白消安致大鼠无精子症模型的建立

目的:利用白消安建立SD(Sprague-Dawley)大鼠少精子症动物模型,为治疗人类男性不育症提供实验依据。方法:本研究取6周龄左右SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组通过腹腔注射不同浓度白消安(15、20、30、40、60 mg/kg体重),每个浓度分单次注射和连续10次累计注射两种方式,注射后每隔10d随机取样检测精子浓度、活力、畸形率以及曲细精管内部结构各项指标,30d出现弱精少精等不育症状后,第40d后停止取样,观察白消安对大鼠精子的作用效果。结果:单次注射15-60mg/kg剂量白消安都会使实验大鼠不同程度死亡,连续10 d累计注射剂量15 mg/kg白消安可破坏大鼠睾丸组织的部分精原干细胞,连续10 d累计注射总剂量20 mg/kg是较为理想的实验浓度,可消除全部精原干细胞和大部分支持细胞,30、40、60 mg/kg可致大鼠死亡或睾丸病变充血。结论:白消安对大鼠生殖细胞有毒害作用,通过腹腔注射一定浓度白消安可建立大鼠少精子症模型,可为外源干细胞体内转分化为生殖细胞提供准确的移植时间和实验依据。     

精原干细胞移植及受体制备技术研究进展

精原干细胞移植为研究精子发生、雄性生殖能力及新型转基因技术奠定了基础.尽管已利用小鼠建立了较成熟的移植技术体系,白消安受体制备法和曲细精管及睾丸网移植法已得到广泛应用,但白消安可导致动物较高的死亡率,局部射线照射和无内源性精子发生受体动物的制备费用较昂贵,热处理受体制备法应用范围较窄且效果不稳定;三种移植方法均对操作有较高的技术要求,曲细精管、睾丸输出管移植需要显微注射装置,而睾丸网移植需要超声仪的辅助.而且,移植效果在不同实验间、物种间差异较大,移植效率有待提高,对移植排斥反应的认识也有待进一步深入.对睾丸结构和精原干细胞生物学特性的深入研究,将有助于建立更简单高效的受体制备和移植的方法.     

酮康唑对小鼠肝脏和睾丸生理功能的影响*

目的: 观察不同剂量的酮康唑(KCZ)对昆明小鼠的肝脏和睾丸生理功能的影响。方法: 将 40 只雄性昆明小鼠随机分为 4 组(n=10):正常组、酮康唑低剂量组(30 mg/kg)、酮康唑中剂量组(50 mg/kg)、酮康唑高剂量组(70 mg/kg)。药物组小鼠按0.1 ml/10 g给药体积每日单次皮下注射酮康唑,酮康唑低、中、高剂量组药物浓度各为3 mg/ml、5 mg/ml、7 mg/ml,正常组注射等量生理盐水,连续 3 周。测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),以及睾丸组织 γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)、乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性;HE 染色观察肝脏、睾丸病理组织改变。结果: 与正常组比较,酮康唑组AST、ALT活性显著升高(P＜0.01);γ-GT、ACP、LDH活性显著下降(P＜0.01),且以上指标的改变均随剂量增加而损伤加重。HE 染色显示小鼠肝细胞变性,排列松散,胞质色浅;睾丸曲细精管管腔增大,各级生精细胞、精子数量减少。结论: 酮康唑能导致小鼠肝脏、睾丸组织生理功能损伤与病理组织学改变,升高肝转氨酶水平,降低睾丸特异性酶活性,且损伤程度随剂量的升高而增大。     

