聚乳酸微柱阵列型拓扑结构基底上SH-SY5Y细胞VEGF和IL-8的分泌及表达

以紫外光光刻、硅蚀刻及复制模塑技术制备了聚乳酸 (PLLA) 微柱阵列型拓扑结构基底,考察了SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞在拓扑结构基底上的生长及血管内皮生长因子 (VEGF) 和白细胞介素-8 (IL-8) 的分泌及表达。细胞的形态及铺展采用扫描电子显微图像进行分析,细胞在拓扑结构基底上生长24 h后的VEGF及IL-8分泌量采用ELISA进行检测,VEGF及IL-8在mRNA水平的表达量以实时定量PCR进行评价。实验中成功制备了微柱名义直径为2 μm和4 μm、微柱名义间距为2 μm和7 μm的4种拓扑结构基底。研究发现,SH-SY5Y细胞在2-2 μm (微柱名义直径-名义间距)、4-2 μm、4-7 μm拓扑结构基底上的VEGF和/或IL-8分泌量和表达较之PLLA平面基底上相应值出现上调,而在2-7 μm拓扑结构基底上VEGF及IL-8二者均表现出表达和分泌量大幅度和明显的上调。与在PLLA平面基底上相比,SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上表现出细胞形态 (铺展面积及圆度) 的明显变化,细胞VEGF及IL-8分泌量和表达的上调伴随细胞铺展面积的明显降低。结果表明微柱阵列型拓扑结构是影响SH-SY5Y细胞VEGF、IL-8分泌及表达的重要微环境因素,VEGF和IL-8可能构成SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上生长的重要分泌物标志。     

人白介素6受体胞外区三维结构的同源模拟

IL-6受体是造血因子超家族成员,其胞外区细胞因子结合结构域（CBD）是受体结合配基和偶联gp130转导IL-6信号的功能域.据预测,IL-6R功能域的β片层折叠模式和人生长激素受体（hGH-R）及CD₄的晶体结构十分相似.应用计算机同源模拟技术,以hGH-R和CD₄的三维结构为模板,模建了hIL-6R功能域（106～322位）的三维结构,初步描述了其结构保守区的构象特征.文章研究模建的hIL-6R三维结构模式为探讨可溶性IL-6R点突变的结果,以及进行三维定量分析IL-6R胞外区功能域的构效关系提供了空间结构基础.     

IL-4Rα胞外段的真核表达及鼠源单克隆抗体的制备与鉴定

目的表达IL-4Rα胞外段蛋白(IL-4 receptor α extracellular domain, IL-4Rα ECD),并制备对IL-4及IL-13与IL-4R结合具有阻断能力的抗IL-4Rα鼠源单克隆抗体(单抗)。方法构建含IL-4Rα ECD DNA序列的真核表达质粒,转染Expi293F细胞,对上清中的IL-4Rα ECD进行纯化。采用SDS-PAGE及Western blot对该蛋白进行纯度分析及鉴别;将其免疫小鼠后,筛选相应的鼠源单抗;分别采用SDS-PAGE、Western blot、ELISA、流式细胞法及细胞抑制法对单抗的纯度、特异性、结合活性、阻断活性进行鉴定。结果酶切及测序结果表明,IL-4Rα ECD重组表达质粒构建正确;蛋白成功表达,相对分子质量为43 000～48 000,纯度在95%以上;免疫后小鼠血清效价在10~7以上;制备的1株鼠源单抗6-G2与IL-4Rα的ELISA半最大效应质量浓度(concentration for 50%of maximal effect, EC_(50))为10.4 ng/mL;竞争ELISA检测结果显示,6-G2单抗对IL-4与IL-4Rα结合的最大抑制率为27.3%;流式细胞法检测结果显示,6-G2单抗能阻断IL-13与相应受体的结合;细胞增殖抑制法检测结果显示,6-G2单抗几乎能完全抑制细胞的增殖。结论成功表达并纯化了IL-4Rα ECD,制备的抗IL-4Rα鼠源单抗6-G2单抗能同时阻断IL-4及IL-13与IL-4R的结合,为后续开发针对抗IL-4Rα的治疗性抗体药物奠定了基础。     

