芽孢杆菌E2菌株纤维素酶形成条件的研究

芽孢杆菌E,菌株(Bacillus sp.strain E2)能在55℃下良好生长并在培养液中大量积累胞外纤维素酶(190 mu／ml培养液),所产生的纤维素酶为单一的CMCa se。对芽孢杆茁E2菌株产酶条件进行了研究． 该菌产酶的最适培养基装量为200ml/500mI三角瓶,最适起始pH为6 5,最适产酶温度为45℃,产酶高峰在培养时间8—12小时。E2菌株不能利用单一的无机氮源形成纤维素酶。酪蛋白是试验过的供E2菌株形成纤维素酶的最好氮源,其用量为3g／L。CMC—Na,纤维二糖,能作为碳源供芽孢杆菌E2菌株形成纤维素酶。高浓度的葡萄糖(8g／L)对芽孢杆菌E2菌株纤维素酶的形成有抑制作用。天然纤维素不能作为芽孢杆菌E2菌株形成纤维素酶的碳源。     

苏云金杆菌SD—5菌株发酵生理学研究及生产

通过苏云金杆菌SD－5菌株对混合氨基酸的抗性及在3吨发酵罐中发酵生理学的研究,显示SD－5菌株具有优良的发酵性能。用正交试验设计方法筛选出SD－5菌株发酵培养基配方,菌数可达110－130亿／ml,芽孢率达95％以上。     

柳杉毛虫防治试验研究

用白僵菌、苏云金杆菌、2 4 .5 %全力、2 0 %氰戊菊酯等 4种杀虫剂的不同浓度对柳杉毛虫 (Dendrolimushoui L ajonquiere)进行室内毒力测定和林间防治试验 ,结果表明 ,野外防治柳杉毛虫以氰戊菊酯 6 0 0 0倍液 +苏云金杆菌 1.4× 10 9n/ ml+全力 80 0 0倍液 +白僵菌 1.2× 10 8n/ ml林间喷雾效果最佳 ,杀虫效果达 90 %以上。应用该复合剂大面积防治 2 0 hm2 ,效果达 80 %以上。     

苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigL基因突变体的特性分析

[目的]通过分析苏云金芽胞杆菌sigL基因突变体的特征,进一步明确sigL基因在苏云金芽胞杆菌中的功能.[方法]测定了苏云金芽胞杆菌HD-73菌株,sigL基因缺失突变菌株和互补菌株在不同营养成分的培养基中的生长曲线以及在不同氮源条件下的生长情况.分别将调控aco操纵子(编码3-羟基丁酮脱氢酶系统)的转录调节基因acoR和调控bkd操纵子(编码催化支链脂肪酸合成的酶系统)的转录调节基因bkdR的启动子与lacZ基因融合,并转入出发菌株和sigL突变体中,测定β-半乳糖苷酶的活性.[结果]sigL突变体不能利用精氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸为唯一的氮源;β-半乳糖苷酶的活性分析表明:在sigL突变体中acoR基因和bkdR基因的启动子活性降低.序列比对分析表明:Bt中的AcoR和BkdR的蛋白结构域与依赖于σL的转录调节因子的保守序列相似.[结论]苏云金芽胞杆菌中sigL基因的缺失可能阻碍了某些重要碳、氮源参与的代谢途径.在Bt中AcoR和BkdR是依赖于σL的转录调节因子.     

防腐剂对苏云金杆菌制剂活力及毒力测定的影响

采用不同防腐剂处理苏云金杆菌制剂及毒力生物测定 ,结果表明 ,7# ( 1 0 0ml中含 0 5ml1 0 %甲醛和 1ml1 5%尼泊金 )防腐剂处理苏云金杆菌制剂 0～ 96h ,抑制芽孢萌发和菌体活性的效果最佳 ,其次为2 # ( 1 0 0ml中含 1ml1 5%尼泊金 ) ,8# ( 1 0 0ml中含 1ml1 5%尼泊金和 0 0 5g土霉素 ) ;毒力生物测定 7# 防腐剂最稳定 ,LC50 最小 ,灵敏度最高。     