睾丸间质细胞在小鼠生精恢复过程中的作用

研究睾丸间质细胞对小鼠生精恢复过程的作用,可以为深入理解睾丸精原干细胞与其微环境(体)细胞间的相互关系提供实验证据。选取8周龄健康C57近交系成年雄性小鼠60只,腹腔注射22 mg/kg白消安建立小鼠精子发生受阻模型,随机分成1,2-二甲磺酸乙烷(ethane 1,2-dimethanesulphonate,EDS)处理组、氟他胺处理组和对照组,每组20只,3 d后分别给予EDS腹腔注射(100 mg/kg)、氟他胺埋植,对照组仅注射溶剂、埋植空管,分别在处理后的1个月内每周采样,Real-time RT-PCR检测CSF1、Gdnf、PLZF和Nanog m RNA表达水平,Gdnf蛋白水平表达,并在4周时进行睾丸组织HE染色,观察组织学变化并对相关指标进行量化分析。结果表明,小鼠睾丸间质细胞去除及雄激素受体阻断均能促进睾丸损伤后的生精恢复过程,但是,受体阻断的效果更强,说明间质细胞除了通过雄激素发挥作用外还直接对生精恢复起着一定的促进作用,这种促进作用可能是通过分泌CSF1等细胞因子来实现的。     

探索Sertoli细胞对去除精原细胞的动态反应

目的探索Sertoli细胞对去除小鼠精原细胞后睾丸的动态反应。方法采用15、30和44 mg/kg的白消安腹腔注射法建立不同程度去除精原细胞的动物模型,处理后5 d和28 d时对睾丸进行组织学检测,评价精子发生状态,并运用实时定量荧光PCR技术检测这两个时期睾丸GDNF、PLZF、Nanog和GFRα1基因mRNA的表达量。结果在白消安处理后第5天,GDNF出现显著升高,且呈剂量依赖趋势,而PLZF与GFRɑ1并无显著变化,睾丸组织学观察亦无明显变化。在白消安处理后28 d时,GDNF、PLZF、Nanog、GFRɑ1基因mRNA相对表达量均出现大幅度的升高,睾丸组织学切片观察显示随着给药剂量的增加,精子发生受到的损伤愈加严重。结论 Sertoli细胞早在白消安处理后第5天就对精原细胞的变化发生了反应,Sertoli细胞分泌GDNF的能力发生代偿性增加,进而刺激精原干细胞自我更新速度加快,体现在Nanog和PLZF水平提高,从而实现精子发生的重建。     

建立小鼠淋巴瘤模型所需环磷酰胺最佳预处理剂量探索

目的:探讨不同剂量环磷酰胺对小鼠肿瘤成模情况的影响,寻找一种简单、有效的建立肿瘤模型的预处理方法。方法:给予BALB/c裸鼠腹腔注射不同剂量环磷酰胺,72小时后再给予小鼠皮下接种淋巴瘤细胞,观察预处理前后小鼠外周血白细胞数量及体重变化情况,以及肿瘤成模率、急性死亡率等。结果:①组1(NS对照组)、组2(100mg/kg×1d)、组3(125mg/kg×1d)、组4(75mg/kg×2d)预处理后体重较处理前无显著性变化,亦无急性死亡情况发生;而组5(125mg/kg×2d)、组6(200mg/kg×2d)、组7(125mg/kg×3d)、组8(250mg/kg×3d)小鼠体重较预处理前明显减轻,且急性死亡率依次为30%、58.3%、50%、75%;②组1和组2小鼠预处理后72小时外周血白细胞数较处理前无明显差异,同时均未成模;而组3、组4、组5、组6、组7、组8小鼠白细胞较预处理前均显著下降,成模率依次为20%、83.3%、60%、33.3%、50%、25%。结论:使用环磷酰胺75mg/kg连续2天腹腔注射的预处理方案,操作简单,成本低廉,通过观察外周血白细胞数和小鼠体重水平等指标即可初步判断建模情况,同时肿瘤成模率高,毒副作用小,是理想的预处理方案。     

