高频度微卫星不稳定性大肠癌“修饰型”微卫星变化与MLH1及KRAS基因突变密切相关

本研究通过方法学的改良和观察方式的创新试图阐明这种现象的原因。微卫星非传统的检测方法仅能实现微卫星定性检测,我所在的研究组开发了自动片段分析双荧光标识技术,提高了微卫星检测的感度和重复性。并实现了微卫星片段变化长度的定量。小于6碱基的微卫星变化被定义为修饰型微卫星不稳定,大于8碱基的变化被定义为跳跃型微卫星不稳定．它们的电泳谱截然不同。前者表现为在非肿瘤来源微卫星位点基础上的增加或减少,后者表现为距离非肿瘤微卫星片段远隔部位的新波形的出现。通过研究我们发现,在DNA错配修复缺陷细胞系及基因敲除大鼠自发肿瘤样本,仅有修饰型微卫星不稳定性检出;在人类DNA错配修复缺陷细胞系连续80次传代也没有检出跳跃型变化。跳跃型变化不能通过简单重复序列不稳定基础上的增加或减少的累加而获得。在76例散发大肠癌,我们检测了微卫星不稳定性,KRAS基因突变,并对高频度微卫星不稳定性病例的两个主要DNA错配修复基因MSH2和MLH1进行了全长测序。我们发现,在大肠癌,按频度的传统分类与按波形变化的分类有高度的一致性,高频度微卫星不稳定性病例均检测到跳跃型表现,低频度微卫星不稳定性都表现为修饰型变化。在12例高频度微卫星不稳定病例,有三例检出了跳跃型和修饰型同时存在微卫星不稳定的特殊表型,这3例均检出KRAS的突变,更有趣的是该3例病例也同时检出了DNA错配修复基因MLH1的变异。而在其他9例高频度微卫星不稳定病例,KRAS突变及MLH1、MSH2突变未检出。通过对突变谱的分析我们还发现,修饰型微卫星不稳定与KRAS基因12号密码子的转换型突变高度相关,而微卫星稳定的病例检出的KRAS基因12号密码子突变多为颠换型突变。修饰型微卫星不稳定表型检出的高频度转换?     

高频度微卫星不稳定性大肠癌"修饰型"微卫星变化与MLH1及KRAS基因突变密切相关

本研究通过方法学的改良和观察方式的创新试图阐明这种现象的原因.微卫星非传统的检测方法仅能实现微卫星定性检测,我所在的研究组开发了自动片段分析双荧光标识技术,提高了微卫星检测的感度和重复性,并实现了微卫星片段变化长度的定量.小于6碱基的微卫星变化被定义为修饰型微卫星不稳定,大于8碱基的变化被定义为跳跃型微卫星不稳定,它们的电泳谱截然不同.前者表现为在非肿瘤来源微卫星位点基础上的增加或减少,后者表现为距离非肿瘤微卫星片段远隔部位的新波形的出现.通过研究我们发现,在DNA错配修复缺陷细胞系及基因敲除大鼠自发肿瘤样本,仅有修饰型微卫星不稳定性检出;在人类DNA错配修复缺陷细胞系连续80次传代也没有检出跳跃型变化.跳跃型变化不能通过简单重复序列不稳定基础上的增加或减少的累加而获得.在76例散发大肠癌,我们检测了微卫星不稳定性,KRAS基因突变,并对高频度微卫星不稳定性病例的两个主要DNA错配修复基因MSH2和MLHl进行了全长测序.我们发现,在大肠癌,按频度的传统分类与按波形变化的分类有高度的一致性,高频度微卫星不稳定性病例均检测到跳跃型表现,低频度微卫星不稳定性都表现为修饰型变化.在12例高频度微卫星不稳定病例,有三例检出了跳跃型和修饰型同时存在微卫星不稳定的特殊表型,这3例均检出KRAS的突变,更有趣的是该3例病例也同时检出了DNA错配修复基因MLH1的变异.而在其他9例高频度微卫星不稳定病例,KRAS突变及MLH1、MSH2交变未检出.通过对突变谱的分析我们还发现,修饰型微卫星不稳定与KTAS基因12号密码子的转换型突变高度相关,而微卫星稳定的病例检出的KRAS基因12号密码子突变多为颠换型突变.修饰型微卫星不稳定表型检出的高频度转换突变可由DNA错配修复缺陷的分子背景解释.通过本研究,我们认为以波形为基础的微卫星不稳定新分型可能是解决目前微卫星研究领域矛盾的一个选项.一直公认为高频度微卫星不稳定性是"真正"的DNA错配修复缺陷表型,我们的研究提示实际上高频度微卫星的可能是多元的.修饰型微卫星不稳定与DNA错配修复缺陷直接关联,而跳跃型微卫星不稳定的原因尚未阐明.在高频度为微型不稳定中,携带修饰型变化的病例可以通过DNA错配修复系统缺陷来解释其病因.     

