人体甲胎蛋白在麦胚无细胞系统中的生物合成

人及动物体内有些蛋白质,在胚胎中存在,而在成年期含量极低,当发生肿瘤时又大量产生。甲胎蛋白是这类蛋白之一种。正常人体血清中甲胎蛋白的含量极低,当体内产生原发性肝癌时,甲胎蛋白的水平可升高近百倍,甚至千倍以上。因此血清甲胎蛋白含量的测定,对原发性肝癌的早期发现和早期诊断具有重要的意义。我们和Ruoslahti比较了胚胎及肝癌来源的甲胎蛋白的物化性质,都证明二者相似。Gitlin用放射自显影技术证明人体甲胎蛋白是由印黄囊及肝细胞合成。原发性肝癌发生过程中肝癌细胞是重要的合成部位。但是甲胎蛋白的大量合成与肝癌发病机制的关系至今还很不清楚。深入研究其合成过程的调节控制机制,显然有其特殊的意义。而用体外无细胞系统深入研究蛋白质的合成过程比用整体或完整细胞更便于认识和分析。真核细胞的无细胞翻译系统过去较多利用     

二乙基亚硝胺诱发肝癌的大鼠中维生素K依赖性羧化酶的研究

本文证明DENA诱发的大鼠肝癌结节中维生素K依赖性羧化酶活性显著降低,外源多肽羧化酶活性只有正常大鼠肝脏中的62.6％,而内源蛋白质前体羧化酶活性仅为27％。华法令能在正常大鼠肝脏中诱导羧化酶的合成,而这种诱导能力在诱癌晚期的肝癌大鼠肝脏中明显下降。上述结果说明肝癌细胞中维生素K依赖性羧化酶的合成受阻,造成肝癌组织中羧化酶的缺乏。诱癌过程中大鼠肝脏维生素K依赖性羧化酶活性和血浆异常凝血酶原水平形成良好的对应关系。随着肝癌组织的增大,肝癌细胞分泌入血的异常凝血酶原水平显著升高,诱癌第20周时的大鼠血浆中异常凝血酶原含量为正常大鼠的2.5倍。由此认为,肝癌组织由于不能合成足量的维生素K依赖性羧化酶,导致凝血酶原在成熟过程中羧化受阻,分泌入血形成高水平的异常凝血酶原。     

miRNA-492在肝癌中表达变化的研究

目的:通过观察miRNA-492在肝细胞株L02、肝胚细胞瘤HepT1细胞株和肝癌SMMC-7721细胞株中的表达差异,以及在正常肝脏组织、肝母细胞瘤组织和原发性肝癌组织中的含量差异,探讨其与不同类型肝脏肿瘤发生发展的关系.方法:应用Real time-PCR方法检测miRNA-492在正常L02肝细胞株和肝癌HepT1、SMMC-7721细胞株的含量.同时采集和检测原发性肝癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织,以及肝母细胞瘤患者瘤组织的含量.结果:1)与正常人L02肝细胞相比,miRNA-492在肝癌HepT1细胞株中的表达显著升高(P＜0.001),但在SMMC-7721细胞株中略升高,无统计学差异.2)与正常肝脏组织相比,miRNA-492在肝母细胞瘤的瘤组织中含量显著升高(P＜0.01),但原发性肝癌的癌组织略升高,无统计学差异.结论:miRNA-492在不同肝癌细胞株中表达不同,在肝胚细胞瘤中表达升高,且在肝母细胞瘤瘤组织中的表达高于正常肝脏组织.但原发性肝癌癌组织中变化不明显,这说明miRNA-492与某些类型肝癌,特别是肝母细胞瘤的发生发展有关.     

