酿酒酵母和粟酒裂殖酵母属间融合和融合子特性

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)PW218和粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe Lindn)PW232的原生质体用20mmol/L CaCl_2和30％PEG(MW6000)处理进行属间融合,获得了10多株融合子,融合率为0.65～1.96×10~(-5)。对F_2和F_(10)两株融合子进行了葡萄糖、木糖及葡萄糖和木糖混合液的摇瓶实验结果表明F_(10)融合子利用葡萄糖、木糖及两种糖混合液产乙醇的能力大大高于两亲株。F_2融合子对木糖以及葡萄糖和木糖混合液的发酵能力亦较两亲株高,其中利用木糖产乙醇的量分别比PW218和PW232提高1.38倍和2.65倍。     

病毒融合蛋白的结构和功能

病毒融合蛋白可以分为三种类型,不同类型的病毒融合蛋白的结构差异很大,但是会采用相似的"发卡"构象实现融合.在一定条件下,病毒融合蛋白的疏水结构域,融合环或融合肽插入靶膜中,通过其自身折叠形成发卡使病毒和宿主的膜靠近.与此同时,融合蛋白构象变化会释放出足够的能量将双方膜打破并完成融合.本文中,我们总结了三种类型病毒融合蛋白的特征,并对其中央发卡三聚体结构域、跨膜结构域以及近膜结构域在融合过程中的作用进行了论述.     

促线粒体融合蛋白在线粒体融合和细胞凋亡中的作用

一直以来,线粒体动态变化都备受关注,这不仅关系到线粒体本身,也与细胞的整体状态密切相关。线粒体动态变化主要指线粒体的分裂和融合,该过程涉及一系列蛋白质。在线粒体融合中,目前研究得较深入的促线粒体融合蛋白主要有Mfn1、Mfn2和OPA1。随着研究的深入,发现这3种蛋白质不仅对于线粒体融合有重要作用,在细胞凋亡过程中也扮演着重要角色。现就Mfn1、Mfn2和OPA1的促线粒体融合作用及其与细胞凋亡的关系作详细阐述。     

融合酶的设计和应用研究进展

酶的分子改造和重新设计是解决酶催化工业应用瓶颈的重要途径。基于融合蛋白设计的融合酶技术是分子酶工程的一个研究热点,已逐渐应用于多功能酶和酶靠近效应的构建与控制研究中,显示出重要的理论和应用研究价值。文中对近年来融合酶的分子设计策略和应用研究的进展进行了综述。首先介绍了融合酶的概念和特点,并对最近研究中出现的融合酶构建策略进行了归纳总结,重点阐述了不同种类连接肽对融合酶的影响及其可能机理。同时,对目前融合酶的应用研究进行了归纳和讨论。最后,结合本实验室的研究,指出了融合酶领域的关键问题并对其发展方向进行了探讨和展望。     

融合基因研究进展

基因融合是生物技术领域大有发展前景的一类方法,其理论和实践意义重大。总结了融合基因的概念、分类及应用。     

凤尾菇和香菇原生质体非对称融合

The protoplasts of auxotrophic mutant monokaryon of Pleurotus. Sajor-caju was used as recipient parenL the protoplasts of wild dikareon of Lentinus edodes were heat-inactivated and used as nuclear donor parent. The fusants of two parents showed some their individual characteristics and physiological difference between themselves. Thrugh protoplast re-isolation and reversion of one randomly selective fusant, two parents had been recovered and the donor parent achieved some new physiological characteristics su…     

线粒体融合

线粒体融合对于保持线粒体的完整性和动态变化具有重要的意义,通过在酵母、线虫、果蝇等生物的研究已经确定了融合过程的大致轮廓,线粒体融合需要3种蛋白质,其中2种GTP酶,需要GTP水解和内膜电势存在的一个连续过程,这些研究为线粒体融合过程的全面理解奠定了基础。     

Memo蛋白的融合表达和纯化

目的:一些临床预后较差的恶性肿瘤一般具有很高的转移性和侵袭性,近来的研究表明,Memo蛋白与恶性肿瘤的这些特性有十分密切的关系。本研究拟克隆、融合表达和纯化Memo蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Memo蛋白编码序列,并将其以正确相位与pGST载体中的GST编码序列融合,构建成重组质粒pGST-Memo。将此重组质粒转化大肠杆菌DH5α后,用谷胱甘肽-Sepharose4B纯化融合蛋白,并用Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:构建了Memo蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌DH5α中得到表达,经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得了纯化的GST-Memo融合蛋白。Western印迹检测表明,此蛋白可与GST抗体反应。结论:Memo蛋白的克隆、融合表达和纯化,为进一步研究恶性肿瘤的转移性、侵袭性及其相关机理提供了有用的材料。     