口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性

以O型、A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1全基因和AsiaI型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)为基因佐剂,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因。将构建好的表达盒OAAT与SEA融合表达基因克隆至真核表达载体PVAX1PCMV启动子下游,构建了口蹄疫三价基因佐剂DNA疫苗pEA。经Western blotting和IFA检测,目的蛋白在Hela细胞中获得正确表达。小鼠免疫实验表明,pA和pEA免疫组的血清抗体均能分别与O型、A型和AsiaI抗原反应,与对照组相比差异较显著,且pEA免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pA免疫组;同时pA和pEA免疫小鼠细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10较对照组显著提高,且pEA免疫组的IL-2、IFN-γ和IL-4水平明显高于pA免疫组。用O/NY00和Asia1/YNBS/58株FMDV进行...     

Kruppel样因子4对内毒素所致IL-6基因表达的调控及机制研究

探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究．使用RT-PCR和Western blot检测KLF4 mRNA和蛋白质的表达．采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6 mRNA和蛋白质的表达．采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响．使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合．结果表明：LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达．KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失．荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性．EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合．结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放．KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的．     

芒果苷对慢性支气管炎大鼠CD4~+T淋巴细胞的影响

本研究旨在探讨芒果苷对香烟烟熏诱导慢性支气管炎大鼠CD4+T淋巴细胞比例及其产生淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)的影响。大鼠随机分为正常组、模型组与芒果苷200、100 mg/(kg·d)组,香烟烟熏6周建立慢性支气管炎大鼠模型,随后灌胃给药4周。以流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞比例;流式分选获得CD4+T淋巴细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)测定其IL-2、IL-4水平,实时荧光RT-PCR检测其IL-2、IL-4基因表达;HE染色检测支气管炎症病理形态。实验结果显示,与模型组比较,芒果苷组CD4+T淋巴细胞比例明显降低,IL-2、IL-4基因与蛋白表达水平显著下调,慢性支气管炎症显著减轻。该结果提示,芒果苷可下调CD4+T淋巴细胞比例并减少淋巴因子IL-2、IL-4的产生,此作用可能与其减轻慢性支气管炎症有关。     

IL-4/IL-4R与肿瘤关系的研究进展

白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)是一种主要由2型T辅助细胞(Th2)分泌的多功能细胞因子,可特异性地与靶细胞表面的IL-4受体(interleukin-4 receptor,IL-4R)结合,发挥相应的生物学作用。在机体免疫反应中,IL-4/IL-4R可通过调节T细胞分化,抑制B淋巴细胞凋亡,诱发Ig E表型转换等方面引起哮喘、过敏等疾病。除此之外,IL-4/IL-4R还可以在肿瘤的发展中发挥不同的作用。因此,本文就IL-4/IL-4R对肿瘤发展影响的研究进展作一综述。     

芒果苷对慢性支气管炎大鼠CD4^＋T淋巴细胞的影响北大核心CSCD

本研究旨在探讨芒果苷对香烟烟熏诱导慢性支气管炎大鼠CD4+T淋巴细胞比例及其产生淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)的影响。大鼠随机分为正常组、模型组与芒果苷200、100 mg/(kg·d)组,香烟烟熏6周建立慢性支气管炎大鼠模型,随后灌胃给药4周。以流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞比例;流式分选获得CD4+T淋巴细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)测定其IL-2、IL-4水平,实时荧光RT-PCR检测其IL-2、IL-4基因表达;HE染色检测支气管炎症病理形态。实验结果显示,与模型组比较,芒果苷组CD4+T淋巴细胞比例明显降低,IL-2、IL-4基因与蛋白表达水平显著下调,慢性支气管炎症显著减轻。该结果提示,芒果苷可下调CD4+T淋巴细胞比例并减少淋巴因子IL-2、IL-4的产生,此作用可能与其减轻慢性支气管炎症有关。     

