杜氏利什曼原虫体内ACP酶的研究

用酶组织细胞化学技术检测杜氏利什曼原虫(Leishmaniadonovani)犬分离株的无鞭毛体和前鞭毛体的酸性磷酸酶(Acidphosphatase),结果仅在无鞭毛体体内检测出该酶活性。     

棉铃虫中肠几种酶的组织化学研究

采用酶组织化学方法研究了棉铃虫中肠三磷酸腺苷酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的分布和活性。结果显示三种酶在棉铃虫中肠均有分布,但分布部位各不相同,其中,三磷酸腺苷酶在肠壁分泌细胞、肠壁细胞、环肌和纵肌均有分布,以肠壁分泌细胞活性较高;碱性磷酸酶主要分布于肠壁分泌细胞,在肠壁分泌细胞做绒毛处活性最高;酸性磷酸酶分布于肠壁细胞、环肌和纵肌,在肠壁细胞底膜处活性最高。这些酶可以作为棉铃虫中肠不同条件下的生理指标。     

砂鼠利什曼原虫(Leishmania gerbilli)的亚显微结构

砂鼠利什曼原虫(Leishmania gerbilli)存在于我国西北甘肃某地的砂土鼠或大砂鼠(Rhombomys opimus)体内,是中国特有的种类,王捷等60年代分离培养成功。对L.gerbilli的前鞭毛体的亚显微结构的观察表明:1.质膜下微管间距约为50nm,比别的利什曼原虫的宽;2.鞭毛基部极少观察到基板(basal plate);3.线粒体发达,从动基体所在部位伸向虫体各个部位,内有复杂的结构;4.在通常情况下,L.gerbilli的动基体呈棒状,但当细胞膨胀后则无论在光镜或电镜下动基体均呈扁环结构;5.虫体后部有发达的复片层结构。这一结构由一系列的膜卷绕成,其意义不明。     

杜氏利什曼原虫继代移种长爪沙鼠的实验观察

长爪沙鼠是近年来在实验室中应用颇广的一种啮齿动物,鉴于它可作为包括某些原虫在内的多种一寄生虫的实验宿主,我们自1 984年开始对算进行杜氏利什曼原虫的实验感染和继代移种,现已传至第13代。     

砂鼠利什曼原虫(Leishmania gerbilli)染色质与动基体碱性蛋白的初步研究

利用纯化的砂鼠利什曼原虫细胞核作为起始材料对其染色质碱性蛋白进行分析,发现这类生物中只存在四种核芯组蛋白(H_4,H_2A,H_2B和H_3)。 用凝胶电泳比较全细胞的与细胞核的碱性蛋白时,检出了一种来自细胞质的酸溶性蛋白(L组分)。细胞化学的检测表明它定位于动基体(Kinetoplast)。     

家兔实验性心肌缺血的定量酶组织化学研究

目的研究心肌缺血后琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)及线粒体腺苷三磷酸酶(mitoATPase)的情况,力求寻找一种更为理想的诊断早期心肌缺血的方法.方法结扎家兔左冠状动脉主干建立实验性心肌缺血的动物模型,常规组织学和透射电镜技术观察缺血心肌的组织学和超微结构改变,脱氢酶染色观察大体心肌的缺血情况,并分别采用硝基四氮唑蓝法、硝酸铅法和镁离子激活法研究结扎后0.5、1、2、4、8、12h左室前壁SDH、ACP以及mitoATPase水平的动态变化,显微图像分析系统测定其平均灰度值进行定量分析.结果①缺血后1h SDH活性开始降低,随着缺血时间的延长其表达水平不断下降,在1、2、4、8、12h平均灰度值分别为97.8488±8.13077、105.376±6.06887、112.584±5.18463、124.886±12.1167和144.605±13.9902(P<0.01) ②ACP活性在缺血后4h明显增强,随着缺血时间的延长其表达水平不断增强,缺血后4、8、12h平均灰度值分别为186.494±15.7005、173.158±12.6425和162.506±11.5195(P<0.01)③缺血2h后mitoATPase表达水平显著下降,其强度随着缺血时间的延长不断减低,缺血2、4、8、12h平均灰度值分别为164.153±15.6087、171.256±17.3428、183.518±18.0872和203.218±11.7952(P<0.01).结论 SDH和mitoATPase活性的不断下降及ACP活性的逐渐增强在缺血心肌细胞的演变过程中起着重要作用.     