高秆突变体Mh-11的株高遗传研究

Mh-11是从矮秆品种桂朝2号辐射诱变后代中产生的高秆突变体.用Mh-11与sd-11矮秆、非sd-11矮秆和普通高秆材料杂交,通过对F1、F2、F3 等世代以及测交后代的株高进行遗传分析,结果表明Mh-11的高秆特性是由1对隐性抑制基因控制的.该抑制基因能调节sd-11基因的表达,而对由非sd-11基因控制的矮秆没有抑制作用,这一隐性抑制基因暂时被定名为i-sd-11(t).还讨论了该基因的遗传学意义和可能的育种利用价值.     

应用RFLP标记分析水稻株高与分蘖的遗传相关性

供试材料为高杆少分蘖梗稻品种Palawan与半矮杆籼稻品种IR42杂交F₂代.F₂株高与分蘖数呈正态分布.株高与分蘖数呈显著(P<0.01)负相关.104个分布于12条染色体的RFLP标记基因型之间表型平均值正交比较和分子标记区间作图分析结果表明,染色体1半矮杆基因位点sd-1附近有隐性加性效应,部分显性效应,和超显性效应的株高数量性状位点(QTLs).与其连锁的分子标记顺序为RG690-RZ730-RG381-RG801.另一个影响株高的显性加性QTL位于染色体2RZ166-RG157之间.影响分蘖数两个加性显性QTLs位于染色体4RG91-RZ656之间和染色体12RG457-RG241A之间.RG801与RG264(染色体6)位点之间具有显著(P<0.001)的加显与显加交互效应.     

新疆食管癌中Myc、TP53表达及其与临床病理因素相关性研究

目的:检测Myc和TP53在食管癌组织和远端无癌组织的表达情况,并分析其与临床病理因素之间的关系,初步探讨Myc和TP53在新疆食管癌发生发展中可能存在的特点。方法:经Trizol一步法提取88例新疆地区食管癌组织及其远端无癌组织标本总RNA,m RNA逆转录为c DNA,经聚合酶链式反应生成产物,运用光密度值即半定量RT-PCR技术检测88例新疆地区食管癌组织、远端无癌组织中Myc和TP53的m RNA表达情况及二者阳性表达率,并分析Myc和TP53的表达与临床病理因素之间的相关性。结果:1 Myc的m RNA相对表达量在食管癌组织中高于远端无癌组织,差异有显著性(P0.01);TP53的m RNA相对表达量在远端无癌组织中高于癌组织(P0.05);2 Myc的阳性表达率在88例食管癌组织中高于远端无癌组织(P0.05);TP53的阳性表达率在远端无癌组织中高于癌组织(P0.05);3Myc的表达与分化程度(P0.01)、TNM分期(P0.01)、淋巴结转移(P0.05)、侵犯深度(P0.05)和族别(P0.05)有关,与性别无关;TP53的表达与侵犯程度(P0.01)有关,与性别、分化程度、TNM分期、淋巴结转移和族别均无关;4 88例食管癌组织中,Myc和TP53的表达呈现负相关(r=-0.501,P0.0 1)。结论:Myc在新疆地区食管癌组织中表达上调,TP53则表达减弱。说明Myc参与食管癌的发生和发展,而TP53则可能保护正常组织不发生癌变。     

