分泌白细胞介素—2T细胞杂交瘤株的建立

本研究利用T淋巴细胞杂交瘤技术建立了能持续稳定地分泌白细胞介素—2(IL—2)的小鼠T淋巴细胞杂交瘤株,首先用刀豆蛋白A(ConA)活化BALB/C小鼠的脾细胞,然后使其与小鼠胸腺瘤细胞BW5147融合,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法从261个杂交克隆中筛选出至少30个分泌IL—2的T细胞杂交瘤株,对选出的一个杂交瘤细胞株FB4作了进一步研究,该杂交瘤株的染色体平均44(42～47)条,经传代培养、冻存和复苏后仍能持续稳定地分泌IL—2,用含2％小牛血清的DMEM完全培养基大量培养FB4杂交瘤细胞,制得含IL—2的培养上清,再经沉淀和凝胶过滤等步骤制得了部分纯化的IL—2,用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)技术检出了IL—2成分,其表观分子量(MW)约28KDa。     

基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25 bp左右的sgRNA并进行合成,sgRNA退火后克隆入p X330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠(F0)与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞技术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10 bp和11 bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8 bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。     

IL-6和IL-2联合应用对LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响

淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)能广泛杀伤自身肿瘤、同种异体肿瘤。LAK细胞用于恶性肿瘤的过继免疫治疗是近年十分活跃的研究领域。IL—6是一种多功能细胞因子,在机体免疫系统、防御功能及造血调节中有重要作用。已有文献报道,IL—6可诱导IL—2受体表达,提高PHA刺激的细胞毒T细胞(CTL) 的杀瘤活性。本实验观察了IL—6和IL—2合用对人LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响。(1)在诱导LAK细胞克隆的含     

激素和活性多肽

852438用鼠胸腺细胞生产口L一2:小鼠细胞并在细胞及分子水平进行分析〔会,英万Ca-p lan,B.了J.Cell.Bioehem.一1984,Suppl.(sA)一107〔译自DBA,1954,3(15),84一07063〕 对小鼠胸腺细胞生产T淋巴细胞生长因子—间白细胞素一2(IL一2)的能力进行了研究。将Phorbol酉旨以及TPA的共同刺激作为以分裂素诱发胸腺细胞生长IL一2的一项重要参数。在TPA的存在下,胸腺细胞生产IL一2是相对不依赖吸附辅助细胞的。令人惊奇的是胸腺细胞IL一2的生产并不局限于小的分裂后细胞群,事实上亦富含于大的增殖淋巴细胞群中。鼠胸腺细胞生产IL一2的情形…     

双歧异黄酮奶粉对化疗荷瘤小鼠减毒增效作用的研究

目的：研究双歧异黄酮奶粉对化疗后荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：以S180荷瘤C57BL／6小鼠为模型,系统地研究双歧异黄酮奶粉对瘤重和细胞功能的影响。结果：双歧异黄酮奶粉对荷瘤鼠化疗所引起的免疫功能低下具有明显的恢复作用,可显著提高化疗荷瘤鼠T细胞转化能力,明显促进化疗荷瘤鼠白介素—2(IL—2)分泌水平。结论;双歧异黄酮奶粉能够拮抗肿瘤抗原和化疗所引起的免疫抑制。     

白细胞介素2的抗肿瘤活性

<正>大量实验证明白细胞介素2(IL—2)在免疫活性细胞微环境精密调节中占有重要地位。在细胞毒T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)等淋巴细胞的成熟和分化中,IL—2是不可或缺的。在研究IL—2的过程中又发现了只有在IL—2作用下才能活化的淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)和淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。这些淋巴细胞在宿主体内抗细胞突变的免疫监视作用中可谓独占鳌头。故此,关于IL—2的抗肿瘤活性及其在癌症免疫治疗中的实用价值的研究就提到了重要议程上来了。     

白细胞介素—2受体的研究进展

自Morgan等人于1976年发现了白细胞介素—2(Inter leukin—2 IL—2)以来,人们逐渐认识到IL—2是通过与其在T细胞表面上的受体结合后才产生生物学活性的.因而,揭开IL—2受体(IL—2receptor,IL—2R)的奥秘,对于了解IL—2与IL—2R相互作用方式及IL—2引导的信号传递机制,进而了解机体免疫应答与调控的原理,从而达到对某些免疫系统疾病预防、诊断和治疗的目的,具有重要意义.因此,近十多年来,人们投入了大量精力来研究IL—2R.本文将在回顾历史的基础上,重点介绍IL—2R领域研究的最新成果,以使读者对IL—2R有一个比较全面,系统的认识.     

