浙江省热原检查用兔敏感性状况调查

目的调查浙江省热原检查用兔对细菌内毒素的敏感性情况,为提高热原检查结果的准确性和可靠性提供参考。方法对全省所有取得生产许可证单位的家兔,用国家颁发的细菌内毒素标准品,＂热原检查法＂进行检查,剂量分别为5EU/Kg和10EU/Kg,记录并比较各单位家兔的平均升温值和升温率。结果对细菌内毒素,各兔场家兔的敏感性有一定的差异。静脉注射5EU/kg,平均升温值为0.40℃～0.87℃,升温率为35%～83%;静脉注射10EU/kg,平均升温值为0.74℃～1.16℃,升温率为70%～94%。结论不同生产单位的家兔对细菌内毒素的敏感性不同,有必要对热原检查用家兔进行细菌内毒素敏感性检查。     

不同基础体温的家兔对热原检查结果的影响

对实验中使用的普通级家兔基础体温进行统计,观察不同基础体温家兔注射血液制品后的升温情况。按照中华人民共和国药典(2005)年版三部的热原检查规定进行测定,将实验家兔基础体温38.0℃~39.6℃分为3组:38.0℃~38.5℃为1组;38.6℃~39.0℃为2组;39.1℃~39.6℃为3组。注射制品后,家兔升温≥0.4℃记为升温家兔,统计升温≥0.4℃的家兔升温百分率并对其进行统计学处理。经卡方检验,升温家兔≥0.4℃的百分率1组与2组、1组与3组有显著性差异(p<0.05);2组与3组无显著性差异(p>0.05)。家兔对热原的敏感性随基础体温的高低而有明显的差异,基础体温偏低的家兔对热原更敏感,其升温幅度大于基础体温偏高的家兔。     

内毒素与基因工程产品

内毒素与基因工程产品于德强（深圳科兴生物制品有限公司,深圳５１８０５７）张岚（深圳通海生物工程投资股份有限公司,深圳５１８０５２）随着现代生物技术的发展,基因工程技术广泛用于生产生物新药。在实际生产中,如何保证生物新药热原安全是制造商普遍关注的问题。...     

下游层析工艺中热原的去除

各国药审部门对于生物药品中热原物质的含量都有严格要求。较主要的热原是内毒素。由于内毒素性质极不均一 ,给除热原的工作带来不少挑战。通过分析内毒素在不同环境下的化学、物理性质 ,对于如何在下游层析工艺中去除热原 ,提出了多种方法和建议。     

腺相关病毒载体基因治疗的研究进展

腺相关病毒 (ＡＡＶ)属于病毒中最小、也是最简单的一种———细小病毒属 ,它是一种有缺陷的非致病性的人类细小病毒 ,重组的腺相关病毒 (ｒＡＡＶ)作为基因治疗的载体 ,对长期基因矫正和基因治疗具有优越性。新的生产工艺提高了ｒＡＡＶ的滴度 ,去除了腺病毒的污染 ,并构建了适用于不同靶细胞的可诱导载体。这些改进有望加速进一步的动物实验研究 ,使临床治疗人类疾病早日成为可能。1 .ｒＡＡＶ的制备方法在 1 989年 ,首次产生了没有野生型ＡＡＶ帮助复制的重组的ＡＡＶ ,这以后 ,为了增加病毒颗粒数 ,人们制造了许多ＡＡＶ辅助质粒 ,其中…     

线粒体DNA突变相关疾病的基因治疗

mtDNA是动物细胞染色体外唯一存在的遗传物质,mtDNA突变相关疾病正越来越为人们所认识,但目前尚无有效的治疗手段。应用亲脂质阳离子,构建靶向线粒体PNA,转线粒体移植手段。以及构建mtDNA样质粒,都可能是今后的研究方向。     

显色基质鲎试剂法在人血白蛋白热原检测中的应用

为了对显色基质法测定人血白蛋白中的内毒素含量方法进行探讨。以内毒素,鲎试剂及显色基质,在一定的条件下反应释放出对硝基苯胺(PNA),溶液呈现黄色,于波长545nm处比色读数,其产色深浅与内毒素浓度呈线性关系,从而定量测定出检品中内毒素含量。结果表明标准曲线的线性相关系数r≥0.98,人血白蛋白经3.3倍稀释后无干扰作用。显色基质法与家兔法比较,有灵敏、快速、能定量、重复性好的特点,可用于人血白蛋白内毒素含量的测定。     

基因治疗产品的开发现状与挑战

基因治疗是将外源性遗传物质通过多种方法转移到靶细胞中,用来治疗特定疾病。基因治疗对某些单基因遗传病有一次治愈的可能,或将成为未来治疗人类疾病的重要手段。但基因治疗仍存在诸多挑战,如长期的安全性和疗效数据、可及性以及监管等。从基因治疗的基本概念和历史出发,结合基因治疗产品的开发现状和未来,进行讨论。     