sTim-3与CD4~+ T细胞亚群细胞因子在肺结核中的表达

[目的]分析sTim-3与CD4~+ T细胞亚群细胞因子在维吾尔族肺结核患者中的表达及相关性。[方法]收集肺结核患者45例和健康对照40例外周血,ELISA方法检测研究对象血清中sTim-3、IFN-γ、IL-4、IL-17A和IL-22的含量,Pearson法分析肺结核患者血清中sTim-3与上述细胞因子间的相关性。[结果]肺结核患者、痰涂片阳性和阴性组血清sTim-3、IL-4、IL-17A和IL-22含量均高于对照组,IFN-γ含量均低于对照组(P 0. 05); sTim-3与IFN-γ负相关(r=-0. 473,P=0. 001),与IL-4正相关(r=0. 326,P=0. 029),与IL-17A、IL-22间均无相关性(P 0. 05)。[结论]肺结核患者体内sTim-3、IL-4、IL-17A和IL-22高表达,IFN-γ低表达,sTim-3与IFN-γ、IL-4具有相关性,sTim-3可能通过影响CD4~+ T细胞亚群细胞因子的分泌参与维吾尔族肺结核的发病。     

白细胞介素-1的分子生物学

本文先简述了IL-1的来源及生物功能,接着对不同生物的IL-1α、IL-1β前体蛋白进行了同源性比较和分析,然后就人类IL-1β分子前结构与功能的关系及空间结构进行了探讨。     

HIV感染患者血清IL-2、IL-16水平和CD4细胞计数的相关性分析

目的:探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-16(IL-16)水平和CD4细胞计数的相关性。方法:选择2017年3月至2018年3月我院接诊的50例HIV感染患者作为观察组及同期于我院进行体检的健康人群40例作为对照组。检测和比较两组血清IL-2、IL-16与CD4细胞计数,并分析观察组血清IL-2、IL-16与CD4细胞计数的相关性。结果:观察组患者血清IL-2、IL-16水平及CD4细胞计数显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);Pearson相关分析结果显示观察组患者血清IL-2、IL-16水平与CD4细胞计数呈显著正相关(r=0.514,r=0.499,P0.05)。结论:HIV感染患者血清IL-2、IL-16水平显著下调,并与CD4细胞计数呈显著正相关,可在一定程度上反映HIV感染的严重度。     

抗人白细胞介素15中和抗体识别抗原表位的噬菌体肽库筛选与鉴定

目的:用噬菌体呈现随机七肽库筛选能与抗人白细胞介素15(h IL-15)中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽,并初步鉴定其免疫原性。方法:以抗h IL-15中和抗体为靶分子,用生物淘洗法从噬菌体呈现线性七肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆,用噬菌体ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;化学合成筛选得到的多肽,并与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联免疫BALB/c小鼠,检测其免疫原性。结果:经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆,ELISA检测结果显示其中15个克隆与抗h IL-15抗体有较强的结合能力,DNA测序结果得到的结构相似群为MTPFWQK、MSPFNQK、MIPYWQK和MIPFHQK;竞争性ELISA结果显示4个序列均能与IL-15竞争性地结合抗IL-15单抗;小鼠免疫实验结果显示4组多肽均能诱导IL-15特异性免疫反应。结论:筛选得到能与抗h IL-15中和抗体特异性结合,且具有免疫原性的模拟抗原7肽序列,为进一步开发h IL-15相关的多肽疫苗提供了依据。     

重组人IL-4抗血清的制备及鉴定

白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检测IL-4水平,但价格昂贵。本实验制备rhIL-4抗血清以应用于IL-4的生物学活性研究及临床检测IL-4水平等方面。     

吸烟对下呼吸道感染患者诱导痰中 IL-4和IL-17的影响

目的探究吸烟对下呼吸道感染患者诱导痰中白介素4(IL-4)和白介素17(IL-17)的影响。方法采用酶联免疫吸附法分别对吸烟与非吸烟下呼吸道感染患者(共88例)以及76例健康体检者诱导痰中IL-4和IL-17水平进行检测,并对结果进行分析。结果下呼吸道感染患者中吸烟者与非吸烟者IL-4和IL-17水平比较差异均有统计学意义(P0.05)。健康体检者中吸烟者与非吸烟者IL-4、IL-17比较差异也具有统计学意义(P0.05)。结论吸烟与下呼吸道诱导痰中IL-4、IL-17的表达水平具有相关性,吸烟可使下呼吸道诱导痰中IL-4、IL-17水平升高。     