丙酸杆菌细胞壁骨架对小鼠乳腺癌的抑瘤作用

丙酸杆菌细胞壁骨架(Propionibacterium Cell Wall Skeleton, P-CWS)是从非致病性的丙酸杆菌中提取的乳浊状制剂。本文研究了P—CWS对小鼠乳腺癌的抑瘤作用及免疫机制。实验表明,体内给予P—CWS能活化小鼠脾脏非粘附细胞,在过继抗癌免疫试验中能抑制肿瘤的发生和发展。带瘤小鼠体内给予P—CWS能抑制肿瘤生长,改善带瘤小鼠脾脏NK、ADCC活性和腹腔巨噬细胞产生白细胞介素—1(IL—1)的能力。在体外P—CWS与脾细胞共同培养一定的时间,可提高其NK和ADCC活性;适量P—CWS与腹腔巨噬细胞共同培养48hr,能诱导巨噬细胞分泌IL—1。结果提示P—CWS具有抑瘤作用,其抑瘤效应与NK、ADCC活性增强以及腹腔巨噬细胞活化有关。P—CWS是一种有潜力的生物学反应修饰剂。     

双歧杆菌总DNA对小鼠IL-2、NK活性影响的研究

目的　从双歧杆菌、大肠杆菌提取 DNA,用 DNA免疫小鼠 ,观察免疫功能的变化 ,探讨双歧杆菌 DNA对小鼠免疫功能的影响 ,并作对比研究。方法　肌肉注射提取的双歧杆菌 DNA、大肠杆菌 DNA,颈椎处死后 ,检测脾细胞的免疫功能 ,同时提取 IEL细胞与 DNA共孵育 ,检测它对 IEL细胞的激活情况及细胞因子产生情况 ,以自然杀伤细胞 (NK)活性 ,白细胞介素 2 (IL - 2 )产生能力为指标 ,测定小鼠上述各项指标变化。结果　双歧杆菌 DNA、大肠杆菌 DNA肌肉注射后 ,小鼠以上两项指标与相应对照组相比较均明显提高 (P<0 .0 5 )。双歧杆菌 DNA提高小鼠 NK活性与 IL - 2水平程度大于大肠杆菌 DNA的作用(P<0 .0 1)。结论　双歧杆菌 DNA可快速激活 NK活性 ,提高体内 IL - 2水平。其效能优于大肠杆菌DNA。     

婴儿双歧杆菌对花生过敏小鼠模型肠道Th2反应的调节

目的研究婴儿型双歧杆菌对花生过敏小鼠肠道Th2型反应的调节作用。方法通过应用花生蛋白诱导肠道的Th2型反应,建立食物过敏小鼠模型。过敏小鼠灌胃给予婴儿型双歧杆菌（ATCC菌或CGMCC0313-2）或不做处理。然后分离小鼠小肠黏膜CD4＋T细胞或DC,另取肠黏膜组织进行石蜡包埋甲苯胺蓝染色肥大细胞计数,HE染色进行嗜酸细胞和单个核细胞计数,流式细胞检测CD4＋T中Th2（CD4＋IL4＋T）细胞和Treg（CD4＋CD25＋Foxp3＋T）比例,另取CD4＋T进行CFSE标记,与DC共培养4d后流式细胞检测CD4＋T增殖反应,收集细胞培养液ELISA检测IL-4、IL-5和IL—13分泌水平。结果过敏组小鼠Th2型细胞数,CD4＋T细胞增殖反应,IL4、IL-5和IL-13水平,肠黏膜中肥大细胞、嗜酸性细胞和单个核细胞数均明显高于对照组（P〈0．01）,而Treg数目低于对照组（P〈0．01）,婴儿双歧杆菌干预后,婴儿双歧杆菌组Th2型细胞数,IL4、IL-5和IL-13水平,肠黏膜中肥大细胞、嗜酸性细胞和单个核细胞数均明显低于过敏组（P〈0．01）,而Treg数目高于过敏组（P〈0．01）。结论口服婴儿型双歧杆菌可以抑制花生过敏导致的肠道Th2型反应。     

