纤溶酶原受体与相关疾病的分子机制

纤溶酶原(PLG)经激活为纤溶酶(PLM)后,除了发挥纤溶和栓溶作用,还广泛参与胚胎发育、组织重构、伤口愈合等生理过程.近年来研究显示:PLM还与炎症、自身免疫、肿瘤和神经变性等存在紧密联系,而且已在细胞表面发现十几种PLG受体(PLGR)、结合蛋白.我们综述了这些受体和结合蛋白的结构、信号通路和致病机制方面的研究进展,从而为进一步理解纤溶系统的功能、发展新的诊疗方法提供思路.     

肿瘤低密度脂蛋白受体相关蛋白(即LRP1B)在急性白血病中的表达

目的:研究肿瘤低密度脂蛋白受体相关蛋白(Lipoprotein receptor-related protein in tumor LRP1B)在急性白血病中的表达情况.方法:病例组采集36例临床初诊为急性白血病患者的骨髓,淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,常规方法提取细胞总RNA后逆转录为cDNA,LRP1B特异性引物PCR扩增cDNA第一链,并将扩增产物纯化后测序.采集10例感染性骨髓标本作为正常对照组.结果:LRP1B基因在急性白血病中有表达,36例样本中16例有PCR扩增产物,产物经纯化测序后未发现有外显子的缺失及重复等改变.在10例正常对照中8例有扩增产物.病例组与对照组比较LRP1B基因表达率及相对表达水平明显降低(p值<0.05).结论:LRP1B作为一个候选的肿瘤抑制基因,在多种肿瘤中发挥重要作用,但是在白血病中的表达情况尚无报道.本实验证实了该基因在血液系统中有表达,但是在白血病中未发现该基因常见的外显子缺失及重复等情况发生.但证实在白血病中该基因表达水平较正常对照组明显减低,提示该基因与急性白血病的发病相关.为深入研究该基因在白血病中所发挥的作用奠定了基础.从而为肿瘤的基因诊断及治疗提供了部分实验室依据.     

兔主动脉平滑肌细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的诱导表达调节

在兔主动脉平滑肌细胞 ( SMC)培养基中分别加入正常低密度脂蛋白 ( N- LDL)、氧化低密度脂蛋白 ( ox- LDL)、正常极低密度脂蛋白 ( N- VLDL)、氧化极低密度脂蛋白 ( ox- VLDL)和 β-极低密度脂蛋白 (β- VLDL )培养 2 4 h后 ,用定量 RT- PCR和配体结合实验检测平滑肌细胞 LRP的m RNA和蛋白质水平的表达 .结果表明 :五种脂蛋白均能在转录和翻译水平诱导兔主动脉平滑肌细胞的 LRP表达 ,尤以富含胆固醇的 N- LDL ,ox- LDL和β- VLDL的刺激作用更明显 .用胆固醇单独或与脂蛋白共同温育 SMC后 ,发现胆固醇本身可促进 SMC的 LRP蛋白水平的表达 ,脂蛋白与胆固醇的共同刺激作用更为显著 .结果提示 :上述五种脂蛋白对 SMC上 LRP的表达有上调作用 ,其机制可能主要是通过其中的胆固醇来实现的 .     

低密度脂蛋白受体生物化学

低密度脂蛋白受体广泛存在于机体内许多组织和细胞,在脂蛋白代谢中起了十分重要的作用。它是一种酸性糖蛋白,由839种氨基酸组成。根据它的结构特点及其与功能的关系,大致可以区分为5个不同的结构功能区。其中,较为重要的是发现第一、二功能区分别与受体结合特异性有关和与鼠EGF前体同源。     

低密度脂蛋白受体相关蛋白基因C766T多态性与阿尔茨海默氏病发病风险的Meta-分析

运用Meta分析的方法综合评价低密度脂蛋白受体相关蛋白基因(lowdensitylipoproteinreceptor-relatedprotein1gene,LPR-1)第三外显子C766T多态性与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)发病风险的关系。通过检索Medline、Cochrane图书馆和中国生物医学文献数据库(CBM),纳入内容涉及LPR-1基因C766T多态性的基因型频率和(或)等位基因频率的独立病例对照研究。各文献满足研究方法相似,有综合的统计指标。研究年限为1997~2004年,语种不限。应用RevMan4.2软件进行统计分析。在AD组3764例和对照组3647例研究对象中,分别对基因型和等位基因频率做合并统计。各研究之间有显著的异质性,P<0.01,故采用随机效应模型分析合并结果。总体效应检验未发现CC基因型频率在病例对照之间统计学上的差异(Z=1.74,P=0.08,OR=1.17,95%CI:0.98~1.39),C等位基因频率在病例对照之间也未发现差异(Z=1.31,P=0.19,OR=1.11,95%CI:0.95~1.31)。Meta分析结果提示,LPR-1基因C766T多态性不是AD的主要风险因子,但尚不能完全排除其可能在AD发病中具有微弱的作用。     