用原位分子杂交技术检测F9-1EC细胞甲胎蛋白基因的表达

甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白,在胚胎发育阶段先由卵黄囊合成,以后由胚胎肝合成,成年肝细胞不再合成或合成甚微,但是肝细胞癌变后又重新合成,并分泌到血液中,故属于癌胚性蛋白,是肝癌临床诊断和实验研究的重要标志物之一。     

实时定量PCR检测miRNA-29a在肝癌中的变化

目的:探讨微小RNA(miRNA)-29a在正常人和原发性肝癌患者血清,以及原发性肝癌患者的正常肝脏组织和肝癌组织中的表达.方法:应用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-29a,在正常人和原发性肝癌患者血清水平.同时收集并检测原发性肝癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织中miRNA-29a的含量.结果:1)与正常人血清相比,miRNA-29a在原发性肝癌患者血清中水平没有明显改变(P＞0.05).2)与正常肝脏组织相比,原发性肝癌患者肝癌组织中miRNA-125含量明显降低,有统计学差异(P＜0.01).结论:MiRNA-29a在原发性肝癌患者的肝癌组织中表达显著降低,但患者的血清水平并没有明显改变.     

大白兔VX2肝癌模型制作优化研究

目的:改进大白兔VX2肝癌模型制作方法并研究肝癌组织缺血再灌注后的损伤作用。方法:用特殊技术方法制备高浓度细胞悬液,分别以27号注射针头向动物肝脏左中叶注射0.3 mL,制成动物肝癌模型。待肿瘤细胞种植成功至实验标准后,阻断肝左中叶之供血和门静脉60分钟,恢复血流至各个实验时间点。检测癌组织中CAT和SOD浓度的改变和细胞凋亡情况。结果:全部动物肝脏VX2细胞悬液注射后均种植成功但每组动物中有2-3只出现肿瘤细胞外溢和种植。种植成功之肿瘤组织缺血再灌注后CAT浓度明显降低且至1天达最低水平。SOD浓度在正常肝组织和肝癌组织中均明显降低而肝癌组织在再灌注后7天气浓度仍然保持较低水平。在正常肝组织和肝癌组织中肿瘤细胞凋亡均有增加,但在后者更为显著。结论:以特殊外科方法直接向肝组织内注射VX2细胞悬液能够成功制作大白兔肝癌模型。缺血再灌注可以导致组织的细胞凋亡,但对肝癌组织的影响更大。     

不同配方饲料对DEN诱导小鼠肝癌模型建立的影响

目的建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝癌模型并使用两种不同配方饲料:SPF级小鼠大鼠全价配合饲料和AIN93-G配方合成饲料分别喂养,探讨不同饲料喂养对构建DEN诱导小鼠肝癌模型的影响。方法14日龄雄性C57BL/6小鼠腹腔一次性注射DEN溶液,给药量25 mg/kg体重,建立小鼠肝癌模型。小鼠离乳后分为两组,一组以常规SPF级大小鼠全价配合饲料喂养,另一组以AIN-93G配方合成饲料喂养。模型小鼠生长至9月龄时处死,取肝脏组织称重,观察并记录肝癌生长情况。结果全价饲料组小鼠肝脏全部产生肿瘤,AIN-93G组小鼠体重和肝脏重量明显低于全价饲料组小鼠,肝癌发生率、肿瘤结节数量和大小也明显低于全价饲料组小鼠。结论全价饲料喂养的小鼠DEN诱导肝癌模型造模成功,而AIN-93G饲料喂养的小鼠诱导肝癌的发生发展受到抑制,同时小鼠体重明显下降,提示了饮食因素在动物疾病模型建立中起到的关键作用。     

