CTLA4-Ig在心血管疾病治疗上的应用

T细胞激活需要两种信号。第一激活信号来自TCR与CD3分子,第二激活信号来自共刺激激活分子CD28,在T细胞激活中,这两种信号缺一不可。共抑制分子--细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(coinhibitory receptor cytotoxic T lymphocyte-associat-ed antigen 4,CTLA-4)与CD28配体结合则引起T细胞的失能。CTLA4是在激活的T细胞膜表面诱导性表达的分子,可以与     

肿瘤患者CD8+T细胞中CD28表达的研究进展

CD28与B7结合形成的共刺激信号是T细胞激活的第二信号,肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28分子在肿瘤免疫中发挥着重要作用。人体抗肿瘤免疫主要由CD8^＋T细胞介导,根据CD28的表达与否可将CD8^＋T细胞分为细胞毒T细胞（CD8^＋CD28^＋,CTL）和抑制性T细胞（CD8^＋C28^-,Ts）。CTL是体内杀伤肿瘤细胞的主要功能性细胞之一,当该细胞与肿瘤接触时,通过共刺激信号而被激活,发挥其对肿瘤细胞的杀伤作用;Ts在机体的免疫耐受中发挥作用。现就肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28的表达作一综述。     

新型双特异性单链抗体BiTEs及其在肿瘤治疗中的应用前景

BiTEs(bispecificTcellengagers)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体 ,它具有两个抗原结合臂 ,可以同时和T细胞及靶细胞结合 ,并激活细胞毒性T细胞杀伤病变细胞。和其它双特异性抗体相比 ,BiTEs的分子柔韧性更好 ,能更好地促进CD3复合体和肿瘤靶标的连接 ,并且它不受T细胞受体和靶细胞上MHCⅠ类分子的约束 ,不需要共刺激分子的参与 ,是一种极具应用潜力的抗体形式。就BiTEs的结构、作用机理及其在肿瘤临床上的应用前景几个方面做一综述。     

LAG-3分子的研究进展

淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3,CD223)是免疫球蛋白超家族的成员之一,是对淋巴细胞具有抑制作用的分子。LAG-3定位于人12号染色体,与CD4具有密切关系。研究发现猪LAG-3分子的结构和表达模式在哺乳动物物种中是共有的,并且可溶性的猪LAG-3对控制人-猪异种T细胞免疫反应有作用。LAG-3分子主要表达于活化的NK细胞、T淋巴细胞表面,与HLA-II高亲和力结合。Tr细胞是具有调节调节功能的T细胞亚群,发现Tr细胞表面标志CD49b和LAG-3可在人和小鼠Tr1细胞表面表达。CD49b和LAG-3的发现,使得在体内对Tr细胞进行跟踪具有可行性,纯化Tr1细胞作为一种细胞治疗方法具有可行性。LAG-3通过对胰腺中抗原特异性T细胞增殖的选择性抑制,可以使用LAG-3作为1型糖尿病病情进展的一种新的替代标记,检测LAG-3分子可能成为T细胞定向免疫治疗效果评估的一种方法。肿瘤浸润的CD8+T细胞表面LAG-3表达上调,LAG-3的抑制作用在HCC的细胞免疫应答中发挥着重要的作用,可见阻断LAG-3分子的表达有可能成为治疗肿瘤的新方法。慢性病毒感染性疾病时常常发生T细胞衰竭,T细胞通过LAG-3分子的限制作用和MHCⅡ类信号分子的表达其抑制功能,这有利于慢性病毒感染性疾病的治疗。疟原虫感染增加了抑制性受体LAG-3的表达,疟原虫感染引起的特异性T细胞功能衰竭可通过抑制性疗法来治疗。LAG-3的表达可能有利于黑色素瘤的增殖,阻断LAG-3-MHCⅡ类分子相互作用的化合物可用于黑色素瘤的治疗。此外,使用LAG-3毒性抗体选择性的靶向激活T细胞可阻碍T细胞参与的迟发型超敏反应。     

