拟南芥钙调素结合蛋白参与胁迫响应的研究

采用实时荧光定量RT-PCR和Northern blotting技术检测了野生型拟南芥中CBP60g基因对丁香假单胞菌和非生物胁迫的响应,并对丁香假单胞菌接种后,野生型拟南芥、cbp60g-1突变体和CBP60g过表达转基因植物中抗逆相关基因的表达变化进行检测。结果显示:(1)在野生型拟南芥中CBP60g基因的表达能被丁香假单胞菌、高盐、冷和机械损伤所诱导。(2)经丁香假单胞菌诱导后病程相关基因PR5和AIG1的表达在过表达转基因植物中明显高于野生型。(3)受干旱和ABA诱导的AtMYB2基因的表达在过表达转基因植物中也高于野生型。研究表明,CBP60g同时参与了拟南芥对生物和非生物胁迫响应。     

番茄抗性基因的克隆

番茄与丁香假单胞菌病理小种Pseudomonas syringae pv.tomato(细菌性斑点病的病原体)间的相互作用涉及一个基因-基因系统,在该系统中,分离自丁香假单胞菌的无毒性基因(arrPto)含抗性基因Pto(定位于第5条染色体上)的栽培种发生专一性抗性反应。在《科学》杂志(1993),262(5138),1432～1436中,Purdue大学农学系的Gregory B.Martin及其同事们在Cornell大学Steve Tanksley实验室根据图谱数据报导了Pto的克隆,并对其蛋白产物的功能进行了研究。     

下呼吸道非发酵菌的分布及其耐药性研究

目的了解2000～2003年安微医科大学第一附属医院下呼吸道非发酵菌的分布及其耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法细菌鉴定、药敏试验和诱导β-内酰胺酶(IB)检测采用WalkAway-40全自动微生物分析仪,超广谱β-内酰胺酶(ESBb)检测采用纸片确证试验。结果2000～2003年下呼吸道非发酵菌的检出率为28．2％。其构成以铜绿假单胞菌为最多(56．6％),其次为洛菲不动杆菌(9．3％)、嗜麦芽窄食单胞菌(8．6％)和鲍曼或溶血不动杆菌(8．5％)。对复方新诺明,嗜麦芽窄食单胞菌的耐药率最低(14．3％)。对头孢他啶、亚胺培南、哌拉西林或他巴坦,铜绿假单胞菌的耐药性较低,分别为20．3％、20．8％和28．3％;洛菲不动杆菌耐药率比鲍曼或溶血不动杆菌普遍偏低。铜绿假单胞菌ESBLs和IB的检出率分别为15．7％和84．2％。结论下呼吸道非发酵菌的检出率较高,主要为铜绿假单胞菌。非发酵菌耐药现象严重,不同非发酵菌的耐药谱差异较大。铜绿假单胞菌IB发生率高。     

铜绿假单胞菌PA1550基因对泳动及蹭动的影响

[目的]:研究与铜绿假单胞菌运动能力相关的基因.[方法]:以一株临床分离的铜绿假单胞菌PA68做受体菌,应用人工Mu转座技术建立了库容为2000的突变子文库,从中筛选出泳动能力和蹭动能力丧失或减弱的突变子,通过基因克隆、测序,GenBankBLAST比对测序结果,互补基因表达确定与铜绿假单胞菌运动能力相关的基因.[结果]:突变子Y46在丧失了泳动运动能力的同时,蹭动能力也发生了减弱.在Y46突变子中,Mu转座子插入到功能完全未知的基因PA1550中.对极性效应及PA1550所在操纵子的分析表明,Mu转座子对插入点下游的基因的转录并不造成影响.[结论]:PA1550与铜绿假单胞菌的泳动及蹭动能力有关.     