Dicer1 敲除对肝脏胆酸代谢和转运功能的影响

目的:微小RNA(microRNAs,miRNAs)在胆固醇的合成,代谢和转运中起着重要作用,而mi RNAs在胆固醇代谢物胆酸的代谢和转运中的作用尚不清楚。Dicer基因是miRNAs生成过程的关键酶。本课题使用肝脏特异的Dicer1基因敲除小鼠,考察肝脏Dicer1基因敲除对C57BL/6小鼠肝脏胆酸代谢和转运的影响。方法:使用白蛋白启动子驱动的Cre重组酶和Loxp系统(Alb-Cre/Loxp)在小鼠肝脏中特异的敲除Dicer1基因;分别收集3~12周龄的小鼠血液和肝脏组织,使用Cobas生化仪检测小鼠血液和肝脏中总胆酸含量;利用实时定量PCR的方法分析肝脏中胆汁酸代谢转运相关基因的表达。结果:实验发现,肝脏Dicer基因敲除后,胆酸在血液和肝脏中明显蓄积,弥漫性肝细胞轻微空泡化,偶见单个肝细胞坏死。检测胆酸代谢和转运相关基因的表达发现,胆酸合成相关基因的表达有轻度升高,但缺乏统计学差异;在肝脏细胞血管侧的胆酸摄取转运体中,Oatp1a1在Dicer1敲除小鼠肝脏中明显下调,Ntcp和Oatp1b2则无明显改变;而肝细胞血管侧胆酸外排转运体的表达均有显著升高,胆管侧的外排转运体中Abcb11表达有明显增加。结论:Dicer基因敲除后,胆酸在血液和肝脏中明显蓄积,肝脏和血液中胆酸总量显著增加。血液中胆酸的蓄积可能与肝脏细胞血管侧摄取转运体的低表达和血管侧外排转运体的高表达有关;而肝脏中胆酸的蓄积可能部分来自于轻度升高的胆酸合成酶,胆酸在肝细胞内运输途径的紊乱可能与肝脏和血液中胆酸总量的显著增加相关。     

miRNA-181在肝癌中表达变化的研究

目的:观察微小RNA(miRNA)-181在正常人肝细胞L02、肝癌细胞株SMMC7221和Hep3B中的表达,以及在正常肝脏组织和肝癌组织中的表达,探讨其与肝癌发生发展的关系.方法:应用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-181,包括miRNA-181a、miRNA-181b、miRNA-181c、miRNA-181d,在正常肝细胞和肝癌细胞的含量.同时收集并检测肝细胞癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织的含量.结果:MiRNA-181在肝癌细胞株中的表达明显高于正常人肝细胞(P＜0.05或P＜0.001).MiRNA-181在肝癌组织中表达明显高于正常肝脏组织(P＜0.05).结论:MiRNA-181在不同肝癌细胞株中表达不同,但都高于正常肝细胞,并且miRNA-181在肝癌组织中的表达高于正常肝脏组织.这说明miRNA-181与肝癌的发生发展有相关性,可能成为肝癌诊断和预后的一个指标.     

鳗鲡繁殖生物学研究Ⅴ．性类固醇激素诱导雌鳗促性腺激素(GtH)分泌和卵巢发育的作用

多次注射雌二醇或睾酮对雌鳗促性腺激素(GtH)的合成与分泌活动以及卵巢发育都有明显的促进作用,其中睾酮的作用更较雌二醇显着;多次注射LHRH-A的促进作用则不明显.多次埋植雌二醇或睾酮都能促使脑垂体合成GtH,但所取血清样品中的GtH含量都未见明显增加;多次埋植雌二醇后血清中卵黄蛋白原的含量明显增加,但卵巢GSI增长幅度小,表明埋植雌二醇虽能促使肝细胞合成卵黄蛋白原并释放到血液中,但未能全部渗入卵母细胞内;多次埋植睾酮后血清中的卵黄蛋白原含量虽未见明显增加,但卵巢明显发育长大,这表明埋植睾酮能促使肝细胞合成的卵黄蛋白原迅速地通过血液运送到卵巢,并渗入卵母细胞内.       

miRNA-125在肝癌中表达变化的研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)-125在正常人和肝癌患者血清,以及肝癌患者正常肝脏组织和肝癌组织中的表达.方法:应用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-125,包括miRNA-125a、miRNA-125b在正常人和肝癌患者血清中的含量.同时收集并检测肝细胞癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织miRNA-125含量.结果:1)与正常人血清相比,miRNA-125在癌症患者血清中的含量没有明显变化.2)与正常肝脏组织相比,肝癌组织中miRNA-125含量明显下调,有统计学差异(P＜0.001).结论:MiRNA-125,包括miRNA-125a和miRNA-125b在肝癌组织中表达显著减少,但是在肝癌患者血清并没有明显变化.     