黑龙江立克次体重组外膜蛋白B激活树突状细胞诱导C3H/HeN小鼠特异性免疫应答

专性胞内寄生的黑龙江立克次体是远东斑点热的病原体,外膜蛋白B(OmpB)是其最主要的表面蛋白抗原.本研究将黑龙江立克次体ompB基因分成4段插入原核表达载体,制备出4个重组OmpB抗原(OmpB-P1,OmpB-P2,OmpB-P3和OmpB-P4).将4个重组OmpB抗原分别刺激体外培养的C3H/HeN小鼠树突状细胞,再将这些抗原激活树突状细胞分别腹腔接种正常C3H/HeN小鼠.接种第14天用黑龙江立克次体攻击小鼠,7天后活杀小鼠并用实时定量PCR检测小鼠主要脏器的立克次体的载量.结果显示,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4激活树突状细胞受体小鼠的立克次体载量显著低于OmpB-P1激活树突状细胞受体小鼠.将不同抗原激活小鼠树突状细胞分别与同源抗原激活小鼠树突状细胞受体小鼠的CD4+和CD8+T细胞体外共培养.用流式细胞仪分析共培养后CD4+和CD8+T细胞的表面分子和细胞因子表达,结果显示,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4抗原激活树突状细胞共培养的CD4+或CD8+T细胞的CD69表达水平高于OmpB-P1激活树突状细胞共培养的T细胞.此外,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4激活树突状细胞共培养的CD4+或CD8+T细胞的TNF-?和IFN-?水平均显著高于OmpB-P1激活树突状细胞共培养的T细胞.本研究结果表明,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4为保护性抗原,其激活的树突状细胞可以有效地诱导T淋巴细胞活化,使CD4+T细胞和CD8+T细胞分别向Th1细胞和Tc1细胞分化,产生高水平TNF-?和IFN-?共同对抗立克次体感染.     

Science:在体外成功重建T细胞受体信号通路

正T细胞在抵抗感染的适应性免疫反应中发挥着至关重要的作用,是宿主免疫系统的关键组成部分。在MHC分子递呈下,外源抗原接触T细胞受体(TCR)从而启动初始T细胞(naive T cell)激活,并且这种激活也需要诸如CD28之类的共刺激分子(costimulatory molecule)的参与。这种TCR-CD28共刺激触发信号事件级联反应,启动T细胞的激活和随后的分化。T细胞激活后会引发T细胞介导的免疫反应,这会有效地清除入侵的病原体和发生病变的细胞,同时也通过区分自我抗原和外源抗原,避免     

记忆型CD8阳性T淋巴细胞快速发挥效应功能需要早期代谢过程向糖酵解转变

<正>接触过抗原的记忆型T细胞通过固有的动力学获得效应功能;但是,这些细胞的代谢需求并不清楚。本文作者发现效应性记忆型(effector memory,EM)T细胞能够快速产生IFN-gamma,是通过T细胞抗原受体(T cell antigen receptor,TCR)和共刺激分子CD28的激活,或者是类似的作用方式,而这种激活过程与糖酵解的增加相关。EM CD8+T cells的三磷酸甘油醛脱氢酶活性在早期明显增加,早于增殖开始,这点与相同处理的静息T细胞不同。CD28信号通过丝苏氨酸激酶Akt发挥功能,代     

Lck和Fyn对T细胞发育过程的影响

胸腺中T细胞的发育及次级淋巴组织中成熟T细胞的活化均需要细胞能够对环境信号分子做出适应性的反应。在共刺激分子及细胞因子受体介导的信号参与下通过TCR(T cell receptor)及其辅助受体CD4和CD8与MHC/抗原肽复合物相互作用,可以诱导TCR信号通路激活并最终导致T细胞免疫反应的发生。Src家族激酶Lck(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase)和Fyn(Proto-oncogene tyrosine-protein kinase)的激活是启动TCR信号通路的关键因素。在T细胞的发育、阳性选择、初始T细胞的外周存活及由淋巴细胞缺失诱导的细胞增殖中都起着关键性的作用。研究显示,虽然这两种信号分子紧密相关,但在某些条件下Lck发挥着比Fyn更重要的作用,并且Fyn仅可以补充Lck的部分功能。文章针对这两个激酶在T细胞发育的整个过程中的作用机制进行了论述。     

Lck和Fyn对T细胞发育过程的影响

胸腺中T细胞的发育及次级淋巴组织中成熟T细胞的活化均需要细胞能够对环境信号分子做出适应性的反应。在共刺激分子及细胞因子受体介导的信号参与下通过TCR(T cell receptor )及其辅助受体CD4和CD8与MHC/抗原肽复合物相互作用, 可以诱导TCR信号通路激活并最终导致T细胞免疫反应的发生。Src家族激酶Lck(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase)和Fyn (Proto-oncogene tyrosine-protein kinase)的激活是启动TCR信号通路的关键因素。在T细胞的发育、阳性选择、初始T细胞的外周存活及由淋巴细胞缺失诱导的细胞增殖中都起着关键性的作用。研究显示, 虽然这两种信号分子紧密相关, 但在某些条件下Lck发挥着比Fyn更重要的作用, 并且Fyn仅可以补充Lck的部分功能。文章针对这两个激酶在T细胞发育的整个过程中的作用机制进行了论述。     

