荧光定量PCR检测人巨细胞病毒的方法学建立

目的建立人巨细胞病毒（HCMV）的TaqMan MGB探针荧光定量PCR（FQ—PCR）检测方法。方法选取HCMV MIE exon4为PCR扩增靶序列,经TA克隆构建重组质粒作为定量标准品,经FQ—PCR反应条件的优化及方法学评价,再将其应用于临床检测。结果FQ—PCR最适循环参数为：95℃ 5 min;95℃ 20 s,60℃ 60 s（40 cycles）,20μl最适反应体系为：2．0mmol／L Mg^2＋、0．5μmol／L引物、1．5μmol／L探针、200μmol／L dNTP、2110×buffer、1．0 U Taq酶、2．0μl DNA模板。检测批内CV（变异系数）值为1．32％,批间CV值为1．96％;特异性较好;线性范围为10^2-10^8copies／μl。结论成功地建立了检测HCMV的FQ—PCR法,完全适用于临床检测。     

人巨细胞病毒的生物素DNA探针的制备和应用

本研究用克隆的HCMV AD169株DNA片段,制备了生物素标记的DNA探针,建立了检测临床脐带血、尿标本中HCMV DNA的核酸探针杂交方法。该探针可测出100pg同源DNA,不与人胚肺细胞、Hep-2细胞DNA以及其他疱疹病毒的DNA发生反应。用核酸杂交方法检测了30份脐带血标本,有11例阳性,阳性率为33％。10例孕妇尿标本中,3例阳性,阳性率为30％。检测结果表明：我们建立的生物素标记的HCMV DNA探针的点杂交法,具有高度的特异性、敏感性,比分离病毒法更迅速,可用于HCMV感染的临床标本的病毒核酸检测。     

EB、巨细胞病毒

<正>现在一般用测定血清抗体价的方法诊断EB病毒和巨细胞病毒(CMV)感染症,在诊断CMV时同时由尿分离病毒(接种于人胎肺细胞,由细胞病变判断)。在感染初期,IgM抗体的出现具有特异诊断价值,但在初期感染之后便100%的呈现潜伏状。由于免疫抑制等宿主方面的原因常见病毒的再活动化。90%以上的日本人感染该二病毒,由健康人的唾液分离出EBV、尿液分离出CMV也不罕见。在AIDS(艾兹病)、器官移植等高度免疫抑制时,常常出现伴随EBV、CMV活动化的重笃感染。DNA诊断的优点是迅速和判断客观,最近建立了多聚酶链反应法(PCR),使大幅增加检测敏感度成为可能。但是对于EBV、CMV这样的在健康人就存在的病原体,既使检测敏感度增加到能检出微量病毒DNA的程度,也很难判定是否果真是病原体。本文介绍DNA诊断的现状及未来。各种检测方法的实例描述于CMV项。     

人巨细胞病毒的分子生态学

近来我们不只一次的讨论过分子生态学,特别是病毒的分子生态学问题,并提出了病毒性疾病的发生,主要是由于有关的分子生态失调的论点。但都未涉及病毒微生态学或病毒分子生态学的基本含义。这里,有必要对之加以明确,然后才对人巨细胞病毒的分子生态学     

大蒜中抗人巨细胞病毒成份的筛选

临床试用大蒜制剂预防和治疗人巨细胞病毒感染取得了明显效果。在此基础上我们应用细胞病变(CPE)抑制试验和空斑抑制试验,对大蒜中的抗人巨细胞病毒成份进行了初步筛选和比较,证实新鲜大蒜中存在多种抗该病毒的有效成份,其中至少包括大蒜新素(二丙烯三硫)和Ajoene类似物。     

人巨细胞病毒抗原血症

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）抗原血症试验是近年来报道的一种早期,快速诊断活动性ＨＣＭＶ感染的新方法。本文就其方法学,敏感性与特异性及实用价值作一综述。     

人巨细胞病毒IgG 抗体标准品研究进展

人巨细胞病毒(CMV)是威胁人类健康的最重要病原之一。高CMV抗体效价的免疫球蛋白G(IgG)制剂,为临床医生在预防和治疗用药上提供了一个有价值的选择。而CMV免疫球蛋白标准品对于制品的CMV抗体效价测定以及高效价血浆的筛选都至关重要。该标准品对于器官移植/输血安全测试,以及临床诊断都是不可或缺。本综述提供了一种人巨细胞病毒IgG标准品制剂方法以及目前研究进展的概述。此外,本文还关注应用于不同领域的不同CMV IgG抗体效价单位。故本文为人巨细胞病毒免疫球蛋白的开发,人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂的标准化,以及为其质量控制提供参考。     