用RAPD技术探讨冬青属苦丁茶的遗传差异、亲缘关系与分类地位

利用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对 2 2份冬青属苦丁茶不同种质材料的遗传变异进行了研究。 4 0个 10 bp的引物用于多态性检测 ,从中筛选出了 2 7个多态性良好的引物。用该 2 7个引物对上述 2 2份种质材料进行PCR扩增 ,共得到 4 45条DNA谱带 ,其中多态性带4 32条 ,占 97 0 8%。根据扩增结果计算了各份材料之间的遗传距离 ,并用UPGMA构建了聚类树状图。分析结果表明 :2 2份供试材料分成 4类 5组 ,第Ⅰ类为Ilexpentagona (分为A、B两组 :A组为新变种var mashanensisG .M .L .;B组为原变种var pentagona) ,第Ⅱ类为I kudingcha,第Ⅲ类为I latifolia ,第Ⅳ类为I cornuta ;第Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ三类各有一组材料组成。物种的差异、亲缘关系以及同一物种内不同种质材料在起源地域上的差异均可从系统树中反映出来。RAPD分子标记的结果可作为判断冬青属苦丁茶种质资源材料的起源地域、遗传差异、亲缘关系以及种级水平和种下分类鉴定的重要参考依据     

脑胶质瘤中P53基因突变及其与染色体17p杂合性丢失的比较

为进一步阐明P53基因突变和染色体17p杂合性丢失(LOH)的关系及两者与脑胶质瘤发生发展的相关性。应用PCR－SSCP、DNA序列测定及RFLP分析方法对55例脑胶质瘤中的P53基因突变及染色体17p的杂合性丢失进行了检测。发现P53基因在高级别星型细胞肿瘤(III－IV级)、低级别星型细胞肿瘤(I－II级)和非星型细胞肿瘤中的突变频率分别为：53％(9/17)、7％(1/15)和9％(2/23)。而55例肿瘤组织对应的淋巴细胞中未见P53突变。22％的胶质瘤丢失1个17p等位基因,这部分肿瘤中P53基因的突变频率为50％(6/12),而在43例持有2个17p等位基因的肿瘤中,P53基因的突变频率降为14％,两组相比差异显著(P<0?025)。结果提示P53基因突变是星型细胞肿瘤演变过程中的一个常见遗传事件,可能标志着肿瘤的恶性进展;散发性脑胶质瘤中的P53突变是体细胞型的突变;另外,丢失1个17p等位基因的肿瘤中有50％缺少P53基因突变,提示染色体17p上可能存在另一个参与了部分肿瘤恶性演变的肿瘤抑制基因。 Abstract：To further illustrate the roles of P53 gene and loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 17p in the development of malignant gliomas,mutations in the P53 gene were analyzed in 55 gliomas of various malignant grades and histological types by the polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) technique and were confirmed by sequencing.Loss of heterozygosity (LOH) for chromosome 17p was also assessed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis in same tumors.The mutations did not follow a random distribution among various different subtypes,but occurred in 9 of 17 high-grade astrocytomas (53％),in 1 of 15 low-grade astrocytomas (7％) and in 2of 23 (9％) non-astrocytic tumors.Most of the mutations were missense ones and 42％ (5/12) occurred at the sites of CpG dinucleotide.P53 mutations were not detected in any of the 55 leukocyte DNA samples from patients with brain tumors.These studies demonstrated that P53 inactivation is a common genetic event in astrocytoma progression that may signal the transition from benign to malignant tumor stages.P53 gene mutations in sporadic human brain tumors are somatic in origin (i.e.,nonprenatally determined).The majority of glomas (43/55) analyzed here retained both 17p alleles.The frequency of P53 mutations was 14％ in this group of tumors and increased to 50％ (6/12) in tumors with one 17p allele (P<0.025).Allelic loss for chromosome 17p occurred in 6 of 12 gliomas independently of mutations in the P53 gene.Absence of P53 mutations in 50％ of the tumors with one allele suggests that a tumor suppressor gene other than P53 may be located on chromosome 17p and involved in progression to malignancy of some gliomas.     

