激光微束在植物外源基因转化上的应用

本文概述了近年来激光微束在植物外源基因转化上的最新进展,激光微束转化法的关键技术及应用。并对其今后的应用前景作了展望。     

激光微束在两种鱼受精卵上打孔技术研究

在埃及胡子鲶和苏氏芒鲶两种鱼受精卵上,用脉冲ＹＡＧ激光微束打孔技术,成功地导入了外源指示剂和用激光微束打过孔的受精卵孵化出了仔鱼,为今后激光微束打孔植入外源基因和针类转基因研究做了一些有意义的探索工作。     

激光微束在遗传操作中的应用

激光微束是80年代后期发展起来的一种很有前途的遗传操作技术。该技术利用激光方向性好、光色单一和亮度高等独一无二的特点,把激光束通过光学系统引入显微镜并聚焦成很小的光点(直径小于1μm)。这种直径很小但功能密度很高的激光束照射细胞后,在细胞膜的表面引起可修复性的微损伤,从而改变细胞膜的通透性,因此激光微束可用于诱导基因转移、染色体切割、细胞核打孔以及细胞融合等与基因导入有关的遗传操作。激光微束技术使得对细胞或细胞器进行精细的细胞或亚细胞水平的显微外科术成为可能。     

多波长,紫外激光微束系统的研究及其应用展望

本广简介了我们研制成功的两种激光微束系统的设计特点,文中并综述了激光微束技术的应用前景。     

激光诱导金盏菊原生质体融合方法初探

本文简述运用激光微束诱导金盏菊(Calendula Officinali L.)叶肉细胞原生质体融合的方法和初步结果,并就激光诱导植物原生质体融合的条件进行初步讨论。     

激光微束切割小冰麦异附加系染色体的研究

利用微束激光并选用适当的功率密度,可将小冰麦异附加系花粉母细胞染色体切割成２～３段。这个技术的建立,使激光微束应用于染色体片段、ＤＮＡ、微克隆及基因定位成嵨赡     

激光微束切割小冰麦异附加系染色体的研究

利用激光微束,并选用适当的功率密度可将小冰麦异附加系花粉细胞染色体切割成2～3个片段,这个技术的建立为激光微束应用于染色体片段DNA微克隆及基因定位提供可能。     

激光微束诱导鲶鱼受精卵融合的研究

本文论及激光微束诱导胡子鲶（C．fuscus）受精卵融合的一种技术及其对鲶鱼遗传变异和生长发育的影响。实验表明：一些融合卵发育非常健全;实验所得成年鱼中,有一条体色变为白色、一条变成略带淡紫色,二条O形和O须都有变化;融合鱼体长比对照（未经激光处理）鱼约长1．5倍,体重比对照鱼约重2倍;抗寒性能比对照亦提高1．5℃～2℃．     

Laser-induced tobacco protoplast fusion

Laser tweezers can manipulate small particles, such as cells and organdies. When coupling them with laser microbeam selective fusion of two tobacco protoplasts containing some chloroplast was achieved. Physical and biological variables that affect laser trapping and laser-induced fusion were also discussed. The results show that the effect of chloroplast content and distribution on the yield of cell fusion is remarkable.     

胶片吸附的激光显微切割技术及其在蛋白质组研究中的应用

组织显微切割在特定细胞亚群的比较研究中起着重要作用.新近发展的胶片吸附激光显微切割技术能从复杂的生物组织中快速准确地分离纯化出特定细胞亚群.在这项技术中,透明的乙烯乙酸乙烯基酯热塑性胶片覆盖于病理组织切片表面,CO₂激光束特异性作用于目的细胞群表面的胶片,胶片对细胞较强的吸附作用使得选择性自动移取目的细胞群成为可能.目前,这项技术已在蛋白质组分析中获得成功应用,并有望对其产生较深远的影响.     

激光微束与光钳系统及其在生物学中的应用

本文从激光的生物效应出发,简要阐述了激光微束与光钳系统的出现历程及其装置构造,系统分析了其作用原理,并介绍了其作为一新技术,在外源基因导入,体外辅助受精,细菌融合和显微操作染色体与生物大分子等方面的应用状况,同时对其应用前景作一展望。     

微束激光转基因技术研究进展

本文叙述了激光微速穿刺法导入外源ＤＮＡ的基本原理及其有关影响因素等。利用该转化方法,现已成功地获得了多种动植物细胞外源基因的转化。实验证明,激光微束穿刺转化技术简便有效、重复性好、靶体选择性强,对靶体无损伤等优点。随着转化技术自动化水平的提高。光镊技术的渗透和结合,激光微束转化技术将会得到更广泛的应用     

利用RNA干涉技术及微束激光转化法培育抗病毒马铃薯

针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究。采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANN IBAL中,得到了载体pH IV,再用NoⅠt对pH IV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNA i载体pAR IV。采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern b lot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2~4之间。攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVYo以及PVX和PVYo混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照。这一结果将为利用RNA i干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNA i)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段。     

Plant molecular and cellular laser microsurgery

The u.v. laser microbeam has facilitated new approaches to the genetic manipulation of plant cells. Under visual control, a focused laser microbeam is able to perforate a plant cell wall, thus facilitating the uptake of genes into target cells, induce protoplast fusion selectively and precisely destroy cells or specific subcellular structures in a single living cell. In addition, by expanding these applications to micro-dissection of chromosomes, microsurgery combined with an optical trap inside cells and patch-clamp studies, will open new genetic, biophysical and cell-specific wall development aspects in cell and molecular biology.     

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究

本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料,以子叶柄为外植体,研究了微束激光转化系统中的一些关键因素,如取材时间以播中后４－５天为宜;高渗液预处理２０－４０分钟者最佳;外源ＤＮＡ浓度以０．０５－０．１μｇ／μｌ获得转基因植株最有利等。已建立一种操作简便,重复性好,并能准确定位于靶体细胞的转化体系,并用这个转化体系成功地将菜豆几丁酶基因导入油菜,并获得转基因植株。经ＰＣＲ扩增检测为阳性,实验结     

利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究

利用激光微束照射油菜子叶柄,将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中,经植株再生和卡那霉素筛选,获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验,发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性,某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。