原位多聚酶链反应在人巨细胞病毒诊断中的应用

逝年来人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染率高,检测方法进展人,有巨细胞包涵体细胞（ＣＣＩＣ）检测、病毒分离、免疫检测、原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）等法。目前有人把ＩＳＨ与ＰＣＲ结合创立了原位多聚酶链反应法（ＩＳＰＣＲ）,此法更准确、更敏感特异,更有地ＨＣＭＶ感染的早期快速诊断。本文就ＩＳＰＣＲ的原理、程序、特征主临床应用作一综述。     

人巨细胞病毒疫苗研究进展

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HC-MV)是一类在自然界普遍存在的具有严格种属特异性的病毒,属β疱疹病毒亚科。Zsofia Gyulai等[1]对HCMV感染作了流行病学调查,发现体内抗病毒体液免疫反应主要针对gB;而细胞免疫反应主要针对pp65、pp150。根据HCMV感染的特点和机制,以上     

人巨细胞病毒检测技术研究进展

人巨细胞病毒（HCMV）严重危害人类生殖健康和优生优育。仅据临床表现不能对其进行确诊,生物技术的发展为早期、快速和准确检测,对及时治疗极为重要,文章从病毒形态学、免疫学以及分子生物学角度总结综述了HCMV检测技术的发展、应用及各自特点。     

巨细胞病毒早期抗原pp65和晚期抗原pp67-mRNA在移植术后活动性巨细胞病毒感染诊断中的价值

目的：通过对器官移植术后受者外周血中巨细胞病毒（CMV）早期抗原pp65和晚期抗原pp67-mRNA的监测,评价其对于诊断器官移植术后CMV感染、发病及预后的价值,为临床准确有效地分析理解检测结果提供依据。方法：收集28例器官移植受者EDTA抗凝外周血标本共120份,用免疫荧光技术（IFA）检测其中CMV早期抗原pp65;用核酸基础序列扩增法（NASBA）测定晚期CMVpp67-mRNA,绘制2组用于诊断CMV的受试者特征曲线（ROC曲线）,比较2组曲线下面积。结果1120份样本中,42份为CMVpp65阳性（≥1个阳性细胞／2×105白细胞）,23份为CMVpp67-mRNA阳性。28例器官移植受者中,9例CMVpp65和pp67-mRNA均为阳性（其中3例pp65和pp67-mRNA在同一时间为阳性）,8例pp65为阳性而pp67-mRNA为阴性,2例pp65为阴性而pp67-mRNA为阳性。临床诊断感染CMV的患者4例,在感染早期无临床症状病毒潜伏期间,受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）pp65为0．9542,pp67-mRNA为0．6611,即pp65检测的灵敏度和特异性高于pp67-mRNA;而在出现临床症状并治疗后期,pp65的AUC为0．8300,pp67-mRNA为0．9232,pp67-mRNA的灵敏度和特异性高于pp65。根据ROC曲线查得,以每2x105白细胞中有10个阳性细胞为诊断CMV活动性感染的最佳临界值。结论：AUC结果表明,pp65、pp67-mRNA均具有诊断意义。pp65检测更适于早期CMV活动性诊断,对于提示临床开始抗病毒治疗具有早期快速的意义;pp67-mRNA检测快速、结果准确,可作为结束抗病毒治疗的参考指标;两者联合检测用于监测CMV,对于辅助临床诊断有很好的价值。     

多重PCR同时检测人乳头瘤病毒、巨细胞病毒和沙眼衣原体

为了应用聚合酶链反应同时检测人巨细胞病毒（CMV）、人乳头瘤病毒（HPV）、沙眼衣原体（CT）,参照文献报道的基因序列,设计合成了三对能扩增370bp、450bp、510bp基因片段的引物,并对PCR扩增条件进行了优化。0.1fgHPV－DNA、CMV－DNA、CT－DNA即可被检出,得到了与设计片段相同的产物,且不扩增大肠杆菌、白色念球菌、解尿支原体等病原的核酸。对395例标本进行检查,各病原体的检出率分别是：HPV19.2%、CMV14.9%、CT5.1%。其中混合感染42例。PCR同时检测CMV、HPV、CT经济、快速、敏感、特异,可用于临床诊断和实验研究。     