5-氟尿嘧啶诱导小鼠化疗性肠黏膜炎模型的建立

目的研究5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导小鼠化疗性肠黏膜炎动物模型。方法采用不同剂量的5-FU单次或连续5 d腹腔注射给予小鼠,每日观察小鼠体重、腹泻情况,并分别于末次给药后72 h或24 h,观察小鼠外周血象及小肠组织病理形态学改变。结果与正常组比较,单次或连续5 d给予5-FU后,各剂量组小鼠出现不同程度的腹泻及体重降低,外周血象白细胞和血小板水平明显降低(P0.05或P0.01),其中单次给药400 mg/kg组、连续给药50,100 mg/kg组出现明显的肠黏膜炎病理特征,100 mg/kg组剂量过高,死亡率达100%。结论单次或连续5 d给予5-FU诱导小鼠肠黏膜炎的作用呈剂量相关性,其中单次给药以400 mg/kg为合适剂量,连续5 d给药以50 mg/kg为合适剂量。     

EP-1对雄性中华姬鼠和黑线姬鼠繁殖力的影响

为了检测左炔诺孕酮-炔雌醚（EP-1）对雄性中华姬鼠和黑线姬鼠的不育效果, 将32只雄性中华姬鼠和30只雄性黑线姬鼠分为 30mg/kg 单剂量组、30mg/kg多剂量组和对照组, 15d 和 45d 后剖检, 比较睾丸、附睾、储精囊、精子密度、睾酮含量及睾丸组织形态的变化。结果发现：给药后第 15 天,两种试鼠的睾丸、附睾、储精囊的重量较对照组明显降低; 精子密度、睾酮含量显著下降; 曲细精管结构破坏明显。给药后第45天,处理组各生理指标继续下降,但与第15天相比差别不显著;单剂量组和多剂量组在两个时间点的差别并不显著。结果表明,EP-1对雄性中华姬鼠和黑线姬鼠的繁殖器官有显著抑制效果,单次给药与多次给药的不育效果差别不大。     

合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用研究

目的探讨合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用。方法将60只健康的雄性性成熟昆明小鼠随机分成3个试验组和1个对照组,各试验组小鼠灌胃540 mg·(kg·d)-1,270 mg·(kg·d)-1和135 mg·(kg·d)-1的合欢皮总皂苷水溶液,对照组自由饮水,灌胃1周后按雌雄比2∶1合笼,继续对雄鼠灌胃至19 d,采集雄性小鼠的血液并测定血液生化指标,剖检灌胃雌性小鼠,统计雌性小鼠的怀孕率,测定雄性小鼠睾丸与附睾的脏器系数及附睾精子活力,并固定睾丸和附睾,研究其组织学变化。结果与对照组相比较,雄性小鼠灌胃合欢皮总皂苷后,导致雌性小鼠的怀孕率降低,睾丸脏器系数和附睾精子活率极显著降低(P<0.01),精子畸形率极显著升高(P<0.01)。光学显微镜下,试验组小鼠睾丸和附睾均有一定程度的损失,睾丸生精细胞排列疏松,间质减少,可见曲细精管内有多核巨噬细胞浸润,各级生精细胞脱落。附睾具正常的管腔结构,但能明显观察到管腔内精子几乎消失。结论合欢皮总皂苷对雄性小鼠具有抗生育作用,主要通过影响精子的生成及破坏生精组织而达到。     

异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型不同方案的比较

目的 比较3种不同方案制备的动物模型,探索稳定、可靠且重复性好的小鼠慢性心力衰竭模型。方法 将25只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组：正常组(ZC组)、实验A组(MA组)、B组(MB组)和C组(MC组)。实验组采取不同制备方案连续注射ISO,其中MA组和MB组为浓度递减造模法,MA组(第1天10 mg/kg、第2天5 mg/kg、第3～30天2.5 mg/(kg·d);皮下注射30 d);MB组(第1天20 mg/kg、第2天10 mg/kg、第3～14天5 mg/(kg·d);皮下注射14 d);MC组(浓度恒定7.5 mg/(kg·d),腹腔注射28 d),构建慢性心衰动物模型。在注射结束后的第2天,计算各组小鼠存活率和成模率情况。通过心脏超声检测心功能,并用ELISA测定血清中NT-pro BNP、IL-6、TNF-α水平。结果 在第30天注射结束后,各实验组虽都能有效诱导慢性心力衰竭,但发现7.5 mg/kg浓度MC组的造模情况最稳定,更适合后续开展中医药相关的心衰研究。结论 ISO制备小鼠慢性心衰模型以恒定7.5 mg/(kg·d),连续腹腔注射28 d为最佳方案。     

