一种简便、高效、经济的从凝胶中回收DNA的方法

目的:尝试一种简便、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:在Eppendorf管的管底用注射器扎孔,将一小团用Eppendorf管融化后拉成的细丝放入管中,把含有DNA的凝胶放在细丝上,离心,收集从管底流出的液体,经酚氯仿抽提后用乙醇沉淀DNA。结果:经过简单的离心即可近乎100%地回收凝胶中的DNA。结论:使用该方法从琼脂糖凝胶回收DNA,操作简单,回收率高,无其他试剂污染。     

Smooth Operator

<正>新一代Eppendorf TransferMan 4r显微操作系统操作界面友好的TransferMan 4r,操作合理、理念领先,非常适用于进行如胚胎或干细胞的操作。独特的DualSpeed~(TM)双速操作杆,可以选用两种不同的速度调控模式。预设的应用程序(如细胞移植、DNA注射等等)让这些特定应用的使用者操作过程更加简单,自设的应用程序"My app"及软键,应用更加广泛。可直接控制Eppendorf的压电破膜仪与电动显微注射仪。同所有显微镜品牌兼容。     

琼脂糖胶中DNA片段的离心回收

从琼脂糖电泳中抽提单条限制性酶解的DNA片段,往往是DNA重组克隆的关键步骤。目前常用的方法不外是电泳洗脱,低熔点胶抽提及酚冷冻萃取等几种。这些方法一般都要经过酚/氯仿抽提和沉淀浓缩等额外的纯化步骤,从而导致DNA得率降低。 现介绍一种快速简便的一步法,能有效地从琼脂糖胶带中分离所需DNA片段。其过程主要是:取一只Eppendorf管,用注射针头在底部穿一小孔,在管内填上2—3 mm厚的硅化玻璃毛,将该管套在另一只Eppendorf管上,就组成了一个二连系统,用高压蒸汽     

利用机油提高琼脂糖凝胶中DNA片段的回收率

目的:发展一种简单快速经济的回收琼脂糖凝胶中DNA的方法.方法:将切的琼脂糖凝胶胶块放入嵌套Eppendorf管中捣碎,加入50μL机油,室温下12 000r/min离心5min,取大Eppendorf管中收集的液体跑胶检验,凝皎上包括代表100bp～2000bp不同大小DNA分子回收率的分子量标准DL2000.结果:DNA回收率可由加机油前的约35%提高为加机油后的45%-90%,回收效率的波动主要取决于DNA片段的大小、切下的含有DNA的胶块的大小及操作者的熟练程度.结论:该方法快速、简便、经济,具有良好的重复性与特异性,比许多国产的试剂盒更可靠.     

Smooth Operator

<正>新一代Eppendorf TransferMan 4r显微操作系统操作界面友好的TransferMan 4r,操作合理、理念领先,非常适用于进行如胚胎或干细胞的操作。独特的DualSpeed~(TM)双速操作杆,可以选用两种不同的速度调控模式。预设的应用程序(如细胞移植、DNA注射等等)让这些特定应用的使用者操作过程更加简单,自设的应用程序"My app"及软键,应用更加广泛。     

一种适于营养胁迫研究的拟南芥水培方法

水培法可通过更换营养液来控制根际营养成分,成为植物营养学研究的最佳培养方式。由于根际通气和微生物滋生等问题,拟南芥(Arabidopsis thaliana)的水培技术始终无法被广泛应用。该文利用Eppendorf离心管管盖和离心管盒,将拟南芥种子在琼脂上萌发和植株水培有机结合,通过控制营养液用量和液体深度,增加营养液表面积,解决了水培过程中根系通气问题。利用离心管管盖作为支撑材料,降低了琼脂水分蒸发,并减少琼脂的用量和厚度,从而实现琼脂和营养液的快速平衡,为拟南芥培养和营养胁迫研究提供了一个简单且经济的水培方法。     

魔芋DNA快速微量提取及其ISSR-PCR扩增

魔芋属天南星科魔芋属草本植物,其组织富含多糖和多酚等次生物质,这类物质的存在不仅使DNA提取变得困难,还会影响下游的分子生物学操作.采用改进的提取方法,主要包括在2 mL Eppendorf离心管中液氮研磨,CTAB-SDS裂解细胞,β-巯基乙醇浓度从2%提高到5%和添加PVP抑制多酚氧化,缓冲液去多糖等步骤,成功的提取了魔芋鲜叶的高质量DNA,其A260/A280位于1.80～2.00之间,产率超过470 μg/g,ISSR-PCR扩增效果好.该方法具有快速、低廉、微量、稳定等特点,为深入研究魔芋资源遗传多样性、标记辅助育种和种芋纯度的鉴定奠定了基础.     