三种利什曼原虫的组织化学观察

本文报道了杜氏、砂鼠及墨西哥利什曼原虫体内糖原、DNA,RNA。蛋白质结合的a-氨基、碱性蛋白质、酪氨酸、色氨酸及组氨酸的定位及含量。     

七种实验动物对沙鼠利什曼原虫感受性的研究

本文报道3株近交系小鼠、沙鼠和仓鼠对沙鼠利什曼原虫的感受性。结果表明,BALB/c株小鼠,长爪沙鼠和黑线仓鼠对沙鼠利什曼有较好的感受性。CFW株小鼠感染后不久即可自愈,而C57 BL株鼠则抗拒感染。除了黑线仓鼠的睾丸在感染原虫后偶可产生转移性皮肤损害外,其余实验动物的感染均仅局限在接种部位的皮肤,进一步表明沙鼠利什曼是一种亲皮肤性的原虫。     

不同种株利什曼原虫对Balb/c小鼠和金黄地鼠的致病性研究

为了比较不同种株利什曼原虫对实验动物的致病性,分别将5×107的杜氏利什曼原虫SC6株、热带利什曼原虫K27株、婴儿利什曼原虫LEM235株和婴儿利什曼原虫KXG-Liu株前鞭毛体与无鞭毛体感染Balb/c小鼠和金黄地鼠,观察各感染动物皮肤损害状况,3月后,有限稀释培养法分别检测肝和脾脏内的虫荷数.发现不同种株利什曼原虫引起的疾病存在极大的异质性,杜氏利什曼原虫四川SC6株致Balb/c小鼠轻微皮肤损害,肝和脾脏内重度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内重度虫荷数;热带利什曼原虫K27株致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,但肝和脾脏的虫荷数较低,金黄地鼠肝和脾脏中未查见原虫;婴儿利什曼原虫LEM235株致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,肝和脾脏内重度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内重度虫荷数;婴儿利什曼原虫KXG-Liu株可致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,肝和脾脏中度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内少量虫荷数.另外,还发现原虫的生活史状态和进入机体的途径及实验动物的类型对不同种株利什曼原虫感染致病产生影响.     

不同种株利什曼原虫前鞭毛体体外向无鞭毛体转化的研究

目的 观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化.方法 将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI 1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数不同形态的原虫.结果 当培养温度为26℃,而其他培养条件发生变化时,利什曼原虫的增殖速度发生变化,大多数原虫保持前鞭毛体典型性形态,运动活跃.当培养温度上升至37℃,不论其他培养条件如何变化,原虫均沉积于培养孔底,停止增殖,运动减缓,显著地向中间体和无鞭毛体转化,酸性pH值和5%CO2可促进前鞭毛体转化为无鞭毛体,新生小牛血清可延长无鞭毛体的成活.但相同的培养条件下,杜氏利什曼原虫转化效率低于其他种株利什曼原虫.结论 温度是影响利什曼原虫前鞭毛体转化为无鞭毛体的基本因素,酸性pH值与CO2可协同温度促进转化,不同种株利什曼原虫的遗传异质性可影响转化效率.     

蒜鳞片薄壁细胞衰退过程中酶的细胞化学定位及DNA生化分析

蒜在储藏过程中,鳞茎薄壁细胞衰退,其营养物质供给幼芽萌发生长。采用细胞化学方法,对蒜休眠进程中的鳞茎薄壁细胞进行了ATPase以及APase的细胞化学定位,结果显示在薄壁细胞的质膜、细胞壁和胞间连丝上的酶活性随着蒜自休眠至萌发的不同发育进程而呈现增强的趋势,且在萌芽期酶活性表现最为强烈,表明细胞内物质的降解、转化与输出的加强有助于细胞内含物向新生芽的彻底转移。配合采用琼脂糖凝胶电泳对衰退薄壁细胞的DNA进行了分析,实验结果表现出典型的DNA Ladder,为蒜鳞茎薄壁细胞的衰退属于受基因控制的程序性死亡范畴补充了生化证据。     