Effects of busulfan on murine spermatogenesis: cytotoxicity, sterility, sperm abnormalities, and dominant lethal mutations

The alkylating agent busulfan (Myleran) adversely affects spermatogenesis in mammals. We treated male mice with single doses of busulfan in order to quantitate its cytotoxic action on spermatogonial cells for comparison with effects of other chemotherapeutic agents, to determine its long-term effects on fertility, and to assess its possible mutagenic action. Both stem cell and differentiating spermatogonia were killed and, at doses above 13 mg/kg, stem cell killing was more complete than that of differentiating spermatogonia. Azoospermia at 56 days after treatment, which is a result of stem cell killing, was achieved at doses of over 30 mg/kg; this dose is below the LD50 for animal survival, which was over 40 mg/kg. Busulfan is the only antineoplastic agent studied thus far that produces such extensive damage to stem, as opposed to differentiating, spermatogonia. The duration of sterility following busulfan treatment depended on the level of stem cell killing and varied according to quantitative predictions based on stem cell killing by other cytotoxic agents. The return of fertility after a sterile period did not occur unless testicular sperm count reached 15% of control levels. Dominant lethal mutations, measured for assessment of possible genetic damage, were not increased, suggesting that stem cells surviving treatment did not propagate a significant number of chromosomal aberrations. Sperm head abnormalities remained significantly increased at 44 weeks after busulfan treatment, however, the genetic implications of this observation are not clear. Thus, we conclude that single doses of busulfan can permanently sterilize mice at nonlethal doses and cause long-term morphological damage to sperm produced by surviving stem spermatogonia.     

Establishment of recipient model for spermatogonial stem cells transplantation in Kunming mice

The objective of this study was to establish a recipient model for spermatogonial stem cells (SSCs) transplantation in the Kunming mice after different doses busulfan treatment. The results showed that the most optimal dose of busulfan was 20 mg/kg and the most appropriate time for transplantation was 5–7 wk after busulfan treatment. Then, the cloned fragments existed in the testis of recipient mice after 20 mg/kg busulfan treatment and the offspring with enhanced green fluorescent protein (EGFP) were produced by the transplanting SSCs. Hence, we established the effective recipient model for donor-derived SSCs transplantation in Kunming mice.     

不同剂量博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的差异及动态变化

目的探讨博来霉素诱导小鼠肺纤维化最佳剂量和方法。方法 126只8周龄雄性ICR小鼠,随机分成一次性大剂量模型和多次小剂量模型。一次性大剂量模型分为200 mg/(kg.bw)BLM组、150 mg/(kg.bw)BLM组、100 mg/(kg.bw)BLM组及阴性对照组(DN组),每组18只,分别经尾静脉一次性注射BLM 200、150、100mg/(kg.bw)及生理盐水10 mL/(kg.bw),各组分别于第7、14、21天各处死6只。多次小剂量模型分为每日10 mg/(kg.bw)BLM组及阴性对照组(N组),分别经尾静脉注射BLM 10 mg/(kg.bw)及生理盐水10 mL/(kg.bw),每天1次,连续注射14 d,两组分别于第14、21、28天各处死6只。留取肺组织,观察肺组织病理改变,检测Ⅲ型胶原的含量,观察小鼠体重及生存率。结果①在一次性大剂量模型中,BLM各剂量组肺泡炎症评分及肺纤维化评分与正常组相比,除100 mg/(kg.bw)BLM组和150 mg/(kg.bw)BLM组在第7天的模型差异无显著性外(P>0.05),其余各组差异均有显著性(P<0.05);各个剂量组Ⅲ型胶原的表达面积与正常组相比,除100 mg/(kg.bw)BLM组在第7天的模型差异无显著性外(P>0.05),其余各组均较正常组高(P<0.05),各个剂量组分别在第21天达到高峰,以200 mg/(kg.bw)BLM组第21天组Ⅲ型胶原的表达面积最高;该模型小鼠各剂量组死亡率为0。②在多次小剂量模型中,各组的肺泡炎症与肺纤维化程度与正常组相比差异均有显著性(P<0.05);各组Ⅲ型胶原的表达也均高于正常组(P<0.05),且随着时间的延长呈进行性增加,在第28天达到高峰;该模型小鼠共死亡11只,死亡率为30.56%。结论在本实验中,以尾静脉一次性注射BLM 200 mg/(kg.bw)后第21天诱导建立的ICR小鼠肺纤维化模型成模最好,其小鼠死亡率低,操作简单,有效安全方便的特点使之有希望成为一种复制肺纤维化的理想模型。     