藻类原生质体融合和细胞杂交技术

细胞融合技术是一项迅速发展的细胞工程技术,是细胞工程研究的重要内容之一。自20世纪80年代开始,细胞融合技术开始应用于藻类原生质体融合,至今已在多种藻类中开展了细胞融合及杂种培育试验。综述了在藻类细胞融合技术中常用的方法:化学融合法、电融合法、激光融合法,以及在藻类细胞融合中的最新研究进展,并对目前在藻类细胞融合研究中的困难进行简要的评述。     

核心组蛋白的融合表达和纯化

目的:克隆核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4的基因,表达并纯化组蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-H2A、pGST-H2B、pGST-H3和pGST-H4,分别转化大肠杆菌BL21,表达融合蛋白GST-H2A、GST-H2B、GST-H3和GST-H4;用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4的融合表达载体;Western印迹检测表明,融合蛋白GST-H2A、GST-H2B、GST-H3和GST-H4获得表达及纯化。结论:表达并纯化了H2A、H2B、H3和H4的融合蛋白,为进一步研究核心组蛋白的功能奠定了基础。     

聚乙二醇和金属离子诱导脂质体与细胞的融合

用荧光菜振能量转移技术检测ＰＥＧ和金属离子诱导脂质体和细胞的融合,发现有ＴＥＧ参与诱导时,虽然Ｃａ＾２＋对膜融合的促进作用仍专一地依赖于ＰＳ的存在,但其对ＰＳ的依赖性降低;Ｍｎ＾２＋促进含ＰＳ和ＰＥ的脂质体与细胞的融合,而Ｍｇ＾２＋无作用。以ＰＣ：ＣＬ：Ｃｈｏｌ为０．５：０．５：１的脂质体包埋天花粉蛋白,经ＰＥＧ诱导与骨髓瘤细胞ＳＰ２０融合,提高了天花粉蛋白对骨髓瘤细胞的杀伤力。     

硅酸盐细菌和苏云金芽孢杆菌原生质体融合

具有解钾活性的硅酸盐细菌──胶质芽孢杆菌（R．mucilaginesus）W9－12与具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌（B．thuringensis）Bt179208原生质体质进行了融合。W9－12原生质体形成率为99．7％．再生率为24．9％,Bt179208原生质体形成率为99．9％,再生率为35％。以PEG为助融剂进行原生质体融合．得到56个融合子．融合率为5．92×10－6。融合子在双抗选择培养基上连续传代10次,得到12个稳定的融合子,生物测定表明,融合子既具有一定的杀虫活性又具有一定的解钾活性。     

黄花烟草和枸各间原生质体融合再生杂种小苗

利用改良的ＰＥＧ方法以２％的频率诱导黄花烟草原生质体和经ＩＯＡ失活的枸杞原生体融合。在获得的２５０块愈伤组织中,有５块为形态上与枸杞愈伤组织类似。对这５块愈伤组织的过氧化物酶和酯酶同工酶分析结果表明,其中的２块（记作Ｈｙ２和Ｈｙ５）为对称程度较高的体细胞核杂种;其它３块为不对称程度较高的体细胞核杂种。细胞学观察指出,Ｈｙ２和Ｈｙ５的平均染色体数目分别为９８．２和５９．３。此外,两个杂种的几乎所有中     

YAC修饰和原生质体融合法转移进哺乳动物细胞

应用ＤＮＡ同源重组的方法对酵母人工染色体（ＹＡＣ）进行修饰,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ等方法证实ｎｅｏ基因整合于ＹＡＣ上,通过ＰＥＧ介导的原生质体融合法将一个３３０ｋｂＹＡＣ导入Ｌ９２９细胞,得到Ｇ４１８抗性克隆。     

花椒和野花椒的无融合生殖

花椒与野花椒的胚囊发育类型属蓼型,成熟胚囊的卵器退化。花椒无雄花,不发生双受精,自发形成胚乳并产生珠心胚。野花椒虽有正常花粉,人工授粉后能萌发,但在花粉管长入胚囊之前卵器已解体,中央细胞中已形成胚乳游离核,因此也不发生双受精,由珠心细胞自发形成胚。这种现象是花椒和野花椒在长期进化过程中形成的一种十分特化的适应。     

膜融合机制研究进展

膜的融合是一个基本的生命过程,在生物的生长发育中有着重要作用。通过融合,两套独立的双层脂分子合二为一,完成一定的生物功能。膜融合分子机制的关键在于其主要成分：融合蛋白。Ⅰ、Ⅱ类病毒融合蛋白形成“发夹”,胞内囊泡与目标膜各提供的融合蛋白形成“类亮氨酸拉链”,这些结构将独立的膜拉近,继而促使膜合为一体。细胞与细胞间融合蛋白的作用机制目前还未明确,在各种膜融合中,脂双层的变化可能是类似的,但介导融合的分子机制应该是不同的。目前,对于膜融合很多方面的理解还停留在假说阶段。理解了膜融合的过程和分子机制不仅将极大地促进生物学的发展,更重要是将为相关的疾病治疗打下坚实的基础。