哮喘豚鼠IFN-γ／IL-4失衡与IgE水平相关性研究

采用ELISA法、放免法和化学发光法分别观察哮喘豚鼠血清及肺组织匀浆中IFN-γ,IL-4,IgE的含量变化,以及IFN-γ/IL-4与IgE的相关性在哮喘发病机制中的关系和作用。结果表明:哮喘组血清及肺组织一浆中IL-4,IgE含量明显高于对照组(P<0.01),IFN-γ水平明显低于对照组(血清P<0.01;肺组织 P<0.05)。直线相关分析结果表明:IFN-γ,IL-4和IFN-γ/IL-4与IgE呈显著相关性,其中IFN-γ/IL-4与IgE呈显著负相关(血清中 P<0.05;肺组织匀浆中 P<0.01),提示IFN-γ/IL-4的失衡及IgE水平升高在哮喘发病中可能发挥重要作用。     

骨关节炎中的炎性因子与骨关节严重程度相关性分析

本研究旨在探索骨关节炎患者体内炎性因子IL-4、s IL-4R、b FGF与病情程度的相关性。选取骨关节炎患者65例,根据ISOA评分对其进行严重程度分级后,对其血清及关节液中的IL-4、s IL-4R和b FGF进行检测,分析各指标与患者病情严重程度的相关性。结果发现,观察组血清和关节液中的s IL-4R、b FGF的含量均明显高于对照组,差异有统计学意义。而IL-4在不同组别及观察组不同严重程度患者血清及关节液中均无明显差异(p0.05);在不同程度骨关节炎患者体内s IL-4R、b FGF与ISOA评分值存在线性相关关系,差异有统计学意义。由此可认为,患者血清及关节液中s IL-4R、b FGF两项指标含量与关节炎严重程度相关,应该引起临床医师的足够重视,并采取相应的治疗措施。     

血清IL-4、IL-6、IL-33与老年重症肺炎患者肠道菌群的相关性分析及对预后的影响

摘要 目的：探究老年重症肺炎患者血清白介素（IL）-4、IL-6、IL-33与肠道菌群变化的相关性及预后影响因素。方法：选取我院2020年1月-2022年1月期间收治的老年重症肺炎患者中筛选82例纳入重症组,从同期老年健康体检志愿者中选取50例纳入正常组。对比两组的IL-4、IL-6、IL-33与肠道菌群水平差异,Pearson相关系数分析肠道菌群与IL-4、IL-6、IL-33水平相关性,根据重症组随访6个月的预后情况分为生存组55例、死亡组27例,对比生存组、死亡组的临床因素差异,多因素Logistic回归模型分析重症肺炎死亡的影响因素。结果：（1）对比正常组,重症组的IL-4、IL-6、IL-33水平均明显升高（P<0.05）;（2）对比正常组,重症组的大肠埃希菌水平均明显升高且双歧杆菌水平明显降低（P<0.05）;（3）大肠埃希菌与IL-4、IL-6、IL-33均呈正相关,双歧杆菌与IL-4、IL-6、IL-33均呈负相关;（4）对比生存组,死亡组年龄、急性生理和慢性健康（APACHE-Ⅱ）评分、IL-4、IL-6、IL-33、大肠埃希菌、机械通气比例、餐后2 h平卧比例均明显更高且双歧杆菌明显更低（P<0.05）;（5）重症肺炎死亡的独立危险因素包括年龄增加、APACHE-Ⅱ评分升高、IL-4升高、IL-6升高、IL-33升高、大肠埃希菌升高、机械通气、餐后2 h平卧且独立保护因素是双歧杆菌升高。结论：老年重症肺炎患者存在明显的炎症反应与肠道菌群失衡,患者的IL-4、IL-6、IL-33、大肠埃希菌、双歧杆菌异常变化并且存在密切关系,老年重症肺炎患者的年龄、机械通气、餐后体位等因素均会影响其预后生存结局。     

