反义bcl—2在胃癌细胞中的诱导表达及促凋亡作用

为了观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１的促凋亡作用及ＭＴ－１１启动子的启动诱导活性,用分子克隆方法构建载体,以电泳术,电镜术,流式细胞术,原位杂交,裸鼠肿瘤抑制试验及化学发光分析等方法观察,结果表明,可诱导载体ｐＭＴｂＮ具有良好的诱导启动转录活性,Ｂｃｌ－２蛋白的表达下降使胃癌细胞ＳＧＣ７９０１更易发生凋亡,致瘤性也发生改变。     

细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡,是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老,死亡形式,它在胚胎发育,肿瘤发生,免疫系统的克隆选择中起重要作用,ｂｃｌ－２是调控ＰＣＤ的基因,但不能抑帛有类型的ＰＣＤ,最近发现,ｂｃｌ－Ｘ基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑的ＰＤＣＣＤ的功能,ｂｃｌ－２通过抑制ＰＣＤ可导致细胞癌变,因而ｂｃｌ－２被看作第三类癌基因。     

细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡(PCD),是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老、死亡形式,它在胚胎发育、肿瘤发生、免疫系统的克隆选择中起重要作用.bcl-2是调控PCD的基因,但不能抑制所有类型的PCD.最近发现,bcl-X基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑制PCD的功能.bcl-2通过抑制PCD可导致细胞癌变,因而bcl-2被看作第三类癌基因.     

bcl—2基因的转录调控

许多不同的外界刺激,包括生长因子和细胞因子等都能诱导ｂｃｌ－２基因的表达,而且很显然,这种爱诱导表达的Ｂｃｌ－２对于细胞的存活是至关重要的。因此,为了对ｂｃｌ－２的转录调控研究有了初步的了解,将从转录水平和转录后水平两个层次上谈谈目前在该领域中的最新进展。     

bcl－2基因家族对细胞凋亡的调节

ｂｃｌ－２基因为一原癌基因,因其在淋巴瘤和白血病中出现重排而得名。近年研究表明,ｂｃｌ－２基因是细胞凋亡的重要抑制基因,它的过度表达是癌症和自身免疫病发生的重要原因。最近又发现了几个与ｂｃｌ－２基因有不同程度同源性的调节基因,也在细胞凋亡中发挥作用。     

急性白血病细胞中抗凋亡蛋白bcl－2及其mRNA的表达

采用免疫组织化学与原位杂交方法检测了２５例急性髓系或淋巴系白血病骨髓活检组织及６种白血病细胞株中ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ水平。结果２１例白血病标本中存在ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ的一致性高表达;５种白血病细胞株（ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２）均能表达一定水平的ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ（Ｍｏｌｔ－４例外）。提示ｂｃｌ－２基因的功能状态与淋巴造血系统肿瘤密切相关。     

Bcl—2家族与结直肠癌

bcl-2基因家族包括抑制细胞凋亡的基因和促进细胞凋亡的基因,其表达的蛋白在细胞凋亡：的调节中发挥重要作用。Bcl-2家族蛋白对肿瘤细胞凋亡的调节作用是当前肿瘤研究的热点之一。有关Bcl—2家族蛋白在结直肠癌方面的研究已不少。本文结合近年来国外的研究进展,对Bcl-2家族蛋白的主要结构、功能及其与结直肠癌的发生、发展、治疗、复发及预后的关系作一综述。     

Induction of apoptosis and change of bcl—2 expression in macrophage Ana—1 cells by all—trans retinoic acid

