结核分枝杆菌热休克蛋白GroEL1的研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的GroEL1蛋白是基因复制产物,作为热休克蛋白(HSP)一员,不但行使原有的助折叠分子伴侣功能,而且可作为抗原,在抗原呈递中起作用。另外,由于其独特的结构特点,GroEL1还具有多种生物功能,如作为蛋白分子伴侣,控制细胞因子依赖性肉芽肿的产生;作为DNA分子伴侣,保护DNA免受损害。而在分枝杆菌属的其他物种如耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)中却行使不同的生物学功能。这些功能产生的原因和机制有待进一步研究,从而为结核病的发生及结核分枝杆菌的进化机制提供更多的依据。     

结核分枝杆菌P16蛋白的研究进展

P16蛋白是结核分枝杆菌主要的膜蛋白,对该菌的生存力和稳定性起重要的调节作用.P16蛋白主要以9个亚基的寡聚体形式存在,有抗蛋白酶的水解作用;在氨基酸序列有一α-crystallin结构,该结构与P16蛋白的分子伴侣活性密切相关;P16蛋白具有高效、自发的再折叠,再组装能力,具有极强的抗热性.P16蛋白具有较强的免疫原性,可作为预防结核的亚单位疫苗及血清学诊断试剂.     

Immunogenicity and protective efficacy of recombinant M2e.Hsp70c（Hsp70359–610） fusion protein against influenza virus infection in mice

New strategies in vaccine development are urgently needed to combat emerging influenza viruses and to reduce the risk of pandemic disease surfacing. Being conserved, the M2 e protein, is a potential candidate for universal vaccine development against influenza A viruses. Mycobacterium tuberculosis Hsp70（mHsp70） is known to cultivate the function of immunogenic antigen-presenting cells, stimulate a strong cytotoxic T lymphocyte（CTL） response, and stop the induction of tolerance. Thus, in this study, a recombinant protein from the extracellular domain of influenza A virus matrix protein 2（M2e）, was fused to the C-terminus of Mycobacterium tuberculosis Hsp70（Hsp70c）, to generate a vaccine candidate. Humoral immune responses, IFN-γ-producing lymphocyte, and strong CTL activity were all induced to confirm the immunogenicity of M2 e.Hsp70c（Hsp70359–610）. And challenge tests showed protection against H1N1 and H9N2 strains in vaccinated groups. Finally these results demonstrates M2 e.Hsp70c fusion protein can be a candidate for a universal influenza A vaccine.     

重组结核分枝杆菌Hsp16.3的纳米金免疫传感器检测Hsp16.3抗体

克隆和表达结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Hsp16.3),建立纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体.PCR扩增hsp16.3基因,构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,表达和纯化Hsp16.3,Western blot分析其反应原性;晶种生长法制备金纳米棒并连接Hsp16.3,建立纳米金免疫传感...     

结核分枝杆菌ESAT-6抗原和HSP70截短后C端片段融合蛋白的克隆、表达及免疫原性研究

<正>结核病(TB)仍是一个主要的威胁世界公共健康的问题。选定结核分枝杆菌(MTB)的免疫原,以期能有效诱导保护性免疫应答是开发研究TB疫苗的最终目的。     

能合成IL-22的T细胞在结核病中的分化、分布及γδ T细胞对其的调节

能产生自细胞介素22（IL-22）的人T细胞在感染状态下的分化、组织分布以及免疫调节还不清楚。该研究发现即使没有体外抗原刺激,在非人的灵长类动物模型中,结核分枝杆菌感染亦可导致具有从头合成IL-22能力的T细胞数量明显升高,而且这些细胞分布于肺组织中的数量远超过血液与淋巴组织。     

表达猫瘟热病毒VP2蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为构建能表达FPV VP2蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2)载体.首先用PCR方法从FPV GT-2株细胞培养物中扩增出了VP2蛋白基因,将其克隆到真核表达质粒pVAX1中构建了含有FPV vp2基因的表达盒(CMV-VP2-PolyA),将该表达盒酶切后定向克隆到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAX△E3中,构建出pVAX△E3VP2.用Sal I+Nru I双酶切pVAX△E3VP2,回收含有目的基因表达盒部分,将其定向克隆入含有CAV-2全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,构建了重组质粒pCAV-2-FPV-VP2.Cla I+Asc I酶切pCAV-2-FPV-VP2释放出重组基因组,以此转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-VP2.该重组病毒能使MDCK细胞产生腺病毒样细胞病变.Western blot检测证实,该重组病毒能表达具有免疫学活性的VP2蛋白.该重组病毒可以有效地诱导免疫猫产生抗FPV和CAV-2抗体.本实验表明该重组病毒有可能成为一个FPV的疫苗株.     

表达猫瘟热病毒VP2蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为构建能表达FPV VP2蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2)载体。首先用PCR方法从FPV GT-2株细胞培 养物中扩增出了VP2蛋白基因,将其克隆到真核表达质粒pVAX1中构建了含有FPV vp2基因的表达盒(CMV- VP2-PolyA),将该表达盒酶切后定向克隆到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAX△E3中,构建出pVAX △E3VP2。用Sal I Nru I双酶切pVAX△E3VP2,回收含有目的基因表达盒部分,将其定向克隆入含有CAV-2 全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,构建了重组质粒pCAV-2-FPV-VP2。Cla I Asc I酶切pCAV-2-FPV- VP2释放出重组基因组,以此转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-VP2。该重组病毒能使MDCK细胞产生 腺病毒样细胞病变。Western blot检测证实,该重组病毒能表达具有免疫学活性的VP2蛋白。该重组病毒可以有 效地诱导免疫猫产生抗FPV和CAV-2抗体。本实验表明该重组病毒有可能成为一个FPV的疫苗株。     

结核分枝杆菌Rv2461c基因的克隆、表达、纯化及其抗原性的初步检测

目的:探索结核分枝杆菌Rv2461c基因编码的elpP蛋白作为结核检测抗原的可行性.方法:克隆结核分枝杆菌clpP蛋白的编码基因Rv2461e,构建pET30a-Rv2461c重组质粒,并将其成功的转化到大肠杆菌JF1125克隆栽体中,测序鉴定结果正确.将pET30a-Rv2461c重组质粒转化到大肠杆茵BL21中,表达纯化目的蛋白进行质谱分析.制备clpP蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western检测分析蛋白的亚细胞定位,纯化的clpP蛋白通过间接ELISA实验进行抗原性的初步检测.结果:结核分枝杆茵clpP蛋白大量存在于细胞质中,少量存在于细胞壁和细胞膜中.重组抗原在检测肺结核病人中的检出率为38.3%(23/60),检测敏感性为38-3%,特异性为90%.结论:为后续深入研究clpP蛋白的生物功能、clpP作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性提供了基础.