CD4+T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

近年来,人们对CD4 T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用给予了极大的关注,CD4 T细胞不仅可通过IFN-γ依赖性等机制直接杀伤肿瘤细胞,而且在CD8 T细胞的激活、记忆性的细胞毒性T细胞(CTL)应答的产生、维持以及促进其存活等过程中发挥着重要作用,同时激活CD4 T细胞和CD8 T细胞是免疫治疗的理想策略;另外,CD4 CD25 调节性T细胞(Treg细胞)可能被肿瘤表达的自身抗原所诱导,与肿瘤免疫耐受的维持和抗肿瘤应答的下调有关,被认为是免疫治疗失败的主要原因,抑制该细胞亚群可增强治疗性肿瘤疫苗的临床效果.现就CD4 T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用的研究进展作一综述.     

CD28协同刺激信号传导的研究进展

T细胞表面分子CD28介导的协同刺激信号在T细胞的激活、增殖、抗凋亡及促进多种细胞因子的分泌中起重要作用。有关其活化信号在T细胞内的传导巳成为免疫研究的热点,近年的研究表明,CD28在T细胞内可通过多种信号传导分子,如P13K、GRB2、A-SMase、PKC-θ等传导活化信号,亦可通过ITK、MKP等传导活化抑制信号,从而调控T细胞的活化,增殖等作用。     

CAR-T细胞制备过程中磁珠法激活T细胞条件的优化

目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件。方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30 min,以激活T细胞。随后,通过细胞自动计数,检测不同激活条件对细胞活力和直径的影响;利用流式细胞术检测CD3~+T细胞所占比例;连续监测并绘制T细胞生长曲线,分析激活条件对T细胞增殖速度的影响。结果:以3种激活条件处理的细胞,在激活早期,细胞活力随着磁珠数的增加而降低;流式细胞术检测结果表明,随着磁珠数的降低,CD3~+T细胞所占比例呈上升趋势。然而,只有当PBMCs数与磁珠数比例为1∶1时,T细胞的生长速度最快,在第15 d时可扩增50倍。结论:T细胞激活条件对细胞活力及增殖有重要影响,PBMCs数与磁珠数比例为1∶1有利于T细胞快速扩增,这对在较短时间内获得足够的T细胞,缩短整个CAR-T细胞制备周期具有较重要的意义。     

一种新型的重组单链三特异抗体的构建与表达

双特异抗体由于其缺乏共刺激信号 ,激活的T细胞往往会导致凋亡。为了更有效地杀伤肿瘤细胞 ,构建了抗卵巢癌单链×抗CD3单链×抗CD2 8单域重组三特异抗体的表达载体。利用大肠杆菌中的分子伴侣FkpA与三特异抗体共表达 ,提高了三特异抗体的在BL2 1Star菌中的可溶性原核表达。ELISA结果显示 ,可溶性的重组单链三特异抗体 (sTRI)与SK OV 3细胞的膜抗原 ,Jurkat细胞上的CD3分子以及重组CD2 8抗原均有较强的结合活性。桥连试验证明该抗体能同时与SK OV 3细胞和Jurkat细胞结合。体外杀伤试验表明该抗体能激活外周血T细胞来杀伤肿瘤细胞。形态学观察也进一步说明该抗体具有良好的结合活性以及体外杀伤活性。这种新型的重组单链三特异抗体为基于T细胞的癌症免疫治疗建立了一个新的技术平台。     

CD4+CD25+调节性T细胞的外周维持

CD4 CD25 调节性T细胞作为一种抑制性T细胞功能亚群,在维持机体的免疫自稳和免疫耐受方面发挥了关键作用。该作用的发挥与其外周细胞库的维持密切相关。新近的研究显示CD4 CD25 调节性T细胞主要通过两种机制来维持其外周细胞库,一些功能分子参与其中。     

体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义

尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应信号分子的影响,了解脊髓灰质炎病毒在上皮细胞中启动免疫信号的具体分子机制。采用PCR方法扩增脊髓灰质炎病毒四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,经酶切纯化后与pcDNA3.1+真核表达载体连接,分别构建含目的基因的四种重组质粒。将重组质粒分别转染至人呼吸道上皮细胞16HBE中,48h后收集培养上清、细胞。提取细胞的总RNA,利用Q-PCR法分别检测四种结构蛋白表达所诱导的天然免疫信号分子的mRNA表达量。同时,上清、细胞裂解物分别与人T细胞共培养,检测其对T细胞增殖的影响。体外在16HBE细胞中分别表达SabinⅠ病毒VP1～VP4四种结构蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信号通路相关分子的表达,并且表达这四种蛋白的细胞裂解物与T细胞共培养后均表现出刺激T细胞非特异性增殖的效应。但是,仅有VP1、VP2表达所诱导分泌相关因子的培养上清才表现出间接刺激T细胞增殖的能力。SabinⅠ毒株的四种结构蛋白可激活NF-κB信号通路,促进T细胞的非特异性增殖,从而激活适应性免疫应答。     