Macrophage cells play an important role in the initiation and regulation of the immune response.All-trans retinoic acid (ATRA) and its natural and synthetic analogs (retinoids)affect a large number of biological processes.Recently,retinoids have been shown promise in the therapy and prevention of various cancers.However,many interesting questions related to the activities of retinoids remain to be answered:(I) Molecular mechanisms by which retinoids exert their effects;（Ⅱ)why the clinical uses of retinoids give undesirable side effects of varying severity with a higher frequency of blood system symptoms;(Ⅲ)little is known for its impacts on macrophage cells etc.We set up this experiment,therefore,to examine the apoptosis of ATRA on macrophage Ana-1 cell line.Apoptosis of the cells was quantitated,after staining cells with propidium iodide(PI),by both accounting nuclear condensation and flow cytometry.When the cells were treated with ATRA at or higher than 1μM for more than 24h,significant amount of the apoptotic cells was observed.Induction of apoptosis of Ana-1 cells by ATRA was in time-and dose-dependent manners,exhibiting the similar pattern as the apoptosis induced by actinomycin D (ACTD).ATRA treatment of Ana-1 cells also caused the changes of the mRNA levels of apoptosis-associated gene bcl-2,as detected by Northern blot analysis.The temporal changes of bcl-2 expression by ATRA was also parallel to that by ACTD.In conclusion,ATRA can induce apoptosis in macrophage cells,which may be helpful in understanding of immunological functions retinoids.     

Bcl—2基因家族在调节细胞凋亡中的作用

Ｂｃｌ－２基因家族包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的蛋白质,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。本文结合近年来的研究进展,综述了Ｂｃｌ－２基因家族中两类蛋白质分子的结构特征、亚细胞分布、相互间的作用方式以及与它们发挥功能的关系,为认识细胞凋亡中复杂的分子调控机制,寻找凋亡紊乱相关疾病中可资利用的药物干预靶点提供了重要启示。     

B波段紫外线照射对ＮＨ３Ｔ３细胞bcl—2、n—myc、c—fos三种基因表达的影响

用免疫组织化学SPTM试剂盒标记,用Quantimet520型图像分析仪定量分析B波段紫外线照射对NIH3T3细胞bcl-2,n-myc,c-fos三种基因表达的影响,结果发现Bcl-2(bcl-2表达的蛋白质）定位于细胞质,N-myc,c-Fos(分别为n-myc,c-fos表达的蛋白质）在细胞核中高表达,在细胞质中低表达,三种基因蛋白在对照组（未受紫外线照射的正常NIH3T3细胞中）均有表达,NIH3T3细胞经B波段紫外线照射后,9小时前Bcl-2无显变化。9小时后急剧增高,超过最初值;N-myc于照射后1小时前无显变化。1小时后降低,9小时后显剧增高,并超过最初值;c-Fos于照射后即下降,0.5小时后回升,逐渐达到最初值。     

重组RA—538及反义c—myc腺病毒对人胃癌,食管癌和bcl—2高表达细胞系的作用

本课题研究ＲＡ５３８、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌（ＳＧＣ７９０１）、食管癌（Ｅ Ｃ１０９、ＥＣ８７１２）、正常人胚肺２ＢＳ（２ＢＳ）及ｂｃｌ－２高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ａｄ－ＲＡ５３８及Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ对ＳＧＣ７９０１细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２、ｃｙｃｌｉｎＤ１基因的表达及刺激ｂａｘ基因的表达。对ＥＣ１０９、ＥＣ８     

Bcl—2基因与细胞编程死亡

细胞编程死亡在生物体的发育形成及功能维持中起着重要作用。本着重介绍Ｂｃｌ－２基因及其产物对细胞编程死亡的抑制,探讨了Ｂｃｌ－２基因的作用机制,指出Ｂｃｌ－２基因的研究有重大的理论意义及应用前景。     