基因治疗产品的开发现状与挑战

基因治疗是将外源性遗传物质通过多种方法转移到靶细胞中,用来治疗特定疾病。基因治疗对某些单基因遗传病有一次治愈的可能,或将成为未来治疗人类疾病的重要手段。但基因治疗仍存在诸多挑战,如长期的安全性和疗效数据、可及性以及监管等。从基因治疗的基本概念和历史出发,结合基因治疗产品的开发现状和未来,进行讨论。     

腺相关病毒载体与中枢神经系统的基因治疗

本文对ＡＡＶ的分子生物学结构,重组和其对细胞的整合及ｒＡＡＶ载体在基因治疗中的作用,尤其是ｒＡＡ载体在中枢神经系统疾病基因方面的最新应用作了较全面阐述。     

重组腺相关病毒：很有潜力的基因治疗载体

腺相关病毒(AAV)是细小病毒家族的一员,为无包膜的线性单链DNA病毒.由于AAV具有长期潜伏于人体而不具有任何明显致病性等优点,人们对AAV作为一种理想的基因治疗载体给予了很大期望.但是,近来发现,这类载体在应用上有许多明显的缺陷,包括某些细胞膜上病毒受体数量极少,重组AAV载体位点特异性整合不足,AAV衣壳成分和转基因产物引起宿主的免疫反应等等.这些缺陷促使人们加大对AAV生物学特性和转染过程的研究,从而更好地对AAV载体进行改进,使新一代重组AAV载体具备基因治疗所必需的安全性、高效性和靶向性,以期更广泛地应用于临床.     

错位双链核糖核酸的热原反应

由于错位dsRNA的毒副作用得到降低,因此是一类很有潜力的抗病毒、抗肿瘤物质。研究中利用家兔实验评价了PolyI:C和PolyI:C12U引起的热原反应。在10mgml、1mgml、005mgml剂量水平PolyI:C12U均未产生发热和其他毒副作用,而PolyI:C实验组均有发热现象,甚至有家兔死亡。     

影响家兔热原检查结果的因素分析

目的统计实验数据,分析影响家兔热原检查结果的因素。方法将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况。结果基础体温≥38.9℃的家兔,其升温≥0.4℃及≥0.6℃的百分比与基础体温<38.9℃家兔相比具有显著性差异(P<0.05),且不同季节家兔升温≥0.4℃的家兔数百分比具有显著性差异(P<0.05),夏秋两季所占百分数高于冬春两季,夏季(6～8月)家兔基础体温较高。结论不同基础体温家兔对热原敏感程度不同,敏感性随家兔基础体温的升高而下降,为保证热原试验结果的准确性,夏季应适当提前热原质检查时间。     

肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血浆降钙素原升高的影响

目的 探讨肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭（hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF）患者血浆降钙素原（procalcitonin,PCT）水平升高的影响。方法 检测29例HBV-ACLF（肝衰组）、14例慢性乙型肝炎（乙肝组）患者入院时的血浆PCT、内毒素（endotoxin,LPS）水平,收集患者新鲜尾便并通过高通量测序检测肠道菌群状况,统计分析两组患者间肠道菌群、B/E值、PCT和LPS水平的差异,以及肝衰组患者PCT、LPS、B/E值三者间的相关性。结果 与乙肝组患者比较,肝衰组厚壁菌门、放线菌门、双歧杆菌属、乳杆菌属等肠道菌群显著减少,而拟杆菌门、变形菌门、埃希菌属等肠道菌群过度生长,两组患者间各菌群比较差异均具有统计学意义（t=-4.84,Z=-2.84,Z=-2.57,Z=-4.39,t=3.59,t=2.64,t=2.19,P＜0.01、＜0.01、=0.01、＜0.01、＜0.01、=0.01、=0.04）;肝衰组PCT[0.50（0.96）]ng/mL、LPS（0.46±0.10）EU/mL、B/E值（0.04±0.01）,乙肝组PCT（0.08±0.02）ng/mL、LPS（0.05±0.02）EU/mL、B/E值（1.62±0.31）,各指标两组间比较差异均具有统计学意义（Z=-3.17,t=5.88,t=16.18,P＜0.01、0.01、0.01）;肝衰组B/E值与LPS水平呈负相关关系（r=‒0.81,P＜0.01）,B/E值与PCT水平呈负相关关系（r=‒0.79,P＜0.01）,且PCT水平与LPS呈正相关关系（r=0.76,P＜0.01）。结论 HBV-ACLF患者肠道菌群失衡导致肠源性LPS生成增多,而肠源性LPS促使PCT产生增多。     

