多重环介导等温扩增技术研究进展

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)因其扩增速度快、灵敏度和特异性高、仪器要求低等优点而被广泛应用于核酸诊断领域。为充分利用LAMP技术优势、提高诊断检测的效率与可靠性、扩展其应用范围,同时节约试剂成本,近年来多重LAMP技术的研究成为一大热点。常规的LAMP扩增产物检测方法多数以聚合反应的双链DNA产物或其副产物为基础,只能判断有无扩增反应发生,而难以识别多重扩增产物的靶标来源及其特异性。为实现多重扩增产物的高特异检测,各国学者通过对该技术巧妙的改进或与其他技术相偶联,发展了一系列多重LAMP扩增检测技术。然而上述狭义的多重LAMP技术依然存在因引物间相互干扰、扩增效率存在差异而引发歧视性扩增的局限,限制了多重扩增的重数。近年研究活跃的微型扩增技术以其实现多个平行、互不干扰的小体积单重扩增的技术优势打破了这一局限,由此产生了新型的广义多重LAMP扩增技术。这些技术还具有试剂消耗少、自动化程度较高、交叉污染风险更小以及更适合对较多靶标进行现场快速检测等优势。本文分别从狭义多重LAMP的方法原理及其扩增反应体系优化、广义多重LAMP的方法原理以及多重LAMP技术在诊断检测中的应用等方面对近年来多重LAMP技术的研究进展进行了综述。     

基于微流控芯片的核酸等温扩增技术研究进展

核酸等温扩增技术是一种在恒温体系内对核酸进行高效扩增的分子扩增技术,它能够在短时间内实现目的基因的指数增长.微流控芯片(microfluidic chip)技术是把研究样品制备、核酸富集、纯化和检测等多个操作步骤集成到一块“微型化”的芯片上,经自动化处理,得出实验结果,即“样品进,结果出”.将核酸等温扩增技术与微流控芯...     

环介导等温扩增技术的研究进展

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新式核酸扩增技术,它依靠一种具有链置换活性的DNA聚合酶和2对特殊设计的引物,不需要反复的温度循环和昂贵的仪器设备,在等温条件下即可高效快速地完成扩增反应,目前已广泛应用于细菌、病毒、寄生虫等病原体的检测,及动物胚胎性别的鉴定。该文总结了LAMP技术的基本原理、相对于传统核酸检测技术的优点、产物的检测方法及其临床应用,最后指出LAMP目前存在的不足以及采取的相应措施,并对其发展前景进行了展望。     

环介导等温扩增技术检测动物病原研究进展

综述了环介导等温扩增技术检测病毒、细菌和寄生虫等动物病原方面的研究和应用最新进展.     

环介导等温基因扩增技术及其在病毒检测中的应用

环介导等温扩增是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性高、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。简要综述了环介导等温扩增技术的原理、特点,及其在病毒检测中的应用。     

环介导等温扩增技术在致病微生物检测中的应用

环介导等温扩增(LAMP)是一种新兴的核酸扩增方法,由于其具有高灵敏、高特异、操作简单、检测快速、价格低廉等诸多优势,现已成为分子生物学诊断技术的重要组成部分,并广泛应用于基层实验室及野外致病微生物的在快速检测致病微生物中的应用及新进展,希望能为其发展提供参考。     

环介导等温扩增技术改进的研究进展

环介导等温扩增法(LAMP)是近年发展起来的新型核酸检测技术,因其检测特异性好、灵敏度高、时间短、无需热循环设备而在病原体检测中得到广泛应用。基于该技术进行的改造和改良也层出不穷,本文从该技术的方法改造、缩短反应时间和简化模板预处理、多重扩增产物分析、防止假阳性污染四个方面对近几年LAMP技术的发展进行综述,为今后以该技术平台为基础的创新和应用提供理论依据。     