bcl-2与FAS在NO介导的肝细胞凋亡中的作用

目的　探讨bcl 2与FAS在NO介导的重型肝炎肝细胞凋亡中的作用。方法　雌性Balb/C小鼠 2 4只随机分为A、B、C、D 4组 ,每组 6只 ,分别为正常对照组、模型组、L Arg干预组 (NO供体干预 )、L NAME干预组 (NOS抑制剂干预 )。各组动物均于用药后 6h处死 ,留取血清、肝组织。用Griess法测定血清NO代谢产物NO-2 ,TUNEL原位检测肝细胞凋亡状况并计算凋亡指数 ,免疫组织化学法检测各组肝组织Fas表达及原位杂交技术检测各组肝组织bcl 2mRNA的表达。结果　 1.应用NO合成干预因素后 ,C组及D组NO-2 水平分别较B组升高及降低。 2 .正常肝组织经TUNEL检测未见凋亡细胞 ,其凋亡指数为 0。B组存在肝细胞凋亡现象 ,凋亡指数为 16 2 7% ,C组凋亡指数上升 (2 4 5 2 % ) ,而D组凋亡指数下降 (7 92 ) % ,组间比较有显著性差异 ,P值 <0 0 1。 3.正常肝细胞内未见Fas蛋白及bcl 2mRNA表达。B组Fas表达较广泛 ,C及D组Fas表达呈不同程度的增强和减弱 ;组间比较差异有显著性 ,P值 <0 0 1。B组及C组均未见bcl 2mRNA杂交信号 ,仅D组见肝细胞内出现杂交信号。结论　高水平的NO具有明显的促进肝细胞凋亡的作用。NO对于肝细胞的损伤可以通过介导凋亡的方式实现。NO在介导肝细胞凋亡的过程中 ,启动了FAS凋亡途径 ,而抑制NO的过量产生可     

bcl—2和IL—1和TNFα表达的调节作用初探

通过将反义ｂｃｌ－２基因转梁于Ｕ９３７细胞,建立了Ｂｃｌ－２蛋白表达受抑的Ｕ９３７细胞模型,证实了模型细胞的增殖和存活表型授课和线菌素Ｄ－结晶紫试验和ＥＬＩＳＡ检测表明模型细胞上清中ＴＮＦα的活性和含量无明显变化,小鼠胸腺细胞增殖试验表明模型细胞上清中ＩＬ－１活性升高,提示ｂｃｌ－２的表达对ＴＮＦα的表达无明显影响,但可能在一定程度上抑制了ＩＬ－１的表达或活性。     

枯否细胞在实验性肝癌细胞凋亡中的作用研究

探讨Kupffer细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。应用免疫组化方法和TUNEL法对单用二乙基亚硝胺（DENA）诱发的肝癌及用氯化钆（GC）或酶母多糖（ZM）分别阻塞或激活Kupffer细胞后,给以DENA所引起的大鼠肝癌中的增殖细胞核抗原（PCNA）、bax、bcl-2蛋白表达和肝癌细胞的凋亡进行了对比研究,结果显示：肝癌组织的增殖指数在ZM＋DENA组、DENA组、GC＋DENA组依次增高,而凋亡指数在上述各组依次降低。Bax阳性率在ZM＋DENA组明显高于DENA组（P＜0.05）,而ZM＋DENA组bcl-2阳性率明显低于DENA组（P＜0.05）。结果提示：Kupffer细胞可促进实验性肝部细胞凋亡。     

核酶对bcl－2mRNA的体外切割

通过微机对ｂｃｌ－２ＲＮＡ二级结构的分析,设计针对ｂｃｌ－２片段５＇ＣＧＣＧＡＣＣＣＧＧＵＣＧＣＣＡＧＧＡＣＣＵＣＧ３＇的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ,ＲＤ）基因,平端连接于ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）ＨｉｎｃⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,ｂｃｌ－２和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因经体外转录,５０℃作用２ｈ,从１６５６－１６５７（Ｃ－Ｇ）位之间切断ｂｃｌ－２ＲＮＡ片段．     

凋亡的分子机理

细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是细胞接受某种信号后或受到某些因素刺激后一种主动的,由一些凋亡相关基因相互作用的细胞消亡过程,影响凋亡的基因可分为两类,即促进凋亡的基因和抗凋亡的基因。本文简述了这些基因与凋亡的关系,重点论述了ｂｃｌ－２家族与凋亡的研究进展。