黑麦1R染色体的显微分离、体外扩增及扩增产物的鉴定

借助Leitz显微操作器,在国产倒置显微镜下(400×)用玻璃针对处于有丝分裂中期的黑麦根尖细胞中的1R染色体成功地进行了分离。分离出来的1R染色体转入0.5 ml的Eppendorf管中,用蛋白酶K处理,把DNA释放出来;经Sau3A酶切,再与人工合成的Sau3A连接头连接;以连接头的一条链的核苷酸顺序片段为引物对DNA酶切片段进行了PCR扩增。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度大约为300~1000 bp。以生物素分别标记的黑麦总体DNA和小麦rDNA为探针进行斑点杂交,结果表明PCR扩增产物确实来源于黑麦的1R染色体DNA。这个方法为构建黑麦1R染色体亚基因组文库和筛选1R染色体特异性探针奠定了基础。     

一种经济、简便和准确鉴定重组质粒的方法

目的：提高重组质粒的筛选效率,探讨一种经济、快速并准确的重组质粒鉴定方法。方法：取200μl菌液于Eppendorf管中高速离心1min,倒出上清,沉淀中加入20μl裂解缓冲液以裂解细胞并释放出内部质粒,10000r/min离心10min后取5～10μl上清液进行琼脂糖凝胶电泳,并比较其迁移位置来以判断重组质粒。结果：该方法鉴定结果和PCR鉴定结果完全一致。结论：该方法具有成本低廉、简便快速的特点,在对大量样品进行鉴定时具明显优势,适合在常规实验室推广。     

实验11 哺乳类基因组基因文库的构建

一、哺乳类DNA部分酶切片段的回收 1.选定所用的限制性内切酶。将待酶切的哺乳类细胞DNA分别装入6—10个Eppendorf离心管。 2.将限制性内切酶加入装有DNA的离心管。酶量逐级递减,例如1单位/微克DNA,0.5单位/微克DNA,……,37℃保温3—5小时。 3.或将相同的酶量加入装有DNA的离心管,37℃保温。经不同时间终止酶切反应。例如,保温10分钟,20分钟……。     

一种体外分析亚洲玉米螟幼虫血细胞包囊的改进方法

包囊反应是昆虫清除侵入体内的外源物如病原物和寄生生物的一种非常重要的细胞免疫反应。由于受到不便于观察、操作复杂等问题的限制,很多包囊分析实验无法或难于在昆虫体内完成。体外包囊方法在一定程度上解决了这些问题。目前常用的体外包囊是在96孔板中加入昆虫血细胞和外源物,如凝胶珠进行培养观察,但这种方法存在着一些明显的缺陷。本文以亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫血细胞为研究对象,使用0.2mL的离心管(Eppendorf tube)代替96孔板,并将其固定在匀速旋转的载体上培养,极大程度的模拟了反应物在昆虫体内的状态。结果表明,改进方法后昆虫血细胞的体外包囊效果得到明显提高,且血细胞的状态也得到明显改善;而添加抗凝剂会减弱血细胞对外源物的包囊能力。     

LanzaTech公司扩大合作以开发气体发酵技术

2014年5月13日,美国LanzaTech公司宣布,与美国INVISTA公司签订了集中开发以二氧化碳和氢气为原料生产工业化学品的气体发酵技术的研发合同。根据合同,利用INVISTA公司自主研发的宿主和代谢途径,INVISTA公司和LanzaTech公司共同完成开发项目。该技术预计最早2018年可以实现首次商业化。     

水仙单染色体特异文库的构建

采用玻璃针分离法,通过显微操作系统成功地分离到一个多花水仙(N arcissus tazetta L.,2n=22)品种的中着丝粒单染色体,将分离到的单染色体放入0.2 mL Eppendorf管中,经去蛋白、S au3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上S au3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3.0 kb之间的DNA片段.用水仙基因组DNA标记作探针,与扩增产物进行Sou thern杂交,从而证明单染色体DNA确实已被成功地扩增.将第二轮PCR产物构建质粒文库,随机挑取90个重组子进行分析,发现插入片段主要在600~2 500 bp之间.     