环介导等温扩增技术检测食品安全的研究进展

食品安全一直是全世界公众健康的关注焦点。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性强、灵敏度高、快速简便的等温核酸扩增技术,近年来在核酸检测领域有着广泛的研究和应用。将LAMP技术应用到食品安全检测领域,可以快速准确的监控一些食品安全问题,避免对人类健康所构成的危害。因此针对LAMP技术在食品安全检测方面的优势进行分析,并结合LAMP技术与新兴诊断技术平台的联合运用进行了展望。     

环介导等温扩增技术用于检测幽门螺旋杆菌CagA基因

目的 建立环介导等温扩增技术（LAMP）用于检测唾液和胃液中幽门螺旋杆菌CagA基因。方法 收集临床阳性样本并用荧光定量PCR检测,然后根据幽门螺旋杆菌的CagA基因序列设计LAMP引物并优化反应条件。通过LAMP检测来验证引物的特异性,并通过检测稀释的模板来验证引物的灵敏性。同时加入钙黄绿素使产物显色,使CagA基因检测可视化。最后,用LAMP方法检测收集的临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果 LAMP体系的特异性和灵敏性均较好,对CagA基因检测的灵敏性是102 IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本的检测,CagA阳性样本的LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 LAMP对CagA基因的检测具有较好的特异性和灵敏性,操作简便,在基层医院有较好的应用前景。     

基于微流控芯片的等温扩增技术北大核心CSCD

基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的核酸扩增技术是分子诊断领域的金标准,然而PCR往往包含多个反应温度,涉及长时间的循环升降温过程,且需要在复杂热循环仪中完成,这些都限制了其在现场即时检测(point-of-care testing,POCT)中的应用。与传统PCR相比,等温扩增依靠恒定反应温度,反应时间短,检测装置简单,能够提供更加方便、快捷的核酸检测。基于微流控技术的等温扩增检测,通过兼顾微流控与等温扩增两者的优势,能够为POCT分子诊断提供更具竞争力的平台。例如,在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情防控中,多种形式的POCT等温扩增检测展示了其独特优势。文中首先归纳总结了典型的等温扩增技术及其检测方法,然后对不同类型的等温扩增微流控系统进行了分类总结与分析(如功能定位、结构组成、流体控制、系统特点等),最后总结了等温扩增微流控系统在新冠病毒(SARS-CoV-2)等不同病原体检测领域中的应用,并对等温扩增与CRISPR基因编辑等其他新型技术的相互结合进行了介绍与展望。     

环介导恒温扩增技术在呼吸道感染常见细菌临床检测中的应用评价

【背景】传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低。环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测。【目的】评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力。【方法】设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法。通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性。回顾性分析2019年11月–2021年3月北京大学人民医院的2...     

Rapid, sensitive and simple detection method for koi herpesvirus using loop-mediated isothermal amplification

New methods were developed for the detection of koi herpesvirus (KHV, CyHV-3) by LAMP, which were compared with the PCR for specificity and sensitivity. We designed two primer sets targeting a specific sequence within the 9/5 PCR amplicon (9/5 LAMP) and the upper region of the Sph I-5 PCR amplicon ( Sph I-5 LAMP), including a sequence highly conserved among the strains. The amplification was monitored in real-time based on the increase in turbidity, with magnesium pyrophosphate as the by-product. The reactions were carried out under isothermal conditions at 65°C for 60 min. The detection limit of both LAMP was six copies, equal to the modified Sph I-5 PCR. No cross-reactivity with other fish pathogenic viruses and bacteria was observed. Sph I-5 LAMP was found to have a quicker response in terms of the reaction velocity than 9/5 LAMP. Therefore, we consider Sph I-5 LAMP to be superior for routine use. Additionally, LAMP was found applicable to crude extract from gills and other organs. LAMP methods are superior in terms of sensitivity, specificity, rapidity and simplicity, and are potentially a valuable diagnostic tool for KHV infections.     