纤溶酶原激活物抑制因子—1蛋白分子的结构与功能

纤溶酶原激活物抑制因子－１（ＰＡＩ－１）是组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和尿型纤溶酶原激活物（ｕ－ＰＡ）的特异性抑制剂。对ＰＡＩ－１分子的结构与功能的认识,有助于了解ＰＡＩ－１作用的机理。本综述了近年来对ＰＡＩ－１蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了ＰＡＩ－１分子中一些区域的作用以及影响ＰＡＩ－１抑制活性的一些因子。     

卵巢纤蛋白溶酶原激活因子及其抑制因子的研究

本文综述了近年来作者在研究卵巢纤蛋白溶酶原激活因子(PA)及其抑制因子(PAI)的某些成果。PA是一种高效能蛋白水解酶激活因子,它激活纤蛋白溶酶原成为纤蛋白溶酶,此酶在纤蛋白水解过程中起重要作用。已有证据表明,PA与排卵有关。我们进一步研究发现:(1)在大鼠卵巢体细胞中存在两种PA,即组织型PA(tPA)和尿激酶型PA(uPA);而在卵细胞中只发现tPA;(2)大鼠卵巢tPA明显受促性腺激素和其他激素调节,并在排卵前达到高峰,而uPA没有明显变化;(3)在卵巢体细胞中还发现一种PA的抑制因子(PAI),它与PA结合形成复合体,能部分或完全消除PA活性;(4)只有tPA与大鼠排卵有关;PA和PAI间的相互作用和随激素的波动而引起的动态变化可能对维持卵巢正常生理功能和排卵起重要作用。     

纤溶酶原在金黄色葡萄球菌感染中的作用

金黄色葡萄球菌菌体表面有多种纤溶酶原受体,包括次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶、核糖核苷酸还原酶、α-烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶等,它们均可以与纤溶酶原结合。与细菌结合的纤溶酶原可被宿主的纤溶酶原激活剂(组织型纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激活剂)或葡萄菌属的纤溶酶原激活剂(葡激酶)激活为纤溶酶。细菌表面的纤溶酶有利于其降解宿主胞外基质,穿越组织屏障,因此哺乳动物的纤溶酶原可能在金黄色葡萄球菌感染宿主过程中起重要作用。     

五带虻溶纤活性蛋白的纯化和性质

五带虻Tabanus qutnquectnctus Rlcardo腹部匀浆液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-75凝胶层析、Fibrin-Sepharose 4B亲和层析和电泳制备等方法纯化后,获得在SDS—PAGE图谱上呈现单一区带的溶纤活性蛋白。该蛋白质既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用,其分子量为40kD,等电点为4.5,最适作用pH为9.0,最适作用温度为28℃,37℃处理2h活性完全丧失,Ca²⁺、Mn²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Hg²⁺和PMSF能抑制其活性。     

人子宫内膜纤蛋白溶酶元激活因子及其抑制因子...

Two types of plasminogen activator (PAs) are present in human endometrium, and their contents vary with the different phases of menstrual cycle, i.e. high in the proliferative phase and low in the secretory phase. In the present study by immunohistochemical technique, both uPA and tPA antigens were demonstrated in the stromal and glandular cells of the endometrium. In cell culture, tPA was released only from stromal cells and uPA only from glandular cells as determined by SDS-PAGE followed by fibrin overlay technique, but PA inhibitor type-1 (PAI-1) was secreted by both stromal and glandular cells. Furthermore, secretion of PAs from endometrial cells was enhanced by adding estradiol and markedly inhibited by progesterone in a dose dependent manner, while the PAI reacted just in the opposite way. The effect of the peptide hormones, hCG, GnRH, PRL, as well as cAMP in cell culture on the secretion of PAs and PAI was similar to that of estradiol, while forskolin demonstrated definitely more stimulative effect on tPA than uPA. Taking into account of the finding of the present study, it appears that, under hormonal control, a balance between PAs and PAI in the endometrium exists. The physiological roles of the PAs and PAI in the endometrium were discussed.     