循环miRNAs在几种肝病检测中的研究进展

micro RNAs(mi RNAs)是一类单链非编码的内源性小RNA分子,参与细胞、组织甚至个体的生长发育。以往人们主要研究的是肝脏组织中mi RNAs在肝脏相关疾病检测中的应用,随着2008年血液中mi RNAs的发现,循环mi RNAs在疾病检测中的研究逐渐成为热点。micro RNAs普遍存在于血液中,与肝癌、肝硬化等多种肝脏疾病的发生发展密切相关。本文介绍了循环mi RNAs的来源及其特异性、稳定性等特性,简述了循环mi RNAs传统和最新的检测方法及特点,总结了循环mi RNAs在肝癌、肝炎、肝硬化、药物性肝损伤等肝脏疾病检测中的研究进展。近年研究表明循环mi RNAs检测具有采样方便、稳定性好、灵敏度高、可连续监测等优势,在肝脏相关疾病的诊断和预测中发挥了越来越重要的作用,其临床意义及应用前景已引起高度关注。本文重点综述在前人的研究结果中有望成为肝脏相关疾病诊断和预后判断的循环mi RNAs分子标志物发现目前的很多研究只是停留在实验室阶段,尚缺乏简单有效的诊断方法和统一的诊断标准,未来研究的热点应集中在如何进一步提高有潜力的mi RNAs分子标志物的敏感性、特异性和标准化,使其真正应用于临床诊断。     

血钙浓度是怎样影响神经兴奋性和肌肉收缩的

全国统编高中《生物》课本关于无机盐在细胞内的作用中谈到“血液中必须含有一定量的钙盐,如果钙盐的含量太低或太高,都会使动物和人出现病态。哺乳动物的血液中,钙盐的含量太低时,这种动物就会出现抽搐。”钙盐的这一生理作用,很多书中都提到过,但这种作用的生理机制,都没有明确解释。本文仅这一问题进行浅析,供学习时参考。 (一)可兴奋细胞兴奋性的维持可兴奋细胞是指神经细胞、肌细胞、腺细胞,它们对极微弱的刺激能够产生兴奋或反应,并把受刺激局部所发生的反应传布到整个细胞。     

固相探针DNA圆点滤膜杂交法对大鼠肝和卵黄囊中甲胎蛋白及白蛋白基因表达的定性定量测定

甲胎蛋白和白蛋白是二个分子大小相近的血清蛋白,两者除在氨基酸及核苷酸顺序上有很高的同源性(分别为34％和50％)外,二级结构也很相似,表明它们在进化上有密切的关系.目前普遍认为它们来源于一个共同的祖先基因,并组成一个基因家族.但在发育过程中,它们的表达却很不相同.在哺乳动物的正常发育中,甲胎蛋白首先由卵黄囊,随后由胚肝合成.它的含量在胎儿血清中很高,临近出生时开始降低,出生后急剧下降,很快即达很低水平.成年动物的肝脏细胞仅合成很微量的甲胎     

大肠杆菌中包含体的形成及其活性表达产物的分离

随着基因工程研究的发展,人们可以利用动物、植物细胞或微生物来合成动物体内某些含量较低、但又有很大药用价值的蛋白分子,如生长激素,白细胞介素-2、尿激酶等等。 在利用微生物进行基因工程的生产中,大肠杆菌(E.coli)是人们常用来做表达目的基因的宿主菌。由这一途径来生产这些天然含量较低的物质,具有产量高,成本低,     

使用免疫酶标法、免疫荧光法和免疫酶标电镜法观察甲胎蛋白在人胚组织中的分布

甲胎蛋白是一种血清蛋白,Bergstrand等(1956)首次在人胚中发现。在正常情况下,它仅是胚胎或新生儿时期的产物。6周人胚肝细胞开始有此蛋白的合成。合成能力增长迅速,在发育到第12—13周时,胎儿血清中甲胎蛋白含量达到高峰。随后合成能力下降,当胎儿接近出生阶段,合成过程即将逐渐停止。成人血清中此种蛋白的含量极少。根据动物实验和临床研究证实,甲胎蛋白的重新出现和持续存在,意味着存在原发性肝癌或胚胎性生殖腺肿瘤(Sell等,1976; Abelev等,1967;1971)。     