Rapid and sensitive detection of Singapore grouper iridovirus by loop-mediated isothermal amplification

Aims:  The aim of this paper was to develop a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for rapid, sensitive and inexpensive detection of Singapore grouper iridovirus (SGIV) in grouper (GP), Epinephelus sp.
Methods and Results:  A set of six specific primers was designed by targeting the SGIV ORF-014L. With Bst DNA polymerase large fragment, the target DNA can be amplified as early as 20 min at 65°C in a simple water bath. The detection limit is about 0·02 fg (equivalent to 6·3 copies) of plasmid ORF-014L. LAMP products could be judged with three different methods. There were no cross-reactions with seven other aquatic animal viruses indicating high specificity of the LAMP. The LAMP method was applied to detect SGIV in virus-infected GP cells and GP tissues effectively.
Conclusions:  The LAMP described in this study is a cheap, sensitive, specific and rapid protocol for the detection of SGIV in cells and in GP tissues.
Significance and Impact of the Study:  The developed LAMP method can be simply applied both in field condition and in laboratory operation for specific detection of SGIV infection.     

一种快速检测微囊藻毒素mcyG基因的新技术——环介导恒温扩增

利用环介导恒温扩增(LAMP)技术,以微囊藻毒素(Microcystins,MCs)合成基因簇中的mcyG基因为靶序列,设计了1 套LAMP引物,建立了LAMP反应体系并进行灵敏度和特异性实验。结果表明mcyG基因的最低检测限为:24 cfu/mL,远低于常规PCR(Polymerase Chain Reaction)。整个检测过程仅需40 min,且可直接目测结果。特异性实验中, 13 株淡水常见水华蓝藻分属:色球藻属(Chroococcus)、念珠藻属(Nostoc)、鱼腥藻属(Anabaena)、束丝藻属(Aphanizomenon)、微囊藻属(Microcystis),其中10 株呈阳性反应, 3 株为阴性。在野外样品检测中,来自太湖与黄庆苗池塘的水样PCR检测显示阴性反应,而LAMP检测均呈阳性反应,提示此两处水样中可能含有产毒微囊藻,显示出了LAMP检测方法良好的野外检测和预警能力。综合上述,LAMP检测方法能够快速检测产微囊藻毒素的关键基因,且结果可视化。该方法简便、快捷、不依赖特殊检测设备,极具推广前景。     

应用等温环介导扩增方法检测蜜蜂残翅病毒的研究

本文的目的在于建立用于临床检测残翅病病毒(Deformed wing virus,DWV)的等温环介导扩增技术(Loopmediated isothermal amplification,LAMP),为该疾病的预防和控制提供理论依据。在DWV基因保守序列设计4条引物,探究LAMP扩增的最优条件,并与常规的PCR(polymerase chain reaction)检测方法进行比较。建立的LAMP方法检测下限为0.89 pg,灵敏度比PCR高100倍而且特异性好。临床检测显示建立的LAMP方法可行、准确、方便、灵敏。针对DWV的LAMP建立的检测方法为养蜂生产第一线检测和预防DWV提供了技术支持,有一定的应用价值。     

Detection of fish nocardiosis by loop-mediated isothermal amplification

AIMS: Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is a novel method that amplifies DNA with high specificity and rapidity under isothermal conditions. In this study, using the LAMP method, a protocol for detecting Nocardia seriolae which is a causative agent of fish nocardiosis, was designed. METHODS AND RESULTS: A set of four primers, two inner and two outer, were designed based on the sequence of the 16S-23S ribosomal RNA internal transcribed spacer region of N. seriolae. Time and temperature conditions for detection of N. seriolae were optimized for 60 min at 65 degrees C. Other fish pathogen was not amplified by this LAMP system. The detection of N. seriola using LAMP was found to be more sensitive than that by polymerase chain reaction. CONCLUSIONS: LAMP is a highly sensitive and rapid diagnostic procedure for detection of N. seriolae. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: LAMP is a useful diagnostic method for fish nocardiosis.