视黄酸对人肝癌细胞蛋白激酶的影响

 视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,这提示在RA作用过程中,未发生PK-C的膜-浆转位。蛋白激酶A(PK-A)的变化则相反,RA处理72小时,活力、比活力上升了295％,258％。PK-A/PK-C的活力比值则从0.342增加到1.849,比活力比值从0.210增加到0.897。因PKC和PKA分别和细胞的去分化性增殖和分化有关,故上述结果和我们已报道的RA可抑制SMMC-7721细胞株的增殖和促进其分化相一致。     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体付糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶Ⅱ的特异抑制剂,研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系．发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型。胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析：发现Ｓｗ不改变Ｉｎｓ－Ｒ的结合容量和每个细胞表面的结合位点数,也不改变结合动力学。再用部分纯化的Ｉｎｓ－Ｒ研究自身磷酸化和对外源底物的酪氨酸蛋白激酶活力,也未发现Ｓｗ处理和对照细胞间的明显区别,表示Ｓｗ也不影响Ｉｓｎ－Ｒ的跨膜信息传递,结合已报道的衣霉素使细胞表面Ｉｎｓ－Ｒ减少的结果,提示Ｉｎｓ－Ｒ运送至细胞膜需要Ｎ－糖链存在,但糖链的类型对ＩＮＳ－Ｒ的代谢和结合动力学并不重要     

二种癌细胞株的胰岛素及转铁蛋白受体的鉴定

二种癌细胞株的胰岛素及转铁蛋白受体的鉴定唐月华,张新,夏曙莉,景乃禾,冯佑民（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室;中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词人卵巢畸胎癌细胞株ＰＡ－１,小鼠乳腺癌细胞株ＧＲ２Ｈ６,胰岛素受体,...     

小肠平滑肌胰岛素受体的特征及其蛋白激酶活性

 本实验对狗小肠平滑肌中胰岛素受体的结构和特征进行了分析研究。通过麦胚凝集素琼脂糖和两次Sepharose-CL-6B凝胶层析从平滑肌中纯化胰岛素受体,达到电泳纯。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明胰岛素受体是由两个亚基组成的,分子量分别为135kD和90kD。磷酸化实验证明平滑肌胰岛素受体具有胰岛素依赖性蛋白激酶活性,能催化自身的β亚基磷酸化和底物的磷酸化。Scatchard分析表明胰岛素和受体的结合呈(?)协同效应,最大结合率为13μg胰岛素/mg蛋白质。     

胰岛素受体底物家族中的两个新成员

胰岛素受体底物蛋白参与多种激素,细胞因子的信号转导,可联系下游含ＳＨ２结构域的蛋白,它是一种极为重要的信号传递中介分子,胰岛素受体底物家族有４个成员。本文从基因结构,蛋白质结构介绍新发现的两个成员（ＩＲＳ－３,ＩＲＳ－４）的一些基本特征。     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体Ｎ－糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶ＩＩ的特异抑制剂。研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系,发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型,胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析,发现Ｓ     

胰岛素对βTC-3细胞胰岛素受体表达的作用

目的：观察外源性胰岛素对小鼠胰岛β细胞瘤细胞株βTC-3细胞胰岛素受体表达的影响。方法：采用免疫荧光细胞化学技术结合激光扫描共聚焦显微镜观察高浓度胰岛素（100 IU/ml）刺激不同时间（0 min、30 min、60 min、120 min、240 min）,培养的βTC-3细胞胰岛素受体的表达,用Image pro plus软件对胰岛素受体的荧光强度进行了半定量分析。结果：与0 min比较,胰岛素孵育30 min、60 min、120 min、240 min时胰岛素受体荧光强度均明显下降（P〈0.05）。结论：高浓度胰岛素孵育βTC3细胞后,可明显下调胰岛素受体的表达,这可能是高胰岛素血症导致胰岛素抵抗产生的机制之一。     

维甲酸对亚硝胺诱发大鼠肝癌的阻断作用

二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌过程中,可使肝中增殖指标γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）,谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）,胞液和膜性酪氨酸蛋白激酶（ｃ－ＴＰＫ,ｍ－ＴＰＫ）有不同程度的逐步升高,直至１６周（除ｃ－ＴＰＫ在第１２周活力最高外）,而分化指标精氨酸酶（ＡＧＮ）则明显降低,如在诱癌开始的同时给予全反式维甲酸（ＲＡ）连续１６周则可延缓γ－ＧＴ、ＧＳＴ和两种ＴＰＫ的升高和ＡＧＮ的降低,这种作用并非ＲＡ本身对酶活力的影响,而是ＲＡ阻断肝癌发展的结果。     