Congenital defects in the offspring of male mice treated with ethylnitrosourea

Daily doses of ENU (25-100 mg/kg) were injected intraperitoneally into ICR strain male mice for 5 days. The males were mated to untreated virgin females of the same strain on days 1-16 and 64-80 after the last dose. Copulations during these periods involve, respectively, treated postmeiotic cells and spermatogonial stem cells. The uterine contents were examined on day 18 of pregnancy for evidence of dominant lethal effects. The fetuses were examined for external and skeletal abnormalities. ENU treatment of either postmeiotic cells or spermatogonial stem cells caused dose-dependent significant increases in the incidence of abnormal fetuses over the control level. The induction rate per live fetus per unit dose in mg/kg by treating spermatogonial stem cells was estimated to be 1.0 X 10(-4), which is 3-fold lower than the rate previously estimated for the same endpoint at the same germ cell stage with MNU. Cleft palate was the most frequent external abnormality in the ENU-treated and the control series. Malformed vertebrae was the most frequent skeletal abnormality in the treated series. Rib fusion was the only skeletal malformation seen in the control series. Dominant lethals were clearly induced when germ cells were treated as postmeiotic cells.     

四氧嘧啶诱发糖尿病模型效果的性别差异

目的了解性别因素对四氧嘧啶诱发糖尿病动物模型的影响,为提高动物模型的复制效率提供实验依据。方法分别给雌、雄比格犬和昆明小鼠注射不同剂量的四氧嘧啶,药后3、7、14、21 d测定血糖值,同时统计实验期间动物的死亡情况。结果给予同等剂量的四氧嘧啶,雌性比雄性动物的血糖升高更快,浓度更高。雌性犬四氧嘧啶的最适造模剂量为40 mg/kg,而雄性犬在此剂量下的模型成功率只有40%,二者差异极显著（70%VS40%,P〈0.01）;雄性犬的最适使用剂量为50 mg/kg,但在此剂量下有高达30%的雌性犬因高血糖而死亡。四氧嘧啶对小鼠的影响与犬基本一致,雌雄鼠的最佳剂量分别为200 mg/kg和250 mg/kg。结论雌性动物对四氧嘧啶的敏感性较雄性动物高,雄性动物在使用四氧嘧啶复制糖尿病模型时,其剂量通常需要较雌性动物高20%左右。     

氯胺酮对小鼠Ⅲ度烧伤死亡率和瘢痕形成的作用

目的观察氯胺酮对小鼠Ⅲ度烧伤死亡率和疤痕形成的作用,为临床应用提供实验依据。方法小鼠背部用95%酒精造成Ⅲ度火焰烧伤,烧伤面积7cm2,烧伤时间30s;氯胺酮用量10～20mg/kg,分别于烧伤后或烧伤前后腹腔注射,对照组注射等量生理盐水,通过烧伤小鼠早期死亡率和烧伤后期瘢痕面积观察其作用。结果 BALB/c和C57BL/6小鼠烧伤后立即、4h、24h腹腔注射氯胺酮20mg/kg,小鼠死亡率分别为42.8%和100%,与对照组无明显差别（P〉0.05）;C57BL/6小鼠烧伤前10min和烧伤后4h、24h注射氯胺酮10mg/kg,小鼠死亡率为100%,与对照组也无差别。烧伤时间减为20s,于烧伤烧伤后立即和24h注射氯胺酮20mg/kg,35d后测定瘢痕面积,治疗组明显小于对照组（P〈0.05）。结论氯胺酮无明显降低小鼠烧伤早期死亡率的效果,但有减少烧伤瘢痕面积的作用,可能与氯胺酮抗炎作用有关。     