锁定型gamma钉与普通型gamma钉、动力髋螺钉治疗不稳定性股骨粗隆间骨折的 临床疗效比较

目的:比较锁定型γ钉(Locking Gamma Nail,LGN)、普通型γ钉(Traditional Gamma Nail,TGN)和动力髋螺钉(Dynamic Hip Screw,DHS)治疗不稳定性股骨粗隆间骨折的临床疗效和安全性。方法:选择2009年1月至2011年1月在我院分别接受锁定型γ钉(A组)、普通型γ钉(B组)和动力髋(C组)内固定治疗的随访资料完整的患者共92例。记录和比较三组患者的手术时间、术中出血量、骨折愈合时间及末次髋关节功能评分等相关数据。结果:A组、B组和C组的手术时间、术中出血比较有统计学差异(均P<0.01),但A、B组之间无明显统计学差异;A组和B组、C组的骨折愈合时间、髋关节功能评分比较差异均有统计学意义(均P<0.01),B、C组之间无明显统计学意义。结论:LGN的固定效果和生物力学性能良好,操作简便,固定牢固,整体治疗效果优于TGN和DHS,可作为临床治疗不稳定性股骨粗隆间骨折的首选。     

儿童ITP与婴儿ITP的临床特点差异以及疗效比较

目的：探讨儿童ITP与婴儿ITP的临床特点差异以及疗效比较。方法：对我院收治的301例儿童ITP根据年龄分为儿童组以及婴儿组,并对两组患儿的临床特点以及临床疗效进行比较。结果：两组患儿在性别、发病季节、临床表现以及严重程度均有明显的差异性（P〈0.05）;两组患儿在血红蛋白值、中性粒细胞计数、中性粒细胞百分比、CD3＋,CD8＋、以及淋巴细胞计数等比较均具有统计学差异性（P〈0.05）。两组患儿治疗有效率的比较,婴儿组患儿其治疗疗效明显优于儿童组（P〈0.05）。结论：婴儿ITP其临床表现多为男性多发,有明显的诱因,而且其具有症状轻、疗效好等特点。     

人教版、北师大版生物学教材中“生物的遗传和变异”的比较和分析

以“生物的遗传和变异”为例,比较和分析了人教版与北师大版初中生物学教材在章节与课时安排、特有内容、编写体例、内容的呈现方式和习题特点等方面各自的特点和优势,为读者选择不同教材备课时提供一些参考。     

结直肠癌组织AGR2、MFAP2蛋白表达与临床病理特征和预后的关系研究

摘要 目的：研究结直肠癌（CRC）组织前梯度蛋白2（AGR2）、微纤维相关蛋白2（MFAP2）蛋白表达与临床病理特征和预后的关系。方法：将我院从2015年1月～2016年2月收治的84例CRC患者纳入研究。分别采集所有患者的CRC组织以及癌旁正常组织（距离肿瘤边缘2~5 cm）,检测并比较不同组织中AGR2、MFAP2蛋白表达情况。分析AGR2、MFAP2蛋白表达与CRC患者临床病理特征以及预后的关系。采用Cox回归模型分析CRC患者预后的影响因素。结果：CRC组织中AGR2、MFAP2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织（P＜0.05）。分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ期及脉管浸润的CRC患者的AGR2、MFAP2蛋白阳性表达率均高于分化程度为中高分化、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无脉管浸润的CRC患者（P＜0.05）。AGR2、MFAP2蛋白阳性表达患者的3年生存率及5年生存率均明显低于阴性表达患者（P＜0.05）。经Cox回归模型分析发现：分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ期、脉管浸润以及AGR2、MFAP2蛋白阳性表达均是CRC患者死亡的危险因素（P＜0.05）。结论：CRC组织中AGR2、MFAP2蛋白阳性表达率升高,且和患者分化程度、TNM分期、脉管浸润有关,检测其表达情况有助于预测CRC患者预后。     

