐盐基因NHX转化甘蓝型油菜及其耐盐性的初步研究

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体,通过根癌农杆菌EHA105(Agrobacterium tumefaciens)介导将盐角草(Salicornia)的Na /H 反向运输体基因NHX导入新疆主栽油菜1khp11品系,获得了抗卡那霉素的再生植株,并对影响遗传转化的一些关键因素进行了研究。实验结果表明:带柄子叶在含有2,4-D的培养基上经过2d短时间的预培养后在菌液浓度OD600为0.3时在28℃摇床浸染15min时卡那抗性绿苗率可达10%￣12%;经过抗性植株的PCR及RT-PCR检测证明外源基因已整合到油菜基因组中,并通过表型实验证实由于外源基因的导入提高了植株的耐盐能力。     

‘LD-1'砧米良一号猕猴桃的耐涝性

猕猴桃是一类不耐涝的植物,为了解决猕猴桃的涝害问题,吉首大学近年来尝试用‘LD-1’作为猕猴桃的耐涝性砧木。该研究以米良一号实生苗砧米良一号猕猴桃和‘LD-1’砧米良一号猕猴桃为材料,观测根系淹水后叶片可溶性糖含量、丙二醛含量、叶绿素含量、可溶性蛋白质含量、SOD 活性和形态的变化规律,探讨了‘LD-1’砧米良一号猕猴桃的耐涝性。结果表明：(1)米良一号实生苗砧米良一号猕猴桃根系淹水后,可溶性糖含量6 d 后极显著(P<0.01)升高;丙二醛含量8 d 后显著(P<0.05)升高;叶绿素含量和可溶性蛋白质含量没有显著变化;SOD 活性6 d 后显著(P<0.05)升高,8 d 后不再有显著变化;叶片2 d 后出现轻度萎蔫,10 d后全部枯死。(2)‘LD-1’砧米良一号猕猴桃根系淹水后,可溶性糖的含量4 d 后显著(P<0.05)升高;丙二醛含量、叶绿素含量、可溶性蛋白质含量和 SOD 活性无显著变化;叶片10 d 后未出现显著的萎蔫和枯死现象,30 d 后仍正常。这说明米良一号实生苗砧米良一号猕猴桃耐涝性较弱,‘LD-1’砧米良一号猕猴桃耐涝性较强,‘LD-1’作砧木显著增强了米良一号猕猴桃的耐涝性。该研究结果为‘LD-1’在米良一号猕猴桃栽培上的应用提供了依据。     

盐生植物海马齿耐盐的生理特性

以盐生植物海马齿为研究材料,分别用淡水、1/4海水、1/2海水、全海水浇灌15 d和30 d,研究盐生植物耐盐的生理特性和机理。海马齿植物在低于1/2的海水浇灌时,植物生长旺盛,主要表现为叶片增大和变厚,地上部分生物量增加;而全海水抑制了植物的生长。在盐胁迫下,海马齿植物中Na+的含量叶中最高,茎中含量次之,根中含量最低。长时间盐胁迫时,海马齿植物根、茎、叶中的相对含水量与淡水浇灌相比,变化不大,叶中略有增加;而脯氨酸含量显著增加,且可溶性糖的含量也比淡水浇灌的高。由此推测:海马齿植物主要以有机小分子作为渗透调节物质来维持细胞渗透压,在其耐盐中起着重要的作用。土壤中Na+的毒害,并没有减少土壤中可被植物利用的可交换K+,反而使其增加,说明海马齿植物根部对Na+的吸收能力和Na+/K+交换能力非常强。海马齿植物耐盐性强,还表现为能阻止盐胁迫对植物细胞原生质膜的氧化损伤,不破坏植物叶片内叶绿素的合成,能基本维持植物茎、叶中K+和根、茎中Mg2+的相对稳定。     

小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定

利用F1花药培养、EMS诱变和耐盐性反复筛选后已稳定9代的小麦耐盐突变体RH8706-49、H8706-34、H8706-44、H8706-48、H8706-57及其亲本濮农3665、百农3039为材料,用生化标记（醇溶蛋白）及分子标记（RAPD）分析了各材料间的差异,发现突变体与亲本相比,不仅发生了蛋白质水平的变异,而且也在DNA水平上证明了突变的发生,从而为耐盐突变体的真实性提供了有力的证据,排除了盐适应的可能性; 经用218 个引物对5个突变体之间的多态性进行RAPD分析,结果表明,它们之间的差异很小,其遗传背景相似,因而它们是一系列耐盐性不同的近似等位基因系。 Abstract:　In this paper, 5 wheat salt tolerant mutants（H8706-34、H8706-44、H8706-48、RH8706-49、H8706-57）derived from anther culture、EMS induction and salt tolerance selection and their parents （Punong3665、Bainong3039）were used as materials, all the mutants have inherited stably for 9 generations. Differences were revealed between the mutants and their parents using chemical marker（gliadin）and molecular marker（RAPD）, the results showed that compared with the parents, the mutants varied not only on the protein level,but also on the DNA level,which supplied hard evidence of the truth of the mutants and ruled out the possibility of salt adaptation. RAPD analysis were conducted among the 5 mutants by 218 primers,which proved they were a series of near isogenic lines of different salt tolerance because of their little difference and similar genetic background.