孤生受体的相互作用对视黄酸应答元件的影响

孤生受体ＣＯＵＰ－ＴＦ和ｎｕｒ７７的功能及其作用机理仍未阐明．以ＤＮＡ瞬时转染和测定氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性,以及凝胶阻抑测定,分析ＣＯＵＰ－ＴＦ和ｎｕｒ７７的相互作用对视黄酸应答元件（ＲＡＲＥｓ）的影响．实验表明,ＣＯＵＰ－ＴＦ通过降低ＲＡＲＥｓ的基础活性,来增强ＲＡＲＥ对视黄酸（ＲＡ）的敏感性,而ｎｕｒ７７则拮抗ＣＯＵＰ－ＴＦ的作用．ｎｕｒ７７能够加强不同ＲＡＲＥｓ的转录活性,并且与ＲＡ的诱导无关．结果证实,ｎｕｒ７７通过与ＣＯＵＰ－ＴＦ的直接作用而对ＲＡＲＥｓ产生影响,从而抑制ＣＯＵＰ－ＴＦ与ＲＡＲＥｓ结合和ＣＯＵＰ－ＴＦ的转录活性     

视黄酸对人肝癌细胞表面N糖链类型及天线数的影响

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶处理研究了在视黄酸(RA)作用1—5天过程中人肝癌细胞株SMMC-7721细胞表面N糖链结构的变化。结果表明,RA促进3~H-甘露糖(Man)参入细胞表面N糖链,使高甘露糖型N糖链的百分比下降,复杂型百分比上升,并促进二天线N糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和C_2,C_(21)b三天线N糖链的合成减少。结果提示,N糖链结构的这些变化可能是RA诱导SMMC-7721细胞向正常方向分化的结果。     

K-562细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性及内源性底物的研究

本文对丁酸钠诱导分化的人白血病细胞株K-562细胞的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶性及细胞内源性底物进行了研究。结果表明,诱导分化后的细胞酪氨酸蛋白激活酶活性降低,胰岛素受体数量减少,酪氨酸蛋白激酶的一底物蛋白在分化后消失。该研究结果及其在该方面的进一步研究有可能为白血病发病机制的阐明以及为临床治疗白血病开辟靳途径提供一些有价值的线索。     

衣霉素对胰岛素受体结合胰岛素及内吞作用的影响

本文研究了人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的胰岛素受体与＾１２５Ｉ－胰岛素结合的条件,并比较了衣霉素处理和对照细胞的结合动力学和内吞作用。结果表明：４℃和ＰＨ８是研究胰岛素受体与配体结合的较佳条件,当０．１ｕｇ／ｍｌ衣霉素处理１８小时,Ｓｃａｔｓｈａｒｄ作图分析指出,胰岛素受体的结合容量降低,每个细胞上的受体位点数减少。Ｈｉｌｌ作图分析说明,胰岛素和受体的亲和力（胰岛素半饱和浓度和表观解离常数）及结合     

衣霉素对人肝癌细胞表面胰岛素受体的影响

衣霉素(Tunicamycin)是一种糖蛋白N-连接型糖链合成的抑制剂。它可抑制人肝癌细胞抹SMMC-7721的生长,其抑制率和剂量及处理时间有相关性。衣霉素处理细胞18h尚可显著抑制~3H-甘露糖和~3H-氨基葡萄糖参入细胞,但仅轻度抑制~3H-亮氨酸的参入。这些标记化合物的参入抑制都有量效关系。0.1gg/mL衣霉素处理18h后,细胞表面胰岛素受体和胰岛素的结合容量下降,而对照细胞和处理细胞的胰岛素竞争结合曲线基本平行。这主要由于衣霉素抑制新合成的胰岛素受体的糖基化所致。我们对糖基化障碍引起细胞膜胰岛素受体结合容量降低的机理作了讨论。     

甲状腺素及维甲酸对成骨样细胞甲状旁腺素受体的调节作用

研究了甲状腺素（T3／T4）及维甲酸（RA）对大鼠成骨样细胞ROS17／2．8细胞林甲状旁腺素（PTH）受体的调节作用．实验结果表明：细胞经T3／T4处理后,可显著增高PTH受体结合率及碱性磷酸酶活性,以及PTH受体mRNA的表达．细胞经RA处理后,则相反地降低PTH受体结合率及碱性磷酸酶活性．