种植体周围炎患者龈下微生物菌群与患者临床症状的相关性分析

目的研究种植体周围炎患者牙周微生物群落与临床症状的相关性。方法选择2016年1月-2017年1月在本院口腔科进行种植体种植的患者80例,选取其中没有发生种植体周围炎的患者61例中的20例作为对照组,发生种植体周围炎的患者19例为病例组。检测患者龈下微生物。结果样本共检出13种细菌,其中对照组检出9种,病例组检出12种,特有菌种4种,分别是卟啉单胞菌、月牙形单胞菌、假单胞菌、密螺旋体,两组共有菌为9种。病例组患者中改良菌斑指数(mPLI)0级患者例数明显低于对照组,2级和3级患者例数明显高于对照组,改良龈沟出血指数(mSBI)0级患者例数明显低于对照组,2级和3级患者例数明显高于对照组,有溢脓临床症状的患者例数明显高于对照组,探诊深度明显大于对照组。卟啉单胞菌和假单胞菌与mPLI分级成正相关,相关系数OR值为0.4298和0.3967。卟啉单胞菌和假单胞菌与mSBI分级成正相关,相关系数OR值为0.3642和0.3351。结论种植体周围炎患者龈下微生物以卟啉单胞菌、月牙形单胞菌、密螺旋体为特有菌种,其中卟啉单胞菌和假单胞菌与种植体周围炎牙菌斑形成有关。     

基于冰核蛋白的乳酸菌表面展示系统的构建

[目的]验证来源于丁香假单胞菌的冰核蛋白在乳酸乳球菌表面展示外源蛋白的可能性.[方法]以绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因gfp为报告基因,以冰核蛋白基因的N末端和NC端作为展示单元,构建乳酸菌表面展示载体pHZ101和pHZ102,并转化大肠杆菌(Escherichia coli JM109和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MG1363.[结果]荧光显微镜观察显示重组大肠杆菌和乳酸乳球菌均能检测到绿色荧光.Western blot结果表明GFP蛋白在重组大肠杆菌和乳酸乳球菌中均得到表达,并且INPN-GFP蛋白多数滞留于乳酸乳球菌细胞质内,而INPNC-GFP蛋白则大部分定位于乳酸乳球菌的细胞膜上.[结论]以上结果表明丁香假单胞菌的冰核蛋白能引导外源蛋白定位于乳酸乳球菌的细胞膜上,为乳酸菌表面展示系统的构建提供了新的方向.     

亚胺培南临床用药与非发酵菌群分离率和耐药性的关系

目的了解亚胺培南临床用药和非发酵菌群分离率与耐药性变迁的关系,有利于非发酵菌感染的预防与治疗。方法统计分析浙江省人民医院2000～2003年临床分离非发酵菌的菌株分布、与亚胺培南的临床用药的相关性及耐药率。结果4年来非发酵菌的分离以铜绿假单胞菌(30．7％)、乙酸钙-鲍曼不动复合杆菌(19．％)及嗜麦芽糖寡养单胞菌(19．1％)为主．其分离率与亚胺培南用药存在相关性。对各菌属的主要菌种进行耐药性分析,嗜麦芽糖寡养单胞菌、脑膜脓毒性金黄杆菌和洋葱伯克霍尔德菌的耐药率极高,铜绿假单胞菌和乙酸钙-鲍曼不动复合杆菌的耐药率呈现明显升高的趋势。结论非发酵菌的检出率与亚胺培南使用关系密切,耐亚胺培南的菌株迅速升高。临床应合理使用抗生素,并加强对耐药菌株的监控。     

代谢工程改造运动发酵单胞菌用于提高乙醇产量

目的:采用可以在运动发酵单胞菌中表达的操纵子构建重组运动发酵单胞菌,用于提高该细菌对高温高糖的耐受性和提高乙醇产量.方法:用外来的YfdZ、MetB和Hsp构建的多顺反子质粒,转化运动发酵单胞菌而使其获得新的代谢途径.在玉米水解液中,验证了该多顺反子质粒对运动发酵单胞菌产生乙醇的影响.结果:与对照菌相比,在37℃和糖浓度为28%的培养条件下,该基因工程菌的乙醇产量提高到183.2%.在37℃,糖浓度为28%并添加氮源的条件下,该基因工程菌的乙醇产量提高到148.0%.结论:YfdZ、MetB及Hsp三种基因的共同作用能显著提高运动发酵单胞菌的乙醇产量和发酵温度.     

