一种简便、快速测定鹅膏多肽毒素的方法—抑芽法

低浓度（5-10ngml^-1)的鹅膏毒肽（amatoxins)能专一性抑制RNA聚合酶Ⅱ的活性,高浓度（为RNA聚合酶Ⅱ10^3-10^4倍的浓度）也能抑制RNA聚合酶Ⅲ的活性,因而影响细胞mRNA的转录和蛋白质的合成,抑制种子的萌发和生长,根据此原理我们建立了一种以植物种子萌发试验检测鹅膏毒肽的方法,称之为“抑芽法”（bud-inhibited assay)。该方法简便、实用、准确,操作流程：45℃干燥至恒重的鹅膏菌等子实体菌盖;水提法提取毒素并用氯仿沉淀蛋白质等;粗毒液浓度为0.025-0.05gml^-1干子实体;萝卜或绿豆种子培养温度为28℃,培养时间为24-72h,绿豆芽下胚轴生长被抑制率在95%以上,可能为鹅膏毒肽含量高的剧毒鹅膏菌：当被抑制率在60-80%,可能为鹅膏肽含量较低的微毒鹅膏菌;当被抑制率在30%以下时,可能是不含鹅膏菌肽的鹅膏菌。     

一种简便、快速测定鹅膏多肽毒素的方法--抑芽法

低浓度（5-10ngml-1）的鹅膏毒肽(amatoxins)能专一性抑制RNA聚合酶Ⅱ的活性,高浓度（为RNA聚合酶Ⅱ103-104倍的浓度）也能抑制RNA聚合酶Ⅲ的活性,因而影响细胞mRNA的转录和蛋白质的合成,抑制种子的萌发和生长。根据此原理我们建立了一种以植物种子萌发试验检测鹅膏毒肽的方法,称之为"抑芽法"（bud-inhibitedassay）。该方法简便、实用、准确。操作流程45℃干燥至恒重的鹅膏菌等子实体菌盖;水提法提取毒素并用氯仿沉淀蛋白质等;粗毒液浓度为0.025-0.05gml-1干子实体;萝卜或绿豆种子培养温度为28℃,培养时间为24-72h。绿豆芽下胚轴生长被抑制率在95%以上,可能为鹅膏毒肽含量高的剧毒鹅膏菌;当被抑制率在60-80%,可能为鹅膏肽含量较低的微毒鹅膏菌;当被抑制率在30%以下时,可能是不含鹅膏菌肽的鹅膏菌。     

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属含α－毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆,结果在３６小时后,各种不同毒 的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同,用紫外吸收法测定蛋白质含量,发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降,这表明α－毒伞肽的作用机理确是通过抑制ＲＮＡ聚合酶Ⅱ而导致蛋白质合成减少。     

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析*

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。     

我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析*

利用高效液相色谱(HPLC)技术对产于我国的28种鹅膏菌的主要肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)进行了检测分析,并和采于欧洲(德国)的毒鹅膏Amanita phalloides作对照,结果表明,3种东亚所特有的鹅膏菌(灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种)和欧洲毒鹅膏所含毒素种类多、含量高,其子实体菌盖部位主要毒素总量分别达到12583.7μg/g、8152.6μg/g、1058.2μg/g、7456.2μg/g干重子实体,这4种鹅膏菌可称之为剧毒鹅膏菌。其它25种鹅膏菌中有10种检测出含有微量鹅膏毒肽,含量在19.5μg/g-151.2μg/g之间。在4种剧毒鹅膏菌中,子实体组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,菌柄的毒素含量次之,菌托中的毒素含量最低;对于灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种,无论在菌盖、菌柄和菌托中,鹅膏毒肽类毒素的含量都高于鬼笔毒肽类毒素,尤其以α-amanitin的相对含量最高;而在欧洲毒鹅膏中,菌盖、菌柄和菌托中都以鬼笔毒肽为主,尤其以phallacidin的相对含量最高,并且从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽的相对含量依次增加。     

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属（Amanita）含α-毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆,结果在36小时后,各种不同毒苗的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同,用紫外吸收法测定蛋白质含量,发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降,这表明α-毒伞肽的作用机理的确是通过抑制RNA聚合酶Ⅱ而寻致蛋白质合成减少。     

鹅膏毒肽与RNA聚合酶II相互作用的分子机制研究

研究鹅膏毒肽与RNA聚合酶II相互作用的分子机制,利用分子对接方法获得了9种鹅膏毒肽与RNA聚合酶II相互作用的结合模式、结合位点、对接能和抑制常数等信息,并对鹅膏毒肽的毒性与结构间的构效关系进行了考察。结果表明：利用分子对接方法获得的鹅膏毒肽与RNA聚合酶II相互作用的信息与实验结果相一致;不同R2取代基引起毒素与聚合酶II结合能力强弱不同,从而导致鹅膏毒肽分子间的毒性差异。结果证实了运用分子对接方法探索多肽分子与蛋白质相互作用的可行性,为在分子水平上研究多肽与蛋白质的相互作用开拓了新的思路。     

β-鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化*

用反相高效液相色谱,以0.02mol/L醋酸铵-乙腈为流动相的梯度洗脱模式,在295nm吸收值的条件下,灰花纹鹅膏菌Amanitafuliginea的肽类毒素可以被成功的分离和纯化。单个肽类毒素的鉴定是用反相高效液相色谱和质谱同时进行。用这一方法可从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出β-鹅膏毒肽(β-amanitin),产量可达到:1158靏/g(干重),产品纯度达98%以上,回收率为95.3%。β-鹅膏毒肽的分子量为919.3Da。这个方法可用于其它鹅膏菌肽类毒素的分离纯化。     