实时荧光定量RT-PCR对胃癌组织中hMLH1 mRNA的检测及其临床意义

目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者的癌组织、40例癌旁胃炎组织及21例慢性胃炎患者的慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA进行定量检测,以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(hGAPDH)为内参照.结果:胃癌组织、癌旁胃炎组织、慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA的相对含量分别是7.23±1:11.91,3.80±5.13,2.01±1.25,三组相比差异有统计学意义(F=3.272,P=0.042),胃癌组织中hMLH1mRNA含量明显高于其他两组,癌旁胃炎组织中含量明显高于非胃癌惠者慢性胃炎组织中的含量(P＜0.05);除hMLH1 mRNA含量在有、无淋巴结转移的胃癌组织中有显著差异(P＜0.05)外,hMLH1 mRNA在胃癌组织中含量受肿瘤直径、浸润深度影响不大(P＞0.05).结论:胃癌组织和癌旁慢性胃炎组织与慢性胃炎组织相比存在hMLH1 mRNA转录差异,这种基因的转录差异可能与胃癌的发生有关,而与胃癌的发展关系不显著.     

单克隆抗体酶联免疫吸附法检测尿标本中人巨细胞病毒抗原

本文运用抗人巨细胞病毒(HCMV)包膜20KD或/和130KD结构蛋白的单克隆抗体分别建立了4类酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法,共对44人份临床尿标本进行HCMV抗原检测。方法的敏感度可高达10.3—32.8ng HCMV抗原/ml尿,与尿标本中的HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ和EBV抗原无交叉反应,重复性良好,与病毒分离比较,敏感性和特异性在71—83％和88—100％之间;与核酸杂交比较,敏感性和特异性也可分别高达60—100％和83.3—100％。混合使用多种单克隆抗体作为包被抗体会得到较好的技术参数。上述结果提示运用单克隆抗体ELISA将有助于一般临床实验室对HCMV感染的快速诊断。     

人类巨细胞病毒UL133基因在临床低传代株中的多态性研究

人类巨细胞病毒在多次传代后,会表现出不同的毒力水平.与临床低传代株Toledo相比,实验室高传代株AD169缺失了19个开放阅读框(ORF).这19个基因被认为是与HCMV致病性最可能相关的一组基因,研究这些基因的多态性对揭示HCMV致病性的遗传基础具有指导意义.UL133基因是这19个ORF中的一个.以临床低传代株Toledo和Merlin为对照,分析了23个临床病毒株UL133基因的遗传多态性.序列分析表明,UL133基因具有一定的多态性,Toledo株、Merlin株与我们分离到的临床株一起可分为3个基因型:G1、G2和G3.G2、G3型毒株均能导致先天性感染.没有发现UL133基因型与患儿临床疾病的必然关联.     

肝硬化患者血清胆碱酯酶和腺苷脱氨酶联合检测的临床意义

目的：探讨血清胆碱酯酶和腺苷脱氨酶联合检测在诊断肝硬化不同病程分期的临床意义。方法：选择20例失代偿期肝硬化患者分为失代偿组,随机选取20例代偿期肝硬化患者和20例健康人群分别分为代偿组和健康组,对3组人群的血清胆碱酯酶和腺苷脱氨酶活性进行检测并比较其差异。结果：代偿组和失代偿组的CHE活性均要显著低于健康组,差异有统计学意义（t=-8．34,P〈0．01、t=12．03,P〈0．01）,失代偿组要显著低于代偿组,差异有统计学意义（t=4.07,P〈0．01）;代偿组和失代偿组ADA活性均要显著高于健康组,差异有统计学意义（t=11．19,P〈0．01、t=-17．07,P〈0．01）,失代偿组要显著高于代偿组,差异有统计学意义（t=7．38,P〈0．01）。结论：血清胆碱酯酶和腺苷脱氨酶活性随着肝硬化病程发展发生显著变化,其联合检测可以为病程发展的临床诊断提供一定的依据。     

人巨细胞病毒IE1-72蛋白在胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)立刻早期基因1-72(IE1-72)蛋白在胶质瘤中的表达水平以及HCMV感染与胶质瘤发生的病因学关系。方法:采用免疫组化方法检测HCMV IE1-72蛋白在125例人脑胶质瘤组织及10例正常人脑组织中的表达,分析其表达水平与胶质瘤临床病理学特征的关系。结果:IE1-72蛋白在胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常人脑组织(P=0.000);IE1-72蛋白免疫染色强度随胶质瘤病理级别的升高而明显增强(r=0.310,P=0.000),其在高恶性度胶质瘤中的染色强度明显强于低恶性度胶质瘤(P=0.004);IE1-72蛋白染色强度与胶质瘤患者的年龄存在正相关(r=0.234,P=0.009),而与胶质瘤患者的性别(r=0.038,P=0.675)以及肿瘤部位(r=0.086,P=0.341)无明显相关性。结论:HCMV感染及其蛋白IE1-72表达可能与人脑胶质瘤的发生和发展密切相关,但其确切的致瘤机制尚需进一步研究。