荧光假单胞菌抗生性代谢产物合成相关基因的研究现状

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是一种重要的植物根际促生菌,它能够产生藤黄绿脓菌素、2,4-二乙酰基藤黄酚、硝吡咯菌素、吩嗪-1-羧酸等抗生性次级代谢产物,可抑制多种病原物,在农作物土传病害的生物防治研究中具有重要意义.总结了荧光假单胞菌中已确立的抗生性次级代谢产物的合成机制,重点阐述了相关基因的结构、功能,以及利用生物工程技术对荧光假单胞菌进行遗传操作的最新进展,同时对荧光假单胞菌在生物防治中的应用和其作为生防菌剂的前景进行了展望.     

铜绿假单胞菌必需基因的研究进展

铜绿假单胞菌为专性需氧非发酵革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一,可引起呼吸道、泌尿道、烧伤创面和菌血症等严重感染。铜绿假单胞菌耐药形势日益严峻,给临床治疗带来困难。必需基因是生长过程中必不可少的看家基因,对铜绿假单胞菌必需基因进行深入研究,不仅有助于了解细菌的生长、毒力等基本特性,也有助于筛选新的抗菌药物靶标。本文针对铜绿假单胞菌及其必需基因进行综述,首先介绍了铜绿假单胞菌的基本生理特性及目前耐药趋势,又归纳了必需基因的研究方法,最后对铜绿假单胞菌必需基因的研究进展进行总结。     

假单胞基因工程菌的开发应用现状与展望

假单胞菌 (Pseudomonas)是一群革兰阴性的杆菌或球杆菌 ,需氧生长 ,多数有鞭毛有动力。按照《伯杰氏系统细菌学手册》第二版 ,假单胞菌科包括 2 9个属 ,数百个种和亚种。假单胞菌广泛存在于自然界 ,是土壤和水体微生态系统的重要组成部分 ,也是自然界的碳、氮循环的重要组成部分[1] 。尽管其中的某些种如铜绿假单胞菌可引起人和动物的机会感染、个别种如丁香假单胞菌可某些农作物致病 ,但大多数种是无害的 ,某些假单胞菌和荧光假单胞菌还是植物生长的有益菌。更重要的是 ,假单胞菌拥有极为复杂的酶系统 ,具有非凡的降解能力 ,在环保方面意…     

假单胞菌铁载体及色素研究

假单胞菌分布广泛,种类繁多,能够产生多种结构的铁载体及具有特定颜色的色素化合物,这使假单胞菌在生物病害防治、医学研究等领域应用潜力巨大.假单胞菌铁载体具有菌种和菌株特异性,可在一定程度上作为其分类依据.假单胞菌色素具有色调、结构、功能多样性,与其铁载体在功能上具有一定重叠性.假单胞菌铁载体及色素分离纯化方法相对比较简单,但它们的生物合成及转运代谢机制非常复杂.     

铜绿假单胞菌铁摄取调节子Fur诱导表达突变株构建及表型分析

铁摄取调节子 (Ferric uptake regulator,Fur) 是细菌控制细胞内铁平衡的一类重要的调节子。铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa的fur为必需基因,不能直接敲除。文中通过构建诱导型缺失突变株Δfur/attB::PBAD-fur,来研究该基因对铜绿假单胞菌的生长、生物被膜形成、运动能力和抗氧应激能力等方面的影响。结果表明,当Fur低表达时,铜绿假单胞菌在高铁和低铁环境中出现了生长阻滞的现象;低表达Fur的铜绿假单胞菌抵抗H2O2的能力降低,形成生物被膜的能力减弱,游动、颤动 (Twitching) 和丛集 (Swarming) 运动能力也出现了减弱的现象。Fur的表达直接影响铜绿假单胞菌荧光嗜铁素的产量。在铜绿假单胞菌体内表达来自格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌Fur超级家族中的蛋白,可以部分恢复铜绿假单胞菌荧光嗜铁素的产量。由此说明,Fur对铜绿假单胞菌的生长、生物被膜形成、抗氧应激能力和运动能力方面都起着至关重要的作用。本研究为铜绿假单胞菌的防治提供理论指导。     

