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PCR—单链构象多态性分析对p53基因点突变检测的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
周江 《国外医学:分子生物学分册》1996,18(1):11-15
单链构象多态性(SSCP)对分析基因的突变是一种有效的手段,并具有其独特的优点。PCR与SSCP结合后检测灵敏度更高,而在许多类型的肿瘤都存在有p53抑癌基因的突变,章综述了PCR-SSCP分析技术检测p53基因突变的进展。 相似文献
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人胃癌细胞系中P53抑癌基因变异的检测及其序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
P53抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应--单链构锡多态性分析(PCR-SSCP)方法,对四种人胃癌细胞系MGC803,BGC823,GC7901和PAMC-82中P53基因的第5、6、7、8四个外显子进行检测,结果发现,PAMC-82的第5第第8外显子,GC7901的第6外显子存在突变,PCR-直接测序证明,它们分别在174位、2 相似文献
3.
PCR—SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变 总被引:2,自引:0,他引:2
应用溴化乙锭(EB)染色的PCR-SSCP技术对10例非小细胞性肺癌组织标本p53基因外显子5 ̄8进行分析,其中1例在外显子5 ̄6;1例在外显子7;2例在外显子8发现异常电泳带。对1例经SSCP检测异常的p53基因进行核酸序列分析,发现第280位密码子ACA,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸。结果证实:非小细胞性肺癌与p53基因突变有关;EB法PCR-SSCP技术是一种简便、可靠的点突变检测法。 相似文献
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非同位素PCR-单链构象多态性技术的建立和应用 总被引:2,自引:0,他引:2
PCR-单链构象多态性技术问世以来,成为研究基因突变的工具,特别是在分子肿瘤学研究中,广泛应用于癌基因,抑癌基因突变的研究,常规PCR-SSCP采用同位素标记PCR产物,测序板电泳分离突变,在操作和费用上有种种局限,文章建立了一种非同位素PCR-SSCP技术;通过不对称PCR获得单链,普通PAGE分离,经银染检出突变,用这种方法,还研究了四株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2,HK1和SUNE1中肿瘤 相似文献
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球形幽门螺杆菌分子生物学研究 总被引:5,自引:1,他引:4
为研究幽门螺杆菌(HP)球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使3株HP发生球形变异,对弯曲形和球形HP作了SDS-PAGE、免疫印迹及4个毒力基因片段PCR和PCR-SSCP分析。SDS-PAGE图谱显示球形HP分子量在74×104以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形HP125×104蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形HP分子量为11×104和63×104的蛋白条带反应增强。PCR及PCR-SSCP结果表明球形HP的hpaA,VacA,CagA和UreA4个毒力基因片段未发生缺失,但在hpaA或VacA基因中存在点突变 相似文献
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非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用 总被引:1,自引:0,他引:1
单链构象多态性检测法(PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SSCP方法,该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示SSCP。用该方法对55例平滑肌肉瘤p53基因第7外显子突变的检测表明,38%的瘤组织DNA存在异常的SSCP。其中10例有HaeⅢ和MspI酶切位点的突变(18%),19例有突变型p53蛋白的过度表达(9例同时有异常SSCP改变)。而p53质粒DNA,平滑肌瘤及Alzheimer病患者基因组DNA无p53基因第7外显子扩增片段的异常SSCP改变。同时,还使用该方法对临床诊断的20例Alzheimer病患者和8例健康对照进行了β-淀粉样蛋白前体基因第16和17外显子的扩增及分析,均未发现有异常SSCP改变及EcoRI,BclI酶切位点的突变。本研究结果提示,该非同位素PCR-SSCP方法可靠、敏感、简便、快速,具有潜在的推广价值。 相似文献
7.
应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群 总被引:4,自引:0,他引:4
通过聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的16SrDNA基因。60例临床标本中,20例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型:18例为结核分枝杆菌,2例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。20例阴性标本中,PCR-SSCP又检查出5例阳性。20例对照标本中,3种传统方法与PCR-SSCP法均检测为阴性。全部试验3d报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的PCR-SSCP电泳图谱均有差异。所以,应用PCR-SSCP技术快速 相似文献
8.
人胃癌细胞系中p53抑癌基因变异的检测及其序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
p53抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种肿瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应─—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,对四种人胃癌细胞系MGC803,BGC823,GC7901和PAMC-82中p53基因的第5、6、7、8四个外显子进行检测,结果发现,PAMC-82的第5和第8外显子,GC7901的第6外显子存在突变。PCR-直接测序证明,它们分别在174位、280位、204位密码子发生缺失G,GC→CG,AT→CG转变,因而可使其编码的p53蛋白分别发生移码突变,Arg→Thr,Glu→Ala,而丧失肿瘤抑制功能。实验结果表明,p53基因在胃癌发生发展过程中,尤其是较晚阶段具有重要作用。 相似文献
9.
用毛细管电泳技术检测DNA点突变 总被引:1,自引:0,他引:1
毛细管电泳(CE)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(LIF),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用CE技术可以在20min内分析完成几千个碱基的DNA片段。CE可以应用于DNA点突变的检测,目前在PCR基础上利用CE技术对DNA已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1 扩增抗拒突变系统PCR(ARMSPCR)和短串联重复PCR(STRPCR) ARMSPCR和S… 相似文献
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应用PCR-SSCP技术并结合Southern印迹杂交从基因水平对正常和^3H-TdR恶生转化小鼠胚胎成纤维细胞NC3H10和TC3H10中neu基因进行研究,Southern印迹杂交结果表明恶性转化的TC3H10细胞的neu基因出现重排和扩增,SSCP分析未发现TC3H10细胞neu基因跨膜区突变,上述结果说明TC3H10细胞neu基因结构异常可能在跨膜区外,neu基因异常在^3H-TdR诱导的 相似文献
11.