地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖(Eupolyphagesinensiswalker)体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带,含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制,但EDTA对其影响不大,提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定,最适温度40℃,最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。     

尿激酶型纤溶酶原激活物受体研究进展

尿激酶型纤溶酶原激活物受体作为胞外纤溶酶系统的一员,以糖基磷脂酰肌醇锚的形式固定于细胞膜上,它参与了胞外纤溶酶活性的调节,具有内化受抑制的尿激酶的功能;同时参与了胞外信号的传递;另外它对癌症的临床预后及抗癌转移的研究有重要的意义．     

降钙素基因相关肽受体组分蛋白

降钙素基因相关肽受体组分蛋白(calcitonin gene-related peptide-receptor component protein,CGRP-RCP)是降钙素基因相关肽受体的一个具有146/148个氨基酸的胞内膜周边蛋白,特异地与降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)相互作用并促进CGRP和肾上腺髓质素的信号跨膜转导,现认为CGRP-RCP也是G蛋白偶联受体中一个动态的调节器。CGRP-RCP的mRNA在人和鼠的几乎所有组织均可检测到,在小鼠睾丸中分布尤其明显。在哺乳动物中,CGRP-RCP与C17(酵母菌中聚合酶III的必需亚基)是直系同源蛋白,人体的CGRP-RCP能取代酵母中的C17,发挥与C17相同的生物学作用。     

血管内皮细胞的抗凝和纤溶系统及与肿瘤转移的关系

血管内皮细胞呈扁平状态覆盖于整个血管内壁,由其组成的内皮是介于血液、淋巴液与组织之间的屏障,与血液有相容性,有隔开血液和组织的作用,其主要特点有;(1)抗凝性;(2)纤溶性;(3)选择性通透性;(4)血管紧张调节;(5)能分泌多种因子,等等,在维持血液循环正常功能过程中有着重要作用。本文着重讨论内皮细胞的抗凝系统和纤溶系统及其与肿瘤转移的关系。     

人子宫内膜纤蛋白溶酶元激活因子及其抑制因子的分布与调控

人子宫内膜中存在组织型(tPA)及尿激酶型(uPA)两类纤蛋白溶酶元激活因子,其含量在增殖期高于分泌期。本文应用免疫组织化学定位证实uPA及tPA两类抗原存在于子宫内膜的腺体细胞和间质细胞中。应用SDS-PAGE分高蛋白质,继而应用纤蛋白-琼脂糖铺盖技术测得离体培养下间质细胞仅释放tPA,腺体细胞仅释放uPA,但两种细胞均分泌PA的抑制因子(PAI)。培液中加入孕酮,明显抑制PA和刺激PAI生成。雌二醇作用与孕酮相反。某些肽类激素hCG、PRL、GnRH及cAMP作用基本与雌二醇相同。但福司克林(FK)则刺激间质、腺体两种细胞产生tPA及少量uPA,抑制PAI生成。本工作表明人子宫内膜中存在PA及PAI作用相反的酶,受激素调控,其生理意义尚待进一步探讨。     

重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定

构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中高效表达．利用ＰＣＲ扩增截断型可溶性ｕ－ＰＡＲｃＤＮＡ片段,并分别连入酵母及原核表达载体中,构建成表达质粒．后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔,获得抗ｕ－ＰＡＲ的抗血清,用于对酵母表达产物的鉴定．前者在甲醇的诱导下表达,产物分泌至培养液中．结果表明,原核表达的ｕ－ＰＡＲ蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清,利用此抗血清所作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实酵母表达蛋白具有ｕ－ＰＡＲ的免疫原性,表观分子量４０ｋＤ左右．Ｍｕｔ－表型在第５ｄ为最高（２．５μｇ／ｍｌ）,Ｍｕｔ＋表型在第４ｄ为最高（７．５μｇ／ｍｌ）．因此,构建的可溶性ｕ－ＰＡＲ表达质粒在Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母细胞获得表达,为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础．     

地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达

依据已报道的地鳖虫成熟肽cDNA序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675 bp地鳖虫纤溶活性蛋白 (fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列.将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2 kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符.重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性.     

尿激酶受体的结构与功能研究进展

尿激酶受体（ｕＰＡＲ）是纤溶系统的重要成份,与ｕＰＡＲ作用后和体内多种生理病理过程关系密切。本综述ｕＰＡＲ的分子型式与结构特症,ｕＰＡＲ对细胞表面某些蛋白质水解的介导,激活生长因子,以及介导ｕＰＡＲ－ＰＡＩ复合物的内吞清除和信号转导等功能。由此进一步阐明体内纤溶系统的作用及其在肿瘤治疗中的临床意义。