6种“桑黄”石油醚提取物的体内抗肿瘤活性

对6种＂桑黄＂的石油醚提取物进行了抗肿瘤体内试验,测定其对H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指数、免疫因子含量和生存率的影响。试验结果表明：粗毛纤孔菌、鲍姆木层孔菌、火木层孔菌和瓦宁木层孔菌的石油醚提取物高、低剂量（100,50 mg/kg）以及黑壳目层孔菌石油醚提取物高剂量（100 mg/kg）对肿瘤均具有一定抑制作用,抑瘤率均〉40%;瓦宁木层孔菌石油醚提取物低剂量组（50 mg/kg）的抑瘤效果最佳,为76.82%,其脾指数、胸腺指数均明显高于阳性组（P〈0.01）,IL 2的含量也明显高于对照组和阳性组,能延长小鼠的生存期;椭圆嗜蓝孢孔菌石油醚提取物也具有一定的抑瘤效果,高、低剂量（100,50 mg/kg）抑瘤率分别为39.30%和36.17%。     

苯肼致小鼠溶血性贫血模型的建立

目的:应用苯肼致小鼠发生溶血性贫血,建立急性溶血性贫血模型,筛选苯肼致小鼠贫血最佳浓度和红细胞移植的最佳时机。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为6组,经腹腔注射不同浓度的苯肼溶液,于注射前和注射后第1、3、5、7、9天采集小鼠外周血进行检测,记录相关指标的变化,比较各组之间的差异,筛选出最佳溶血效果的给药浓度和红细胞移植治疗介入的时机。结果:注射苯肼溶液可使C57BL/6小鼠短期内产生明显的急性溶血性贫血症状,皮肤黏膜颜色苍白;外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积降低;随着苯肼溶液浓度的增加,小鼠体重显著减轻,存活率下降。结果表明,苯肼注射小鼠致贫血的最佳作用浓度为1.2mg/10g体重,小鼠贫血状态可维持7d。结论:建立了小鼠溶血性贫血模型,此模型可应用于红细胞输注效果的评价。     

不同剂量链脲佐菌素腹腔注射制备大鼠糖尿病心肌病模型的病理学观察

建立糖尿病性心肌病（DCM）大鼠模型,观察不同剂量链脲佐菌素（STZ）单次腹腔注射后大鼠心肌和胰腺的病理学变化。用STZ 50 mg/kg、55 mg/kg、60 mg/kg 3种剂量单次腹腔注射,制备糖尿病大鼠模型;以柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射,作为对照。72 h后,测空腹血糖及做口服葡萄糖耐量实验（OGTT）;3周后,HE染色观察各组大鼠胰腺和心肌形态学变化,Masson三色染色观察心肌纤维化改变。OGTT和空腹血糖显示3组存活大鼠糖尿病均成模;3周末,50 mg/kg和55 mg/kg剂量死亡率为25%;60 mg/kg剂量高,达到75%;HE染色显示55 mg/kg剂量组大鼠胰岛明显萎缩,轮廓不清晰,胰岛细胞数量少,心肌细胞肥大、排列紊乱,细胞间隙增大,并有炎症细胞浸润;50 mg/kg组胰岛和心肌也有变化,但无55 mg/kg组明显。心肌Masson染色显示55 mg/kg组心肌内胶原组织明显增多,排列紊乱,分布不均。55 mg/kg剂量的STZ单次注射大鼠腹腔,造模3周可以建立较明显的DCM模型,可为DCM的组织病理学和实验研究提供一个较好的动物模型。