人肝癌细胞株QGY—7703的p53基因及其表达研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文利用等位基因分析,PCR-SSCP,RT-CPR/序列分析,Northern印迹,免疫组织化学,Western印迹,免疫沉淀等方法对人肝癌细胞株QGY-7703的P53基因背景进行了研究,发现17号染色体短臂可能存在等位基因缺失,在P53基因的编码序列上没有发现任何突变,但发现其mRNA和蛋白表达水平很低,表明在QGY-7703细胞中P53基因的低水平表达可能同细胞的恶性程度有关。 相似文献
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近几年,有关幽门螺杆菌(HP)基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括:质粒分型、限制性内切酶分型(REA)、核糖分型、染色体DNA脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化(PCR-RFLP)分型、任意引物PCR(AP-PCR)分型、PCR单链构型多态性(PCR-SSCP)分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于HP的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机 相似文献
13.
应用PCR—SSCP快速鉴定结构分枝杆菌复合群 总被引:12,自引:0,他引:12
通过聚合酶链反应(PCR)-单链的权象多态性(SSCP)技术分析结构分枝杆菌和非结构分枝杆菌临床株的16S rDNA基因。60例临床标本中,20例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型:18例为结核支杆菌,2例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。20例阴性标本中,PCR-SSCP又检查出5例阳性。20例对照标本中,3种传统方法与PCR-SSCP法均检测为阴性。全部试验3d执行结果。结核分枝杆菌 相似文献
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缺氧诱导因子1和红细胞生成素3‘—增强子调节内皮细胞?… 总被引:22,自引:0,他引:22
目的和方法:将红细胞生成素(EPO)3'-增强子野生片断及点突变片断借脂质体主人脐静脉内皮细胞株ECV-304,用半定量RT-PCR测定正常秘缺氧诱导因子-1(HIF-1)诱导剂氧化钴(CoCl2)作用下培养6h的细胞环氧合酶2(COX-2)和血栓素合酶(TXS)的mRNA。结果:HIF-1诱导剂CoCl2可放COX-2和TXS基因转明显增强2,向细胞导入野生EPO3'增强子片断可阻断CoCl2诱 相似文献
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应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI的酶切位点,经双酿切法把该DNA片段重组到pUC118质粒中。对插入片段的DNA序列测定和分析结果证实该片段为H-1NS-1基因序列。以此重组质粒为探针,采用分子杂交的方法,分别测定了H-1及MVMDNA在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备H-1的质量监测、H-1及MVMNS-1蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。 相似文献
16.
双抗(抗病毒及抗虫)植物表达载体的构建及番茄的化鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
将抗病毒的CMV-cp基因和抗虫的Bt-toxin基因依次插入到植物表达载体PE3的HindⅢ和KpnⅠ位点,通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定,然后以土壤农杆菌GV311-SE介导转化番茄,胭脂碱检测,染色体DNA的点杂交及PCR扩增证明CMV-cp基因和Bt-toxin基因已同时导入转化再生的番茄植株。RNA点杂交证明CMV-cp基因和Bt-toxin基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。 相似文献
17.
中国人雄激素受体N端转示激活区的测序及突变检测 总被引:1,自引:0,他引:1
雄激素受体(androgen receptor,AR)N端转录激活功能区(AF1)是AR发挥转录激活所必需的。用4对引物(A3-A4)PCR扩增20例中国正常男性AR的AF1,双链DNA循环测序以确定正常中国人AR的AF1的核苷酸顺序。在此基础上,用PCR-SSCP分析和双链DNA循环测序法对2例雄激素抵抗征(AIS)患者外周血白细胞和15例前列腺癌(PC)患者癌组织中AR的AF1区进行突变检测。 相似文献
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我们以前的实验显示自发性高血压大鼠离体主动脉磷酸肌醇蓄积在无激动剂在的基础状态下就显著增高。根据G蛋白偶联受体固有活性假说,推测SHR主动脉中介导肌醇磷脂解的主要受体-α1D和α1B肾上腺素受体的第三细胞内环可能存在点突变。本实验通过PCR-SSCP鉴定,表明上述突变并不存在。 相似文献
19.
在详细分析TNF α结构及有关TNF α结构与功能关系研究的基础上,设计并人工合成了一对TNF α结构基因点突变引物。应用PCR和分子克隆技术构建了一种新型人肿瘤坏死因子(TNF α)分子的编码基因,将该编码基因插入表达质粒,转化大肠杆菌,通过温度诱导获得了表达蛋白,对突变体克隆进行了DNA电泳、酶切位点检测以及基因序列测定,并对突变体蛋白进行了SDS PAGE电泳检测。 相似文献
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蛇毒锯鳞蝰素基因Leu14—Lys15—Glu16的定点突变 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究的目是的利用蛋白质工程定点突变的方法,在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列RGD(14位精氨酸残基,15位甘氨酸残基,16位天氨酸残基),以其增加该分子的生物活性,并探讨蛋白质一级结构,空间结构和功能的关系,在质粒pJC64的基础上,利用PCR定点突变方法,对蛇毒锯鳞蝰素基因Leu14-Lys15-Glu16进行定点突变,使相应的PCR定点突变方法,对蛇毒锯鳞蝰素基因Leu14-Lys 相似文献