实验兔脚皮炎与相对湿度的相关性及对热原筛选实验的影响分析

目的分析实验兔脚皮炎发病率与相对湿度的相关性及脚皮炎实验兔对热原筛选实验合格率的影响。方法将2006、2007年实验室相对湿度记录、实验兔脚皮炎记录及热原筛选实验记录进行汇总统计,并对数据进行生物学分析。结果实验室相对湿度超过70％时,可导致实验兔脚皮炎发病率的升高,二者存在显著相关性（P〈0．01）;有脚皮炎的实验兔可降低筛选实验的合格率,二者存在显著相关性（P〈0．01）;实验兔基础体温的高低,对筛选合格率有显著影响（P〈0．0001）。结论实验兔的脚皮炎发病率与环境相对湿度有显著的正相关性,当实验室相对湿度超过实验兔适宜湿度范围时,可导致其脚皮炎的发病率上升;有脚皮炎的实验兔与无脚皮炎的实验免相比,可显著降低热原筛选实验的合格率。     

不同影响因素对热原实验中兔筛选的影响

目的分析不同影响因素对新西兰兔的初次筛选合格率、二次筛选合格率的影响。方法根据2005版《中国药典》进行测定。结果初次筛选结果中,不同季节、体重值、性别、湿度新西兰兔的筛选率都有显著性差异,筛选时间在7～9月、体重值为1.7～2.0 kg、雄性的新西兰兔、在湿度为61～70%的条件下初次筛选率较高;在二次筛选结果中,不同季节、室温、湿度条件下新西兰兔的筛选率都有显著性差异,筛选时间在1～3月、在室温为22.1～23.0℃、湿度为61～70%的条件下新西兰兔的二次筛选率较高。结论在不同影响因素的条件下,新西兰兔的初次筛选合格率、二次筛选合格率均受到影响。     

EGCG对热应激巴马香猪肠道热休克蛋白以及肠道屏障相关基因表达的影响

本研究旨在探究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)对于热应激巴马香猪小肠中热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)、紧密连接蛋白(tight junction proteins,TJPs)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)等基因表达的影响。25头平均体重为(34.28±1.19)kg的8月龄雄性巴马香猪被随机分成5个处理组,包括TN组(22℃,自由采食)、 PF组(22℃,采食量配对)、 HS0组(35℃,自由采食)、 HS250组(35℃,自由采食+0.025%EGCG)和HS500组(35℃,自由采食+0.05%EGCG)。预实验7 d,正式实验28 d。实验结束后进行屠宰并采集小肠组织样品,检测各组小肠中HSPs、TJPs和TLR-4基因的表达。结果表明：(1)热应激显著增加了小肠中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)基因的表达量,而添加EGCG均显著降低了它...     

探讨热原试验中影响试验数据的因素

目的通过几组试验,分析热原试验中存在常见影响试验数据的几个要素,并提出解决建议。方法对供试品、预选周期、基础体温、家兔的休息周期等多个方面进行统计,总结影响热原数据变化因素。结果家兔升温总和均值随着连续注射批次的增加而有所降低,体温灵敏度变差;合格家兔在4周以内再次预选,合格比例85%以上,6周符合要求的比例为79.1%,9周合格比例降至66.6%;基础体温38.0~38.4℃及39.3~39.6℃区间家兔实验中体温波动幅度≥0.6℃的动物例数较多,38.0~38.4℃区间家兔降温0℃动物数达到50.0%,39.3~39.6℃区间家兔最大升温≥0.4℃的动物数比例较高;家兔冬季基础体温略低于夏季(约0.2℃),休息72~96 h后对家兔基础体温均值、异常体温动物的数量有较好的控制。结论热原检查应尽量采用不同品种供试品交替试验,并通过控制预选兔的使用周期及合理安排家兔实验休息周期,选择基础体温适中的家兔进行试验,以保证热原试验数据的准确性。     

生化药物生产过程中控制热原的方法

热原是微生物的代谢产物 ,是微生物的一种内毒素 ,其主要成分是脂多糖 ,分子量一般为 10 6左右。去除热原的主要方法有 :1 高温法。多在 2 5 0℃加热 30分钟以上。2 酸碱法。用酸或碱进行处理 ,破坏热原。3 吸附法。常用 0 1%～ 0 5 %的活性炭吸附处理。4 层析法。利用离子交换树脂或分子筛凝胶层析处理。5 超滤法。使用超滤装置滤除热原物质。为了保证热原符合规定 ,往往要经过多次实验才能选择合适的方法 ,设计出适宜的...