CD1d/NKT在抗HBV和HCV中的作用

CD1d是人类白细胞表面的抗原分子,它可以将脂质抗原递呈给天然杀伤T细胞（NKT）,使其激活.而NKT是近年来发现的一类特殊的T细胞,它既可以表达T细胞表面标志,又可以表达天然杀伤细胞（NK）表面标志,能识别由CD1d递呈的抗原,广泛参与自身免疫调节.近年来,许多研究发现,CD1d/NKT可以有效抑制肝炎病毒的复制.     

新发现的CXCL16趋化因子及其受体

一种新的免疫系统分子——由入侵部位的防御性免疫细胞产生的趋化因子CXCLl6。这是迄今为止所发现的第二种可以膜结合方式合成的趋化因子。它属于CXC家族,同时具有CC家族和Cx3C家族(如Fractalkine)趋化因子的特征,它包含跨膜区和粘蛋白(mucin)样结构,以膜结合型和分泌型两种形式存在,主要表达于APC表面。其受体为BONZ0／CXCR6／STRL33／TYMSR的“孤儿受体”,该受体也是SIV／HIV的辅助受体,主要表达于Thl细胞、NK细胞和激活的CD8^ T细胞。CXCL16／BONZ0可能在效应T细胞的迁移、APC和CD8T细胞的相互作用、细胞免疫应答和炎症反应以及胸腺细胞的发育中发挥十分重要的作用。     

CD147在调节性T细胞中作用的研究进展

CD147是一种免疫球蛋白超家族,它与肿瘤侵袭和转染,类风湿性关节炎,病毒入侵,淋巴细胞的迁移和活化,老年痴呆症,疟原虫入侵等病理过程密切先关,已成为癌症等疾病的新型药物靶标分子。作为一个单次跨膜蛋白,CD147的多功能性依赖于它的胞外结构域以及细胞膜和细胞外多种分子的相互作用。有研究发现CD147可作为细胞膜受体并且在上皮细胞,肿瘤细胞和免疫T细胞中均有表达。其可作为T细胞亲环素受体并具有趋化T细胞的功能。近几年研究发现,CD147在调节性T细胞高表达并且具有标志性意义。该文就以作为活性调节性T细胞标志的CD147的潜在作用进展综述如下。     

PD-1通过抑制糖酵解,促进脂质裂解和脂肪酸氧化改变T细胞代谢重编码

<正>外周免疫耐受对维持免疫系统稳态至关重要。PD-1(CD279)及其配体,PD-L1(B7-H1;CD74)和PD-L2(B7-DC;CD273),参与外周免疫耐受的调控。T细胞激活伴随代谢重编码,并影响细胞发挥不同的效应功能。本文作者发现,PD-1信号可以抑制激活T细胞上调有氧糖酵解以及氨基酸代谢,增加细胞脂肪酸β氧化。PD-1通过上调CPT1A促进内源性脂质的氧化,通过增加ATGL诱导脂质裂解。同为共抑制分子,CTLA-4则在抑制糖酵解同时却不改变脂肪酸氧化,提示CTLA-4将细胞维持在非激活的代谢状态。作者发现了PD-1介导的抑制效应性T细胞分化的代谢机制--抑     

稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系的构建及鉴定

实体瘤缺乏明确的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)治疗靶点。因此,通过慢病毒将已经明确的靶点分子CD19带入实体瘤细胞系,研究CD19 CAR-T细胞对其的杀伤,能够为CAR-T细胞针对实体瘤的治疗提供潜在的支撑。本研究利用三质粒慢病毒系统构建了稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, FLUC)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的结肠癌CT26细胞系CT26-CD19-FLUC-GFP。该细胞系与CT26细胞系的生长活性一致。通过流式细胞术检测不同代次CT26-CD19-FLUC-GFP细胞,证实了CT26-CD19-FLUC-GFP细胞连续传代至第5、10、22代后CD19及GFP的稳定表达。进一步证实,连续传代至第22代的CT26-CD19-FLUC-GFP细胞中的CD19 mRNA及FLUC表达水平显著高于对照组CT26细胞。与T细胞相比,CD19 CAR-T细胞能够显著杀伤CT26-CD19-FLUC-GFP细胞及MC38-CD19细胞。CT26-CD19-FLUC-GFP细胞腹腔植入小鼠体内1周后,通过活体成像仪可以检测到腹腔区域的FLUC表达。上述结果表明,成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系,且该细胞系能够被CD19 CAR-T细胞特异性杀伤。