一种体外分析亚洲玉米螟幼虫血细胞包囊的改进方法

包囊反应是昆虫清除侵入体内的外源物如病原物和寄生生物的一种非常重要的细胞免疫反应。由于受到不便于观察、操作复杂等问题的限制，很多包囊分析实验无法或难于在昆虫体内完成。体外包囊方法在一定程度上解决了这些问题。目前常用的体外包囊是在96孔板中加入昆虫血细胞和外源物，如凝胶珠进行培养观察，但这种方法存在着一些明显的缺陷。本文以亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）幼虫血细胞为研究对象，使用0.2 mL的离心管（Eppendorf tube）代替96孔板，并将其固定在匀速旋转的载体上培养，极大程度的模拟了反应物在昆虫体内的状态。结果表明，改进方法后昆虫血细胞的体外包囊效果得到明显提高，且血细胞的状态也得到明显改善；而添加抗凝剂会减弱血细胞对外源物的包囊能力。     

Evogene公司完成改良型蓖麻种子的3年期大田试验进入商业化

2013年9月16日,以色列Evogene公司宣布,其全资子公司Evofuel公司为了开发蓖麻种子用作生产生物柴油和其他工业用途的替代原料,成功完成了在巴西进行的为期3年的大田试验。Evofuel公司预计2016年实现蓖麻种子的商业化。     

POET与Agrivida开展合作旨在降低纤维素类乙醇生产成本

美国POET公司2012年8月21日宣布,其全资子公司POETResearch公司与美国Agrivida公司签订了共同开发合同,确立了技术协作关系。两家公司在今后的4年内将发展Agrivida公司的技术平台,大幅度降低纤维素乙醇商业生产设施的资本成本和运营经费。Agrivida公司是一个从事开发原料农作物品种改良技术和原料处理技术平台的企业。     

Amgen公司的EPO仍独占美国市场

美国食品与药物管理局(FDA)没有批准美国Genetics Institute公司要求在美国市场销售EPO(促红细胞生成素)的申请.这样,美国Amgen公司的EPO得以作为“独家药”在美国销售.申请是1989年和1990年(2次)由GI公司和美国Chugai-Upjohn公司提出的.理由是使用Amgen公司的EPO的患者数超过了约20万人,以及Amgen公司申请的适应范围和FDA认可的适应范围不一致等,还有诉说Amgen公司1983年获独家药认可是不妥当的.     

美国两能源公司合并 打造世界级规模的乙醇生产企业

2007年11月．美国VeraSun Energy公司和美国US BioEnergy公司宣布两家公司最终达成了合并协议。这个合并案在两家公司的董事会上获得了一致通过,接下来只剩下股东的认可、确认有无违反垄断法以及通常的手续。     

生物工程药用蛋白的开发现状

运用遗传工程细菌生产人胰岛素是1978年第一次克隆成功的,1980年笫一次进入临床实验阶段,而1982年首先获准投入市场销售的则是在英国。接着其他国家生物工程公司也相继成功地获得了重组型人胰岛素,主要生产厂家是美国Lilly公司、Genentech公司,丹麦Novo公司和爱尔兰Nordisk Gentofle公司。目前全世界约300万糖尿病患者,按每天注射2-4针计算,那么总的市场销售额就是一个十分可观的数字。     

藻类生物燃料的能量收支比生产成本门槛更高

2012年11月7日,IHI NeoG Algae公司召开了在横滨事务所的生物燃料事业培养实验装置参观学习会。该公司是NeoMorgan（NML）研究所和神户大学创立的风险公司G＆GT为了从事藻类生物燃料研发,于2011年8月共同创办的。在参观学习会上,IHI新事业推进部生物产业项目小组的成清勉部长、兼任IHINeoGAlgae董事的NML研究所的藤田朋宏社长和G＆GT公司的梗裕子代表董事做了讲解和说明。