《癌细胞》：发现新标志物可预测干扰素对肝癌疗效

新一期《癌细胞》杂志以封面论文形式,发表了中国工程院院士、医学免疫学国家重点实验室主任曹雪涛团队的论文,报道了该团队关于肝脏维甲酸诱导基因I（IuG-I）表达水平可预测肝癌患者应用干扰素治疗是否有效及其相关分子机制的研究结果。肝癌是严重危害我国人民健康的恶性肿瘤,但目前对于晚期不能手术的肝癌患者缺乏有效的治疗手段。应用干扰素治疗肝癌已经过多年尝试,但临床观察表明,干扰素仅仅对于部分肝癌患者有效。发现能预测肝癌对于干扰素疗法反应性的标志物,即能够通过检测某种标志物分子来甄别哪些类型的肝癌患者可应用干扰素,一直是肝癌临床治疗的一个难点。     

问题解答

问：脂类物质在血液中是怎样运输的？答:血液的主要成分是水,约占81—86％,脂类物质不溶于水,在血液中都是与蛋白质结合成可溶于水的脂蛋白而进行运输的。研究表明,动物血浆中的游离脂肪酸绝大部分与清蛋白结合,而脂肪、胆固醇、磷脂则主要与血浆球蛋白结合成不同的脂蛋白。血液中的脂蛋白按密度主要分为四类:乳糜微粒(CM),它是小肠上皮细胞合成的,其主要成分来自食物脂肪;极低密度脂蛋白(VLDL),是肝细胞合     

禽胰多肽对体外培养肝细胞分泌功能的影响

禽胰多肽 (ａｖｉａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ,ＡＰＰ)是由禽类胰腺合成并分泌的含 36个氨基酸残基的直链多肽。研究表明 ,ＡＰＰ可促进动物采食 ,刺激胃肠道运动及其腺体的分泌。本实验室采用磷酸钙沉淀法从鸡的胰腺中分离出含ＡＰＰ活性组分的ＡＰＰ粗品 ,用该粗品添加于鸡饲料中发现 ,可提高鸡采食量 ,提高鸡腿肌重及单位肌组织中ＤＮＡ及ＲＮＡ的含量 ,促进鸡生长。肝脏是机体的重要代谢器官 ,也是神经内分泌生长轴的重要靶器官。研究表明 ,垂体细胞分泌的生长激素 (ＧＨ)通过与肝细胞膜上的ＧＨ受体结合 ,刺激肝细…     

高果糖引起的脂肪肝大鼠肾脏脂质合成相关基因和蛋白的表达

大量研究表明,高果糖可引起脂肪肝,但对肾脏脂质代谢的影响尚不清楚。该实验研究给予10％果糖水5周后诱导的脂肪肝大鼠肾脏的脂质代谢情况,并探讨其可能机制。将16只雄性SD大鼠随机分为正常组（con）和果糖组（fru）,果糖组给予10％（W／V）果糖水,第5N末称体重、取血、处死,检测血浆GLU、TG、TC和INSULIN含量。取肾脏、肝脏和白色脂肪称重,采用形态学方法观察肝脏和肾脏脂质沉积情况,酶法测其TG、TC含量,以Real time—PCR检测肾脏、肝脏中脂质合成和脂质氧化相关基因水平,以Westemblot检测肾、肝细胞核脂质合成转录因子的蛋白表达。结果显示,果糖组大鼠血浆TG、INSULIN明显升高,并出现肥胖体征,肝脏脂质沉积严重,其调控脂质合成的两个关键的转录因子ChREBP和SREBPlcmRNA和核蛋白表达都明显升高,并且它们靶向的脂质合成相关酶FAS、ACCl、SCDlmRNA表达也显著增加。但是,在肾脏中,高果糖没有引起TG含量的变化,调控脂质重新合成的基因和蛋白的表达也未发生变化。因此,与果糖致脂肪肝不同,高果糖饮食并没有造成肾脏的脂质沉积和脂质合成相关基因、蛋白的变化。