苏云金杆菌33菌株最佳培养基和发酵条件研究

应用正交试验L27(313)对鳞翅目昆虫高毒效的苏云金杆菌33菌株的发酵培养基进行研究,得到了适合其发酵培养的优化复合培养基配方—0.5％玉米粉 2．00％黄豆粉 0．15％酵母粉 0．25％鱼粉 0．075％蛋白胨 0．25％磷酸二氢钾 0．05％碳酸钙 0．035％硫酸镁。另外实验还证实适当增加通气量、发酵初始酸碱度控制在pH7．5、发酵温度30℃、转速180r／min、培养40h更适合该菌株液体深层发酵。     

响应面分析法优化耐高温蛋白酶发酵培养基

采用响应面分析方法对产耐高温蛋白酶的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringien- sis)FZ62发酵培养基进行优化．首先,进行发酵培养基碳源、氮源及初始pH值的单因素筛选,优化结果表明最适氮源为酵母粉、碳源是葡萄糖,初始pH值范围6-8．在此基础经响应面法优化,发酵培养基最佳组合为:酵母粉2．04%,葡萄糖为0．10%,初始pH7．07．经以上优化后发酵水平比初始设计提高了3．22倍．     

多粘芽孢杆菌质粒的研究——Ⅱ.多粘芽孢杆菌原生质体形成、再生与转化

多粘芽孢杆菌P250-2完整菌体不能作为质粒DNA的转化受体,但其质粒消除菌株P_0250-5制成的原生质体,可接受多粘芽孢杆菌的pBD2502及枯草杆菌的pUB110质粒DNA转化。在高渗蔗糖再生培养基上,原生质体再生率为20％左右,形成率在95％以上。在含新霉素(10μg/ml)、青霉素(25μg/ml)、四环素(12.5μg/ml)的高渗蔗糖再生培养基上分别获得了转化子。多粘芽孢杆菌的转化频率为3.29×10~(-3),枯草杆菌为4.4×10~(-4)。转化子的形态表现、生化特性和抗菌谱与给体菌株一致,表明多粘芽孢杆菌株间及多粘芽孢杆菌和枯草杆菌种间的质粒可以进行转化。     

重组枯草芽孢杆菌发酵廉价原料生产普鲁兰酶

[目的]构建长野芽孢杆菌普鲁兰酶突变体枯草芽孢杆菌工程菌株,优化发酵条件,筛选廉价的培养基原料生产普鲁兰酶。[方法]利用分子生物学手段,将基因pul324和表达载体p WB980连接,构建表达质粒p WB-pul324并转化Bacillus subtilis WB600;对表达产物进行SDS-PAGE分析和初始酶活的测定。进一步优化发酵条件,对不同碳源和氮源进行发酵培养基的筛选,同时研究不同金属离子的添加和培养基初始p H、接种量对发酵产酶的影响。[结果]获得基因工程菌B.subtilis WB600/p WB-pul324,SDS-PAGE电泳结果显示在89 k Da处有特异性条带,发酵初始酶活为12.34 U/ml;筛选得到玉米淀粉水解液和玉米浆干粉为培养基最适碳源和氮源,其最适浓度分别为50 g/L和30 g/L。Mn~(2+)、Fe~(3+)、Fe~(2+)和Tween-80的添加能提高发酵产酶活力。在最适初始p H 6.5,以最适5%接种量接种于优化后的培养基中,摇瓶发酵80 h普鲁兰酶的酶活达到414.48 U/ml。[结论]实现了普鲁兰酶突变体在枯草芽孢杆菌中的高效表达,筛选获得的培养基主要原料经济低廉,经过发酵条件优化后,重组菌酶活达到414.48 U/ml,是之前研究结果(20.16U/ml)的20倍。     

一株可积累鸟苷菌株的纯培养条件研究

菌株Bacillus.subtilis.S3 68是以鸟苷生产菌株B .subtilis.A0 66为出发菌经诱变所得。对该菌株进行培养条件研究的过程中 ,发现该菌株可以在摇瓶纯培养条件下积累鸟苷。试验结果表明 :发酵过程中 ,腺嘌呤的用量 0 .3 5mg/ml时 ,发酵液中鸟苷积累量最大 ,培养基中腺嘌呤的用量高于或低于 0 .3 5mg/ml均不利于鸟苷产物的积累 ;培养基中味精、硫酸铵、硫酸镁、磷酸二氢钾及Mn2 +用量显著影响发酵液中鸟苷积累水平 ;培养基中生物素、蛋氨酸、精氨酸、组氨酸、氯化钙及Fe2 +、Zn2 +用量与鸟苷积累的相关性不显著