卵巢癌患者血清HE4、CA125、CA72-4及炎性因子水平检测的临床价值评估

目的:探讨血清人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原72-4(CA72-4)及炎性因子IL-6、IL-8、IL-17水平检测对卵巢癌患者的临床价值。方法:选取2015年2月至2017年2月我院收治的卵巢肿瘤患者81例,包括卵巢恶性肿瘤组39例及卵巢良性肿瘤组42例,另选42例健康人作正常对照组,比较各组及临床不同分期卵巢癌患者血清HE4、CA125、CA72-4、IL-6、IL-8、IL-17水平的差异。结果:卵巢恶性肿瘤组血清HE4、CA125、CA72-4、IL-6、IL-8及IL-17水平均显著高于对照组(P0.05),而卵巢良性肿瘤组与对照组以上指标比较差异并无统计学意义(P0.05);随卵巢癌分期增加,患者血清HE4、CA125、CA72-4、IL-6、IL-8及IL-17水平呈上升趋势,以血清HE4、CA125及IL-17增加较为显著(P0.05),而Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期卵巢癌患者血清CA72-4、IL-6及IL-8在增加并不明显(P0.05)。结论:卵巢癌患者血清HE4、CA125、CA72-4、IL-6、IL-8及IL-17水平较高,且随临床分期增加呈上升趋势,以上指标可能有助于卵巢癌的诊断、治疗及病情评估。     

小儿难治性支原体肺炎血清TNF-α、IL-4、IL-10水平变化及临床意义

目的:探讨小儿难治性支原体肺炎(RMPP)血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平变化及临床意义。方法:选自我院2013年1月至2016年1月收治的90例RMPP住院患儿设为RMPP组,根据肺炎严重指数(PSI)评分标准分为重症肺炎组(30例)和非重症肺炎组(60例),并选择同期健康体检的健康儿童为50例对照组。并对患儿进行跟踪、随访,收集47例患儿作为RMPP恢复期组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清中TNF-α、IL-4、IL-10的水平变化。结果:RMPP组、RMPP恢复期组患者血清中TNF-α、IL-4和IL-10水平明显高于对照组(P0.05);RMPP组患者血清中以上三个指标均明显高于RMPP恢复期组(P0.05);重症肺炎组有纤维化改变和无纤维化的患儿血清中TNF-α、IL-4和IL-10水平均高于非重症肺炎组患儿血清(P0.05);重症肺炎组和非重症肺炎组内出现纤维化改变的患儿血清中TNF-α、IL-4和IL-10水平均高于无纤维化患儿(P0.05);PSI评分与TNF-α、IL-4和IL-10的水平呈正相关(P0.05)。结论:TNF-α、IL-4和IL-10水平参与了RMPP的发病过程,它们高水平表达与病情严重程度密切相关,可以作为早期诊断RMPP及控制病情发展的重要依据。     

中华鳖白细胞介素21基因cDNA克隆及生物信息学分析

目的:从中华鳖脾脏、肝脏、肠道构建的SMARTer cDNA文库中克隆中华鳖白细胞介素21(IL-21)基因的cDNA。方法:采用cDNA末端快速扩增(RACE)法克隆中华鳖IL-21基因cDNA序列,并利用生物学软件进行生物信息学分析。结果:中华鳖IL-21 cDNA长874 bp,其编码产物包含135个氨基酸残基,二级结构主要包括α螺旋、延伸链、无规则卷曲和β转角,三级结构包括信号肽和IL-15结构域。系统进化分析表明其与鸟类首先聚类,其次为哺乳类。以人IL-21为模型,构建了中华鳖IL-21的3D结构模型。结论:从生物信息学分析可知我们所获序列为中华鳖IL-21 cDNA,为深入研究中华鳖IL-21及相关通路奠定了基础。