能源上的应用

<正> 8 53389运动发酵单胞菌遗传技术的发展和菌株改良[会,英]/Skotnicki,M.L.…//Aust.Biotechnol.Conf.-1982,5Meet.-13～16[译自DBA, 1984, 3(18),84-08775]用亚硝基胍诱变运动发酵单胞菌(Zy-     

丁香假单胞菌冰核基因inaQ变速箱启动子结构与活性分析

序列比对与结构预测显示丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)野生型菌株MB03的冰核基因inaQ启动子为一种在细菌中罕见的变速箱型启动子。通过克隆长度为522bp的inaQ基因启动子区(P522)并与绿色荧光蛋白基因gfp构建融合基因P522gfp后,在恶臭假单胞菌AB92019菌株中进行表达分析。结果表明,包含结构模块A-Box和B-Box的P522在该菌株中具有启动子活性,且在寡营养条件和较低温度下具有更高的活性,是一种可调控启动子。     

假单胞菌基因赋予转基因植物对假单胞菌的抗性

墨西哥一研究小组宣布,丁香假单胞菌 pv.phaseolicola 的鸟氨酰转氨酶(OCTasc)基因能赋予转基因烟草植株对上述病源菌的抗性。Irapuato 高级研究中心的一些研究人员正在研究上述菌中的毒素 ph-aseolotoxin 的效应,已知该毒素是大豆植株中 OCTase 的可逆抑制剂。OCTase 是氨基酸生物合成和病源     

应用聚合酶链式反应快速特异鉴定假单胞菌和伯克霍尔德氏菌(R)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶基因

聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类具有广泛应用前景的可降解生物塑料。因其可以以葡萄糖等廉价底物直接发酵生产PHA而日益受到重视。目前的研究表明在积累中长链PHA的假单胞菌中,由phaG基因编码的(R)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶(PhaG)起关键作用,但目前为止对该蛋白还知之甚少。通过聚合酶链式反应(PCR)建立了一种快速、特异鉴定phaG基因的方法,应用该方法成功地从两株积累不同PHA的假单胞菌Pseudomonas stutzeri 1317和Pseudamanas nitroreducens 0802中分别克隆得到phaG基因,并在phaG基因突变株Pseudomonas putida PHAGx-21中表达成功。同时,还首次报道了从非假单胞菌菌株Burkholderia caryophylli AS 1．2741中鉴定得到phaG基因,提示PhaG介导的中长链PHA合成途径作为一种通用的代谢模式在细菌中广泛存在,为进一步实现从廉价的非相关底物合成中长链PHA提供了必要的分子生物学基础。     

农药

<正> 854926 应用降解草甘膦的假单胞菌菌株PG2982来使用膦酸酯类农药[英]/Shinaba-rger,D.L.…//Appl.Environ.Microbiol.-1984,48(5).-1049～1050[译自 DBA,1985,4(2),85-00834]已知降解草甘膦的假单胞菌菌株 PG     

重组运动发酵单胞菌的构建及木糖利用特性研究

将大肠杆菌(Escherichia coli)木糖代谢的关键酶基因.引入到运动发酵单胞菌中,获得能利用木糖发酵生产乙醇的重组工程菌株PZM.混合糖发酵过程中,重组菌利用葡萄糖和木糖生成乙醇的效率分别达到理论值的81.2%和63.1%.     

荧光假单胞菌M18 rpoD克隆及其对抗生素合成的影响

荧光假单胞菌M18对多种植物病原真菌具有显著的抑制作用。荧光假单胞菌(Pseuclomones fluo-rescens)M18能同时合成吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(P1t)两种抗生素。从M18的基因组中克隆了rpoD基因,其相应的氨基酸序列与荧光假单胞菌CHAO中RpoD蛋白的氨基酸序列完全相同。利用基因重组技术和大肠杆菌-荧光假单胞菌穿梭质粒,pME6032,将rpoD置于强启动子Ptac的控制下,导入M18菌株。发现经重组质粒转化的M18,与对照相比,培养基中PCA和Plt开始累积的时间分别提前4h和8h,积累量提高1倍和6倍.