IL34转基因小鼠的建立和表型分析

目的建立白介素34转基因小鼠,研究该基因在小鼠中表达对小鼠免疫系统的作用。方法把人的IL34基因插入CMV启动子下,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立IL34转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定IL34转基因小鼠的基因表型,Western blotting检测IL34蛋白的表达水平,组织化学染色观察IL34转基因小鼠重要器官的病理改变。结果建立了2个品系的IL34转基因小鼠。转入的人IL34基因在脾脏中的表达水平高于内源性IL34。组织学分析显示IL34转基因小鼠各重要器官如脑,心,肝,肾,肠等的形态结构均正常,但脾脏的生发中心比较活跃,白髓的范围比野生型小鼠大。结论成功建立了IL34转基因小鼠,IL34基因的过度表达对免疫系统作用需要进一步探讨。     

萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响

目的 :探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响。方法 :实验小鼠随机分成实验组 (低剂量组 4 g/kg/d :高剂量组 :8g/kg/d)和对照组 (与实验组用同体积的生理盐水 ) ,连续用药 1 0天。用3H—TdR掺入法进行检测。结果 :与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌有明显促进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖 ,并有一定的量效关系。结论 :萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的促进作用 ,这可能与其促进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关。     

重组腺病毒介导IL-2、TNF-α抗肿瘤实验研究

目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论　腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF a重组腺病毒具有抗肿瘤作用     

IL-12诱导后白血病细胞的免疫激活效应

为探讨IL -1 2在肿瘤免疫治疗过程中的作用 ,以小鼠FBL -3红白血病细胞为实验模型 ,采用流式细胞仪和电镜等 ,观察了IL -1 2对FBL- 3细胞的诱导分化作用 .FBL -3细胞经 2 0 0U/mLIL- 1 2作用 48h后 ,S期DNA合成水平显著下降 ,单核细胞的特异性标志CD1 4表达水平明显增加 ,NBT⁺细胞率升高 ;IL -1 2作用 72h后 ,树突状细胞的特异性标志 33D1和NLDC1 45表达水平显著增加 ,MHC Ⅱ ,B7- 1 ,B7 -2和VCAM 1表达水平增加 .观察IL -1 2处理后FBL -3细胞的超微结构变化 ,可见两类细胞 :一是表面有许多皱褶 ,胞浆中有丰富的溶酶体 ;另一种细胞表面呈绒毛状 ,有许多树突状突起 ,线粒体发达 ,细胞核呈分叶状 .IL -1 2处理后的FBL -3细胞 ,能够明显刺激静息的T淋巴细胞增殖 .表明 ,IL -1 2可诱导小鼠红白血病细胞向单核细胞及树突状细胞方向分化 ,具有了抗原提呈功能 ,为应用IL -1 2治疗白血病提供了新的机制     

四种单克隆抗体对人类白细胞介素2受体的不同反应性

<正>两种新的鼠单克隆IgG_1抗体—H—31和H—A26与以前获得的两种抗人类白细胞介素2受体(IL—2R)的单克隆抗体—anti—Tac和HIEI在性质上进行比较。用人类各种造血细胞进行免疫荧光实验,H—31和H—A26抗体均仅同IL—2R阳性细胞起反应,也即H—31和H—A26沉淀IL—2受体分子—一种分子重量为60k和53k道尔顿的糖蛋白,它来自人类T细胞白血病I型病毒(HTLV—I)携带细胞即MT—2细胞。同时,H—31和H—A26还能和     

IL-1β对体外培养NIT-1β细胞胰岛素分泌的影响

利用小鼠胰岛β细胞系NIT 1细胞,对不同时间、不同浓度IL 1β作用下细胞的生长和胰岛素的分泌进行观察,以研究IL 1β对胰岛β细胞胰岛素分泌的影响,探讨细胞因子对胰岛β细胞功能的抑制作用.结果显示在IL 1β作用下,各组NIT 1细胞分泌胰岛素呈不同程度降低,表明IL 1β对NIT 1β细胞系胰岛素的分泌具有显著抑制作用.     

人脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠免疫重建及其抗HBV作用的初步探讨

目的：探讨NOD／SCID（nonobese diabetic／severe combined immunodeficient）小鼠移植人脐带血（human umbilical cord blood,HUCB）CD34＋细胞后免疫重建的特性。建立hu—NOD／SCID人鼠嵌合模型并观察其人源化免疫细胞在小鼠体内的生长分化特性、存活时间及其对HBV感染的清除作用。方法：1．NOD／SCID小鼠于C0603．5Gy照射后24h内尾静脉输注HUCBCD34＋细胞;2．以流式细胞技术鉴定小鼠外周血中CD45＋,CD3＋,CD19＋,CD56＋等人源化细胞的比例;3．NOD／SCID小鼠于移植后第4wk注射HBV感染者血清并以未移植的NOD／SCID小鼠作为对照,注射同等量的患者血清;4．于感染后1、7、10、15天采血,免疫荧光定量PCR方法分别检测其HBV—DNA含量。结果：1．HUCBCD34＋细胞移植后第2wk,在小鼠外周血中检测出的CD3＋CD8＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞、CD19＋B细胞、CD56＋NK细胞的比例分别为18．6％、16．1％、13．1％和27．8％。各细胞比例随小鼠周龄而变化。所有移植小鼠存活时间均达9wk;2．移植后小鼠感染HBV血清后,病毒仅在感染后第一天检出,随后消失;未移植CD34＋细胞的小鼠外周血HBV—DNA一直维持在103水平：结论：1．NOD／SCID小鼠经射线照射后移植HUCBCD34＋细胞,在不加任何刺激因子的情况下小鼠可以长时间存活并重建免疫;2．hu—NOD／SCID人鼠嵌合模型小鼠免疫成功重建后,对HBV感染有快速的清除作用。     

驱虫斑鸠菊对小鼠免疫分子的影响

探讨驱虫斑鸠菊对小鼠免疫功能的影响,揭示其免疫作用机理。利用[^3H]-TdR参入法测定驱虫斑鸠菊对小鼠体内免疫功能的影响,运用酶联免疫吸附实验测定驱虫斑鸠菊对小鼠B淋巴细胞分泌抗体功能的影响;采用流式细胞测定方法测定CD19B细胞亚类表达水平;采用[^3H]-TdR参入法利用CTLL－2细胞株测定T淋巴细胞分泌IL－2活性。结果驱虫斑鸠菊的低、中、高三个剂量对体内T、B淋巴细胞的增殖活性、血清总抗体和抗原特异性抗体含量、CD19B细胞亚类表达均有明显的抑制作用,对T淋巴细胞分泌IL－2活性也具有明显抑制作用。说明驱虫斑鸠菊对机体体液免疫和细胞免疫功能都具有明显抑制作用。     

口服短小双歧杆菌活菌制剂对机体免疫功能的增强效应

探讨短小双歧杆菌（Bifidobacteriumbreve）对正常机体免疫功能的影响及对免疫低功机体的免疫功能调整作用。以环磷酰胺制备免疫低功模型,检测活菌制剂应用后,小鼠巨噬细胞吞噬功能,自然杀伤（NK）细胞杀伤活性,特异性抗体产生能力及IL—2诱生活性等指标的变化。结果表明短小双歧杆菌活菌制剂口服后可显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能,NK细胞杀伤活性,特异性抗体产生能力3项指标,IL—2诱生活性与对照组相比有一定提高,但差异无显著性。结果提示短小双歧杆菌对提高正常机体的免疫功能,对免疫低功机体有明显的调整作用。     

双歧杆菌多元蛋白酸奶的免疫调节和抑瘤作用的研究

目的 :通过观察双歧杆菌多元蛋白酸奶对S1 80 荷瘤小鼠瘤组织、脾细胞代谢水平及吞噬功能的影响以及志愿者体内IL 6、TNF α、IFN γ生成的影响 ,探讨含青春双歧杆菌酸奶的免疫调节和抑瘤作用机制。方法 :采用含青春双歧杆菌酸奶灌胃S1 80 荷瘤小鼠 1ml/(天·只 ) ,连续 1 0d ,测量肿瘤大小 ,脾重、脾指数 ,计算抑瘤率 ,取脾细胞中性红法测脾细胞吞噬功能 ,MTT法测脾细胞增殖能力。自愿者口服酸奶 30 0ml(d·人 ) ,连续 1 5d ,用酶标试剂盒测量IL 6、TNF α、IFN γ三种细胞因子水平。结果 :含青春双歧杆菌酸奶对小鼠S1 80 肉瘤有明显的抑制作用 ;对志愿者IL 6、TNF α、IFN γ的生成有明显的促进作用。结论 :含青春双歧杆菌酸奶有免疫调节和抑瘤作用