长角血蜱唾液腺中腺苷三磷酸双磷酸酶的纯化及其酶切机制

利用染料亲和层析(Cibacorn Blue柱)和离子交换层析(Macrosphere WCX柱)对长角血蜱Haemaphysalis longicornis唾液腺的腺苷三磷酸双磷酸酶进行纯化,经SDS-PAGE证实其分子量为66 kD。腺苷三磷酸双磷酸酶可以水解ATP和ADP,但对AMP无水解作用,水解ATP和ADP的K_m值均为0.2 μmol/L,V_max值分别为12.5和15.6 μmol/(min·mg)。腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的中间产物是ADP,最终产物是AMP和正磷酸。表明腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的位点是5'-核苷酸的γ-磷酸键,水解ADP的位点是5'-核苷酸的β-磷酸键。     

紫红链霉菌对钉螺酶组织化学的影响

为研究紫红链霉菌灭螺作用的机理,将钉螺分别浸泡于紫红链霉菌培养液(含菌4×106/ml)及去氯水、培养基中36h后,用酶组织化学方法显示各组钉螺肝脏、中枢神经节、头足部及鳃的Mg2 激活的三磷酸腺苷酶(Mg2 ATPase)、胆碱脂酶(ChE)、一氧化氮合酶(NOS)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)并观察其变化。结果显示:菌液浸泡组钉螺的Mg2 ATPase活性在肝脏、中枢神经节、头足部及鳃部均明显减弱或完全失活,LDH在中枢神经节、头足部也有一定程度减弱,ChE、NOS、SDH在肝脏、中枢神经节、头足部及鳃部与去氯水组无明显差异;培养基组与去氯水组钉螺相应部位的Mg2 ATPase、ChE、NOS、LDH、SDH活性一致。结果提示:紫红链霉菌的灭螺作用机理主要在于破坏钉螺体内Mg2 ATPase和LDH活性,使ATP生成和利用障碍,最终因能量缺乏而丧失生命功能直至死亡     

蒜鳞片薄壁细胞衰退过程中酶的细胞化学定位及DNA生化分析

蒜在储藏过程中。鳞茎薄壁细胞衰退。其营养物质供给幼芽萌发生长。采用细胞化学方法,对蒜休眠进程中的鳞茎薄壁细胞进行了ATPase以及APase的细胞化学定位,结果显示在薄壁细胞的质膜、细胞壁和胞间连丝上的酶活性随着蒜自休眠至萌发的不同发育进程而呈现增强的趋势,且在萌芽期酶活性表现最为强烈。表明细胞内物质的降解、转化与输出的加强有助于细胞内含物向新生芽的彻底转移。配合采用琼脂糖凝胶电泳对衰退薄壁细胞的DNA进行了分析,实验结果表现出典型的DNA Ladder．为蒜鳞茎薄壁细胞的衰退属于受基因控制的程序性死亡范畴补充了生化证据。     

青菜原生质体三磷酸腺苷酶的特性及在病毒感染后的变化

Kasamo等人曾测定了烟草花叶病毒感染的烟草叶肉细胞质膜上三磷酸腺苷(ATP)酶的活力,它高于对照者2～4倍。他们认为烟草叶肉细胞质膜ATP酶活性的上升与烟草花叶病毒的侵染有关。近十余年来,应用原生质体为材料,研究植物病毒获得一些有意义的结果。本文报导青菜原生质体的制备及其ATP酶的特性,并初步研究了长叶车前花叶病毒     

三酶焦测序体系的建立及其在唐氏综合征快速诊断中的应用

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差, 文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序反应, 当加入一种dNTP进行焦测序反应完后, 采用磁性分离技术, 除去焦测序反应产生的ATP和剩余的dNTP, 然后加入另一种dNTP进行测序, 按同样的方法去除影响下一轮测序反应的成分, 实现循环测序。此体系能准确判读待测DNA的碱基序列, 且可定量测定单核苷酸序列多态性(SNP)中两种等位基因型的相对比值。文章成功检测了16例正常人和8例唐氏综合征患者样本中21号染色体上两个杂合率较高位点(rs1042917和 rs4818219)的等位基因型比值, 所得结果能够明确说明待测样本中来自于父方和母方的21号染色体数目是否相等。该法具有良好的定量性能, 适合于SNP等位基因型的定量分析, 可以用于唐氏综合征的快速检测。     

脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊的毒力及几种酶系的影响

采用药膜法测试了脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊Periplaneta americana初孵若虫的触杀活性,并测定了其对成虫中枢神经系统乙酰胆碱酯酶（AChE）和腺苷三磷酸酶(ATPase)离体活性的影响。结果表明：脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊初孵若虫具有较强的毒杀活性,在接触时间24、48、72和96 h 的LC₅₀分别为26.26、4.68、1.51和0.62 μg/cm²;其对AChE没有明显影响; 对Na⁺ -K⁺ -ATPase有明显抑制作用,并存在浓度 效应关系,IC₅₀为44.9 μmol/L; 对Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase表现出低剂量激活,高剂量抑制的现象。结果提示美洲大蠊的AChE不是脱氧鬼臼毒素靶标,而ATPase可能是脱氧鬼臼毒素的重要靶标之一。     

三种蛇毒中三种酶的研究

我们选择分属三个不同蛇科的眼镜王蛇(Ⅰ,属眼镜蛇科)、尖吻蝮蛇(Ⅱ,属蝮亚科)和青环海蛇(Ⅲ,属海蛇科)分泌的原毒液,分别测定它们的γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT,E.C.2.3.2.2)、乳酸脱氢酶(LDH,E.C.1.1.1.27)和碱性磷酸酶(AKP,E.C.3.1.3.1)总酶活力,并应用浓度梯度聚丙烯酰胺电泳(PAGE)和等电聚焦电泳,比较上述三种酶的电泳表现。初步结果,总酶活力为,γ-GT:(Ⅰ)>(Ⅲ)>(Ⅱ)、LDH:(Ⅲ)>(Ⅰ)或(Ⅱ)、AKP:(Ⅰ)>(Ⅲ)>(Ⅱ);浓度梯度PAGE各呈不同酶谱,每种酶均有几种不同估计分子量;等电聚焦电泳显示各不相同等电点的多条酶带。此结果说明上述三种蛇毒中三种酶均存在多种形式,具多型性。     

刺激内脏大神经引起的小强荧光(SIF)细胞的组织化学和超微结构变化

对豚鼠一侧内脏大神经进行电刺激后,显微分光光度术测量发现:(1)刺激侧腹腔神经节小强荧光(SIF)细胞的儿茶酚胺(CA)荧光强度较对照侧下降了35.6%±4.6%((?)±SE)。(2)在单胺氧化酶(MAO)反应后,刺激侧 SIF 细胞的平均光密度(O·D·值)较对照侧显著升高;在镁离子激活的腺苷三磷酸酶(Mg~(2 )-ATPase)反应后,刺激侧的 O·D·值较对照侧显著下降。对超微结构进行的立体学分析显示,刺激侧 SIF 细胞内颗粒小泡的体积密度(V_v)较对照侧下降29.6%。这些结果表明:(1)豚鼠腹腔神经节 SIF 细胞受交感节前神经纤维支配。(2)刺激这些神经纤维可促使 SIF 细胞释放 CA。(3)释放的 CA 主要来自颗粒小泡的贮存。(4)CA 的这一释放过程伴有细胞内 MAO 活性的升高及 Mg~(2 )-ATPase 活性的下降。这些细胞能对电刺激发生反应的事实提示:交感神经节中的成团分布型 SIF 细胞可以在应激状态下,通过释放 CA 参与对机体的内分泌调节过程。     

胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下植物细胞损伤和过氧化氢及其清除酶水平的调节

细胞外三磷酸腺苷（extracellular adenosine-5'-triphosphate）是植物细胞的重要信号分子。以烟草悬浮细胞BY-2（Nicotiana tabacum L.cv.Bright Yellow-2）为材料,探讨了胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下细胞损伤、H₂O₂（过氧化氢）含量及H₂O₂清除酶活性的影响。结果显示,随着Pb（NO₃）₂浓度的不断提高（30~400 μmol·L^-1）,细胞外三磷酸腺苷含量呈现出逐渐下降的趋势,但胞内三磷酸腺苷含量及细胞的受损伤程度逐渐增大;同时,H₂O₂含量和过氧化氢酶的活性均有所上升,并在200 μmol·L^-1 Pb（NO₃）₂处理下达到最大值,而过氧化物酶的活性则不断降低。较之Pb（NO₃）₂胁迫下的细胞,对Pb（NO₃）₂胁迫的细胞加入外源三磷酸腺苷使得细胞受损伤程度显著降低,H₂O₂含量减少,过氧化氢酶活性减弱,而过氧化物酶活性增强。实验结果表明,Pb（NO₃）₂胁迫诱导的植物细胞损伤和H₂O₂及其清除酶水平的变化能受到细胞外三磷酸腺苷水平的调节。