块磷鹅膏的培养条件及所产Amanitins毒素的分析

采集并组织分离到块磷鹅膏Amanita spissa的纯培养菌丝。探讨了各种培养条件对块磷鹅膏菌丝生长的影响,实验结果表明,在28℃,pH 6.0,避光的条件下块磷鹅膏的菌丝体生长最好。液体反应器人工培养块磷鹅膏获得成功,其液体培养的菌丝体干重在摇瓶中为0.893g/L,在气升式反应器内可达到2.33g/L。固体斜面培养和气升式反应器液体培养的菌丝体的HPLC分析表明菌丝体内含有鹅膏毒肽,而不含有鬼笔毒肽。两种培养条件下菌丝体的-αamanitin毒素含量略有不同,固体斜面菌丝体为26.02μg/gDCW、反应器培养菌丝体为15.25μg/gDCW。通过抑芽法试验也证明固体和液体培养菌丝体中含有-αamanitin,且具有和子实体中-αamanitin相同的生物学活性。结果表明有可能通过液体大规模培养鹅膏菌丝体来生产鹅膏毒素。     

试谈我国鹅膏菌的分类研究*

在过去的一百余年中,国内外菌物学家对我国鹅膏菌属（Amanita）真菌进行了大量采集和分类研究。迄今为止,在菌物学文献中已为我国记载了近100种（含亚种、变种和变型）鹅膏菌,然而,其中许多是原描述于欧洲或北美的种类,它们在我国是否确有分布尚需开展深入研究。近几年来,作者对采自我国的部分鹅膏菌标本与欧美相似种的标本进行了比较研究,发现两者虽在外貌上有相似之处,但在内部结构上却有较大差别,在分子生物学方面也同样存在差异。若把它们作为同一分类单元处理似不恰当。我国幅员辽阔,森林、植被类型多样,众多与鹅膏菌形成外生菌根的树种为我国、东亚或东南亚的特有种,在它们长期的协同进化中,可能形成了不少特殊或亚洲的特有鹅膏菌。为能如实反映我国鹅膏菌的生物多样性,首先必须加强野外调查,在野外对子实体的形态及各部位的颜色进行仔细而准确的描述、拍照和绘图;其次对干燥良好的标本进行可靠的形态学、解剖学研究;此外,比较研究欧美相似种的标本也是十分必要的。本文所讨论的问题,在我国蘑菇目（Agaricales）其它类群的分类研究中可能也是值得注意的。     

检测流行性出血热病毒滴度和中和抗体效价的半微量空斑法

建立了检测流行性出血热病毒滴度和中和抗体效价的半微量空斑法。小牛血清与胎牛血清的培养效果无差异。7株不同来源的出血热病毒均能在E6细胞上形成空斑。接种的病毒浓度与形成的空斑数呈直线关系。用空斑法测得的病毒滴度稍低于荧光TCIE50滴定法。空斑减少中和试验的敏感性较荧光中和试验高30倍左右。同时还初步表明了本方法可用于流行性出血热病毒的抗原性分析。     

A SENSITIVE ALGAL ASSAY: AN IMPROVED METHOD FOR ANALYSIS OF FRESHWATERS1

An algal assay capable of detecting the carrying capacity of nutrient-poor rivers was developed. In order to eliminate carry-over of nutrients, thus masking the true nutrient condition of the water tested, a new growth medium was developed. This maintenance medium contained less than 4 mg · 1⁻¹ total inorganic salts. With an inoculum of 10⁴ cells-ml⁻¹ the test organism Selenastrum capricornutum Printz was grown in sterile-filtered, river water and transferred daily with a 1:1 dilution. The assay was carried out for 4 or 5 days, at which time cell number was calculated, and the doublings per day were determined. Comparisons are made with similar but less sensitive assays, on the basis of both daily and 5-day readings.     

一种简单通用的鸟类性别分子鉴定技术(简报)

我国幅员辽阔,生物类型多种多样,是世界上拥有鸟类种类最多的国家之一。截至1999年底,已知有鸟类1253种948亚种,隶属于21目83科,其中有多种为我国特有或珍稀濒危的鸟类。近年来由于环境污染、植被破坏及非法捕猎等种种原因,许多鸟类尤其是珍稀鸟类正逐步濒临灭绝。为了加紧保护野生鸟类种群,我们对珍稀鸟类采用了人工饲养、交配等手段以提高繁殖率,并已经在部分鸟类中获得成功。但是,在全世界的鸟类中有50%是单态性鸟。他们的性别不论是在幼鸟还是在成鸟时期,都很难     

A SIMPLE METHOD FOR THE ISOLATION AND ENUMERATION OF SPARSE POPULATIONS OF CYANOBACTERIA IN ESTUARINE WATERS1

A simple, sensitive assay method for the isolation and enumeration of sparse populations of cyanobacteria in an estuarine system is described. The method, based on the standard membrane-filter plate count technique, differentiates between viable and nonviable cells. It was found that an estuarine water-based agar medium was the most suitable medium for isolation of cyanobacteria. Because of the restricted nature of colony development, isolation of individual species is easily accomplished.