KRAS and DAXX/ATRX Gene Mutations Are Correlated with the Clinicopathological Features,Advanced Diseases,and Poor Prognosis in Chinese Patients with Pancreatic Neuroendocrine Tumors

Background and Aim: Pancreatic neuroendocrine tumor (pNET) is a clinically rare and heterogeneous group of tumors; its pharmacogenetic characteristics are not fully understood. This study was designed to examine the relationship between key gene variations and disease development and prognosis among Chinese patients with pNET.Methods: Various pNET associated genes such as DAXX/ATRX, KRAS, MEN1, PTEN, TSC2, SMAD4/DPC, TP53 and VHL were analyzed in high-throughput sequencing. The links between the gene mutations and the clinicopathological features and prognosis of the patients were determined.Results: The somatic mutation frequencies of the DAXX/ATRX, KRAS, MEN1, mTOR pathway genes (PTEN and TSC2), SMAD4/DPC, TP53, and VHL in Chinese pNET patients were 54.05%, 10.81%, 35.14%, 54.05%, 2.70%, 13.51%, and 40.54%, respectively, while the same figures in Caucasians pNET patients were 43%, 0%, 44%, 15%, 0%, 3%, and 0%, respectively. The numbers of mutated genes were from 0 to 6; 4 patients with more than 3 mutated genes had higher proliferation (Ki-67) index or nerve vascular invasion or organ involvement, but only 9 of 27 patients with 3 or few mutated genes had such features. Mutations in KRAS and DAXX/ATRX, but not other genes analyzed, were associated with a shortened survival.Conclusion: The mutation rates of these genes in Chinese pNET patients are different from those in Caucasians. A higher number of gene mutations and the DAXX/ATRX and KRAS gene mutations are correlated with a poor prognosis of patients with pNET.     

甲状腺乳头状癌组织微小RNA-93-5p、微小RNA-98-5p表达与临床病理特征和增殖、侵袭基因表达的关系研究

摘要 目的：研究甲状腺乳头状癌（PTC）组织微小核糖核酸-93-5p（miR-93-5p）、微小RNA-98-5p（miR-98-5p）表达与临床病理特征和增殖、侵袭基因表达的关系。方法：选取2020年10月到2023年10月在广东省中医院行手术切除的PTC患者153例作为研究对象,收集术中切除的癌组织以及癌旁组织。检测并比较癌组织与癌旁组织miR-93-5p、miR-98-5p及增殖基因、侵袭基因mRNA表达水平,分析miR-93-5p及miR-98-5p表达与PTC患者临床病理特征的关系。利用Pearson法分析miR-93-5p、miR-98-5p表达水平与增殖基因、侵袭基因mRNA表达的相关性。结果：癌组织的miR-93-5p表达水平较癌旁组织更高,miR-98-5p表达水平较癌旁组织更低（P<0.05）。miR-93-5p高表达PTC患者TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及低分化的比例较miR-93-5p低表达PTC患者更高（P<0.05）。miR-98-5p低表达PTC患者TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及低分化的比例较miR-98-5p高表达PTC患者更高（P<0.05）。癌组织的增殖基因程序性细胞死亡因子4（PDCD4）及蛋白磷酸酶4调节亚基 （PP4R1）水平较癌旁组织更低（P<0.05）,侵袭基因金属蛋白酶解离素9（ADAM9）及Bcl-6共抑制因子样蛋白（BCORL1）水平较癌旁组织更高（P<0.05）。Pearson法分析结果显示,miR-93-5p表达与增殖基因PDCD4及PP4R1表达水平呈负相关,与侵袭基因ADAM9及BCORL1表达水平呈正相关。miR-98-5p表达水平与增殖基因PDCD4及PP4R1水平呈正相关,与侵袭基因ADAM9及BCORL1表达水平呈负相关。结论：PTC患者癌组织miR-93-5p表达升高,miR-98-5p表达降低,与TNM分期、淋巴结转移及分化程度等临床病理特征有关,还可促进PTC癌细胞增殖、侵袭。